Discusion creada el 20/12/2002

¿Cuál es el método de análisis de Ocratoxina en Café?

Debo iniciar una nueva línea de análisis de Ocratoxina en Café. La verdad es que no tengo mucha experiencia para realizar estos análisis; sé que puedo usar un HPLC con detectror de fulorescencia, pero me gustaría que me enviaran un método para analizarla y salir de este lío.

Sergio Lopez Grio
Sergio Lopez Grio
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16 de Septiembre de 2004

Hola,Sergio:
Trabajo analizando distintas micotoxinas, una de las que analizo es ocratoxina A en pasas, te puedo enviar este protocolo para analisis por HPLC , sera muy parecido ,escribeme una dirección donde enviarlos.Ademas una marca comercial a fabricado un Kit Elisa.
Saludos,Cari

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Patricia Knass Patricia Knass
Director Técnico en agriNEA
16 de Septiembre de 2004
La metodología clásica para determinar ocratoxinas en café hasta ahora era la extracción con columnas de inmunoafinidad y análisis con HPLC, en el último año, sobre todo debido a las nuevas exigencias de la Unión Europea, se ha avanzado mucho en análisis de ocratoxinas, y se desarrollaron columnas de un solo paso para purificar las muestras en menos 30 segundos, para poder analizazarlas luego en el HPLC, la ventaja es la rapidez y desarrollo de las mismas bajo las condiciones de UE, puedes escribirme y te enviaré los protocolos.
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Humberto Hernandez Humberto Hernandez
Gerente de Desarrollo Comercial y Atención al Cliente
19 de Noviembre de 2004

No hay un limite para cafe verde en la comunidad europea. La razon es que la OTA es termo-estable, si la mide en cafe verde se mantendra en tostado y soluble. La comunidad CE le intereza regular lo que el consumidor puede adquirir. Esto pone presion en adquirir materia prima de buena calidad. Vet Brands es el distribuidor de Vicam para Centro America, Venezuela, Ecuador y Chile. El sitema de Ochratest con fluormetro se usa en mi territorio con gran exito. La columna de inmunoafinidad es el mejor metodo en cafe verde en este momento. Si tiene alguna pregunta dejemelo saber hacoendo click sobre mi nombre

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5 de Mayo de 2006

Existen dos métodos principalmente:
1. HPLC con detector de fluorecencia
2. Vicam con extracción de columna de absorción

Ambos métodos fueron comparados por VICAM, y se validaron para determinar si existe diferencia o no, y la conclusión es que no existe diferencia significativa entre ambos.

Pero ambos métodos se vuelven imprácticos porque para la extracción de la ocratoxina es necesario moler el café verde, éste es duro y algunos molinos requieren sistema de enfriamiento constante para evitar quemar la muestra. Esto hace que el análisis sufra retrasos importantes.

Les agradecería si me enviaran información de la ocratoxina en café, y de otras micotoxinas en alimentos para fortalecer mi bibliografía.
Saludos.

Responder
Humberto Hernandez Humberto Hernandez
Gerente de Desarrollo Comercial y Atención al Cliente
5 de Mayo de 2006

En Nicaragua se cuentan con todas la técnicas con columna de inmunoafinidad necesarias para analizar café, ya sea con el fluorómetro o con HPLC. Se puede contactar con UNICAFE, el laboratorio del MAGFOR o la UCA en el laboratorio de Química.
Atentamente.

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Humberto Hernandez Humberto Hernandez
Gerente de Desarrollo Comercial y Atención al Cliente
5 de Mayo de 2006

Marisol,
El mejor metodo para Ochratoxina en cafe verde es el de Ochratest de Vicam, es el que te da mas sensibilidad, ademas de que es el metodo mas usado en la industria del cafe en America Latina. Desafortunadamente cualquier metodo de deteccion de micotoxinas en granos requiere molienda de grano. Esto es debido a que la infestacion de micotoxinas no es homogenea. Si revisas las reglametacionnes de USDA en granso y de la CE en cafe, especialmente OTA, veras que todos los metodos empiezan con una muestra molida de grano verde para homogenizar la muestra representativa del lote. Si vas a hacer un analisis y tienes problemas para moler el cafe debes de usar un molino de discos. En Mexico venden unos muy buenos y baratos que hacen el trabajo perfecto. La columna de VICAM en cafe verde se usa en todos los paises que producen cafe y el metodo es el mas practico, excato y confiable del mercado.

