Relación entre aislamiento y frotis a partir de materia fecal para detectar brachyspira spp

El género Brachyspira (B.) involucra bacterias anaerobias Gram negativas de morfología espiroquetal, dentro del cual hay especies inocuas y otras patógenas tanto para animales como para el hombre. En producción porcina, B. hyodysenteriae y B. pilosicoli producen la disentería y la espiroquetosis intestinal porcina, respectivamente, mientras que B. murdochii y B. innocens, previamente reconocidas como inocuas, podrían producir lesiones leves (Hampson, 2012). Además, otras espiroquetas no reconocidas podrían estar presentes en la materia fecal (Patterson y col., 2013).

Si bien, el aislamiento junto a pruebas bioquímicas permite identificar la bacteria, el procedimiento es fastidioso y lento. Ante esto, la tinción de frotis de materia fecal ha sido reportada como de alta correlación con el aislamiento en animales con disentería porcina, aunque este método no sería suficiente por sí solo para el diagnóstico definitivo (Olson y Fales, 1983). El objetivo de este trabajo fue contrastar la detección de Brachyspira por bacteriología en relación a la bacterioscopía a partir de materia fecal de cerdos sin signos clínicos manifiestos.

 

Se procesaron 293 muestras de materia fecal de cerdos de 22 semanas de edad. De cada materia fecal se realizaron frotis, que fueron coloreados con tinción de Gram y se observó, por microscopía óptica (100X), la presencia y cantidad de espiroquetas en 10 campos. Las mismas muestras se sembraron en agar sangre con los antibióticos colistina, espectinomicina y vancomicina, y se cultivaron en anaerobiosis a 42ºC por 7 días. Ante la presencia de β hemólisis y/o pátina en las placas, se realizaron frotis que fueron coloreados con Gram para visualizar las espiroquetas y se purificaron las cepas mediante pasajes sucesivos en agar sangre sin antibióticos.

La identificación de las distintas especies se realizó mediante pruebas bioquímicas. Se calculó la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP), valor predictivo negativo (VPN) y la concordancia entre las pruebas mediante el cálculo del valor kappa (Epidat 3.1).

 

RESULTADOS

Mediante bacterioscopía se observaron 125 frotis positivos (43%) y el promedio de espiroquetas por campo fue de 0,3. En el 74% de los frotis positivos coincidentes con aislamientos había de 1 a 3 espiroquetas por preparado, mientras que en el 26% restante había más de 4 espiroquetas. Se obtuvieron un total de 108 aislamientos (37%) de Brachyspira spp y las especies aisladas fueron identificadas como B. innocens, B. murdochii y B. pilosicoli. En la tabla 1 se puede observar la relación entre aislamientos y tinción.

La tinción de Gram mostró una sensibilidad del 54% y una especificidad del 64% con respecto al aislamiento (95% IC 43.84-63.57 y 56.59-70.98, respectivamente). El VPP fue del 46% y el VPN del 70%. El valor kappa entre ambas técnicas fue de 0,167 (acuerdo insignificante).

Tabla 1: Resultados de aislamientos y frotis a partir de materia fecal

 

Las tinciones realizadas a partir de muestras de materia fecal o de mucosa colónica en casos clínicos de disentería porcina permiten tomar a la bacterioscopía como un recurso rápido para realizar un diagnóstico presuntivo (Olson y Fales (1983), mientras se espera por el resultado del cultivo convencional o diagnóstico molecular. Sin embargo, en el presente trabajo, donde las muestras provenían de animales sin signos clínicos y la prevalencia de aislamientos fue del 37%, la observación microscópica resultó de baja sensibilidad. Además, la correlación entre ambas pruebas diagnósticas (valor kappa) fue insignificante.

Las diferencias en el resultado de ambas técnicas puede ser explicado, en el caso de un cultivo positivo ante un frotis negativo por las bajas cargas bacterianas en animales portadores de Brachyspira spp. Mientras que un frotis positivo ante un cultivo negativo, según Patterson y col. (2013) podría deberse a Brachyspira que no son viables bajo las condiciones de cultivo utilizado o a la presencia de bacterias de otros géneros con morfología similar. Si bien, Olson y Fales (1983) plantean que en casos de disentería porcina, a mayor número de espiroquetas por campo hay mayor proporción de cultivos positivos, esta relación no fue encontrada en el presente estudio. Podemos destacar que el VPN elevado refleja de que en un frotis donde no se observan espiroquetas es muy probable que no haya presencia de Brachyspira en la muestra.

En conclusión, la baja correlación entre las técnicas diagnósticas evaluadas en animales sin signos clínicos manifiestos, tiene implicancia en la elección de métodos complementarios para la detección de Brachyspira, sobre todo cuando se quiera establecer medidas eficaces de vigilancia o control.