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18 de Mayo de 2006
Desde luego que puedes utilizar un kobra cel por HPLC, para cuantificar ocratoxina en cafe, pero existen alternativas en el mercado, sin necesidad de utilizar un equipo como el cromatógrafo de líquidos de alta resolución. Se trata del método de ELISA, por detección de la densidad óptica, en menos de 30 min., la metodología es muy sencilla.
Mandame un email y nos ponemos en contacto.
Responder
Humberto Hernandez Humberto Hernandez
Gerente de Desarrollo Comercial y Atención al Cliente
18 de Mayo de 2006

El método de Elisa para granos es poco recomendable. Tiene un margen de error muy alto, y además es caro pues tienes que correr controles. En café es particularmente impráctico pues los niveles de rechazo de la CE son muy bajos. Esa es la razón por la que la columnna de inmunoafinidad de Vicam es más usada que el Elisa.

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8 de Agosto de 2006
Hola. Lei los foros sobre ocratoxina A (OTA). Estoy estudiando esta molécula durante el proceso de trefacción en un proyecto de doctorado, y estoy interesada en los métodos de detección de OTA en café verde, tostado y soluble. Se que el método mayormente utilizado es el de HPLC utilizando columna de inmunoafinidad, y el método de fluorescencia sería un método rápido y barato. Quisiera saber si estos métodos ajustan sus límites de detección a nivel mundial, o sólo en las zonas de la Unión Europea, y cuáles son los límites máximos de esta toxina en café verde, soluble y tostado, o bien dónde puedo encontrar esta información.
También quisiera saber o profundizar un poco más en los métodos básicos de sustancias tóxicas.
Muchas gracias, y agradezco su ayuda.
Responder
Dan Kaplan Dan Kaplan
Dr. en Química Biológica
R-Biopharm Latinoamerica S.A. R-Biopharm Latinoamerica S.A.
Bs As, Buenos Aires, Argentina
10 de Agosto de 2006
Estimada Olaya,

Si bien aún no existe un límite de aceptación regulado por la CE, se encuentra en discusión desde el 2002 un límite entre 8 y 10 ppb para café verde.
La mejor técnica para determinar ocratoxina en café es mediante columnas de inmunoafinidad y HPLC. Sin embargo, existen métodos de rastreo que son más sencillos, como los ELISA y la fluorometría. En estos últimos, siempre es importante aclarar que un positivo es en realidad un presunto positivo, y que es necesario confirmarlo por HPLC.
Si estás interesada en recibir los protocolos de cualquiera de estas técnicas, comunícate por email que gustosos te las enviaremos.

Atentamente,

Dan Kaplan
Responder
Humberto Hernandez Humberto Hernandez
Gerente de Desarrollo Comercial y Atención al Cliente
11 de Agosto de 2006

El mejor método para separar la OTA del café es la columna de inmunoafinidad Ochratest, el HPLC y el fluorómetro de Vicam son sólo lectores. Los resultados que se obtienen en café verde con el fluorómetro y el HPLC son los mismos. Para el café tostado sólo se puede usar el HPLC, pues el filtrado es muy difícil por los pigmentos. Los métodos de ELISA no son aptos para café, el ELISA es inexacto por naturaleza, y da resultados en rangos no exactos. Aún se está discutiendo si la OTA se elimina en el tostado y en el café soluble o el descafeinado, por eso no han dado una regulación en café verde. Pero esto es lo que sí se sabe, la temperatura para neutralizar la OTA es más elevada que el tostado o el lifolizado. El descafeinar el café puede disminuir la OTA, pero los estudios son contradictorios. El consumo de café está creciendo en cafés tostados, no en los descafeinados ni solubles. Si requieren datos concretos acerca de los trabajos que tenemos en OTA en café verde en varios países, me pueden contactar y se los proporciono.

Responder
14 de Agosto de 2006
He trabajado en maíz, sorgo, arroz con extracción columnar (EC) y cromatografía de capa delgada (CCD) logrando buenas aproximaciones en cuanto a contenido presuntivo de la muestra, creo que lo más importante en este caso (usando este sistema un poco antiguo, pero económico), es obtener estándares para confirmar con una sencilla lampara de luz ultravioleta.
Responder
Humberto Hernandez Humberto Hernandez
Gerente de Desarrollo Comercial y Atención al Cliente
14 de Agosto de 2006

Ivan,
La ventaja del método Ochratest en el fluorómetro es que te evitas el problema de los estándares y la parte luz. La columna de inmuno afinidad, el estandar de calibración de Vicam y el fluorómetro te dan resultados comparables a los de un HPLC. Es una medición directa.

Responder
Dan Kaplan Dan Kaplan
Dr. en Química Biológica
R-Biopharm Latinoamerica S.A. R-Biopharm Latinoamerica S.A.
Bs As, Buenos Aires, Argentina
8 de Noviembre de 2007
Estimados Foristas,

Cómo mencioné anteriormente la metodología más aceptada internacionalmente (tanto en América Latina como EEUU y Europa) para la determinación de OTA en café, tanto verde, tostado ó soluble es la purificación por columna de inmunoafinidad y cuantificación por HPLC. Existen métodos alternativos como la fluorometría y el ELISA que son adecuados para aquellos laboratorios que no cuenten con un HPLC.

Existen protocolos utilizando columnas de inmunoafiniodad previo el ELISA que mejoran mucho la especificidad del sistema. A aquellos que lo soliciten, les podemos enviar protocolos, artículos y ensayos de validación publicados en diversas revistas científicas.

Quisiera hacer notar a los organizadores del foro, que no se debería permitir en el mismo hacer mención a marcas comerciales.
Saludos.


Nota de la Redacción:


Por gentileza del Dr. Dan Kaplan ponemos a disposición de Uds. sobre Método de Validación para la Determinación de Ocratoxina A en Café en idioma INGLÉS. Para acceder a ella hacer CLICK AQUI (archivo en formato PDF)
Responder
Gonzalo Leon Gonzalo Leon
Director
8 de Noviembre de 2007
Yo pienso que no hay problema en mencionar marcas comerciales. Lo único que me llama poderosamente la atención es la participación del Sr. Humberto Hernández que asegura fehacientemente que el mejor método es con la columna Ochratest. Para su conocimiento, las características de los productos son lo que marcan a uno mejor que el otro y sobre esta base le quiero mencionar al Sr. Hernández la diferencias entre las columnas de Vicam (Ochratest) vs. las columnas Ochraprep de Rhone Diagnostics, para que vea que si hay mejores productos que los que él menciona:
La capacidad de las columnas Ochraprep (2000ng) es mayor que las de Vicam-Ochratest (500ng), esto garantiza resultados más exactos a niveles de contaminación tanto altos como bajos. La alta carga de anticuerpo también contribuye a mayores recuperaciones con matrices difíciles, como sería el café verde.
Las columnas Ochraprep no se ven afectadas por la cafeína, por lo tanto no se requieren adicionalmente columnas de phenyl silane, por lo que también se obtienen resultados más exactos y reproducibles con muestras de café.
Las columnas Ochraprep han sido evaluadas en muchas publicaciones.

Yo solo le pediría a los participantes del foro que cuando hagan afirmaciones contundentes sobre un producto en articular, como las que hace el Sr. Hernández sean capaces de proporcionar datos duros para pasar de los dichos a los hechos.

Aquellos interesados pueden pedir metodología e información adicional con un servidor.
Responder
7 de Julio de 2020
Gonzalo Leon Agradezco enviarme información.
Responder
Dan Kaplan Dan Kaplan
Dr. en Química Biológica
R-Biopharm Latinoamerica S.A. R-Biopharm Latinoamerica S.A.
Bs As, Buenos Aires, Argentina
8 de Noviembre de 2007
Estimado Sr. León,
Le agradezco sus comentarios y afirmaciones con las que concuerdo plenamente. Como Ud. menciona, disponemos de gran cantidad de bibliografía que respaldan a nuestros productos.
Sin embargo, uno de las políticas de participación en estos foros es no incluir anuncios publicitarios de cualquier tipo, explícitos o no. Creo que mientras esta política este vigente, debería ser respetada por todos los foristas.
Lo saludo atentamente.
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10 de Diciembre de 2007
Es verdad que las metodologías elisa no funcionan con matrices pigmentados en este caso café, pero si se limpia la muestra con una columna sea la marca que sea se puede trabajar muy bien con kits elisas, aclarando que los costos por elisas son mucho mas económicos que los nombrados en este foro.

Saludos
Responder
Andres Pizarro Aguilar Andres Pizarro Aguilar
Gerente Comercial para América Latina
19 de Febrero de 2010
Estimados amigos del foro:

En Costa Rica se tiene un cuidado estricto sobre el café en cuanto al control y monitoreo de Ocratoxina A. Se han utilizado diferentes métodos para estos análisis, y se ha llegado a la conclusión de que el método de extracción con Columnas de Inmunoafinidad con medición por fluorometría, ha sido el más sensible, exacto, seguro y práctico de utilizar.
El CICAFE es el Instituto Oficial de Análisis del café costarricense, siendo el método de VICAM el que se utiliza para estas determinaciones.
Ciertamente, como lo mencionan algunos de los foristas, el método de VICAM ha demostrado ser el más seguro, ya que no existe posibilidad de falsos positivos, generando un resultado exacto y confiable.

Cordial saludo.
Responder
Patricio R. Perrotta Patricio R. Perrotta
Bioquímico - Dr. en Ciencias Químicas
23 de Febrero de 2010
Hola a todos, entiendo que el método oficial para la determinación de Ocratoxina A (OTA) en grano de café según la IUPAC es HPLC, en lo que tengo duda es en el método de extracción de la micotoxina (OTA) de la matriz (café), pienso que se puede extraer mediante columnas de inmunoafinidad (IAC) o con cartuchos C-18 SPE.
También existen otros métodos para su determinación (ELISA) y otros en desarrollo (sensores electroquímicos) que presentan buenas cifras de mérito (sensibilidad, límite de detección, de cuantificación, precisión, exactitud, etc)
Responder
2 de Abril de 2020

Patricio R. Perrotta
Hola Patricio, Serias tan amable de enviarme el método de analisis de OTA en café,
Gracias
edmatus@yahoo.com.ar

Responder
Juan Carlos Flores N. Juan Carlos Flores N.
Médico Veterinario
15 de Marzo de 2010
El método a usar dependerá de los recursos de tu empresa y de lo que solicite tu cliente.
Si eres un laboratorio oficial o te exigen la más alta precisión, busca un método oficial europeo, como por ejemplo EN 14132 de café tostado (esta la 2003 y una actualización mas reciente) lo que supone que tengas un equipo HPLC, uses calibrantes, columnas de inmunoafinidad, etc. Como se ha visto en el foro, encontraras empresas que venden productos de alta calidad y disponen de personal bien capacitado.

El uso de columnas de inmunoafinidad y la detección por fluorometría tiene como garantía la experiencia de muchos usuarios en diferentes países, facilidad de uso y un menor costo de implementación aunque como se ha visto en el foro, es importante que veas si el distribuidor de tu país puede responder todas tus preguntas técnicas y sepa corregirte en los errores.

El uso de columnas de inmunoafinidad y la detección por ELISA o el solo uso de ELISA son alternativas como control interno sobre todo si ya conoces que muchas de las muestras que recibes están fuera del rango aceptable y necesitas de un método screening de bajo costo que te permita detectarlas y descartarlas.

Es importante que tengas muestras con niveles de ocratoxina muy bajos y evaluados por un laboratorio certificador, a fin de que puedas ver cuáles de las diferentes alternativas te da los resultados más cercanos.
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