Resumen
El objetivo consistió en evaluar los efectos de proporcionar sombra y sombra combinada con enfriamiento en la producción, la actividad de la vaca, el metabolismo y la expresión genética expresión genética de las vacas lecheras Holando de lactancia tardía en condiciones de estrés térmico moderado.
Cuarenta y ocho vacas multíparas Holando multíparas se utilizaron en un ensayo de diseño en bloque completamente aleatorizado y se asignaron aleatoriamente a 1 de 3 tratamientos: control (CTL), sin acceso a la sombra; acceso a la sombra artificial (SOM); y sombra combinada con refrigeración por evaporación (SAV). Los resultados se analizaron mediante un procedimiento mixto con medidas repetidas.
No se observaron diferencias en la Ingestión de Materia Digestible-IMD. La producción de leche no fue diferente entre los tratamientos, pero la concentración de lactosa fue mayor en SAV. Los tratamientos CON y SOM tuvieron mayores pérdidas de peso corporal que SAV. Las vacas de control pasaron menos tiempo pastando. Los tratamientos CON y SAV tuvieron temperaturas rectales más altas que SAV, mientras que CON tenía la tasa de respiración p.m. más alta. Las vacas de control tenían mayores niveles de insulina en suero. Las vacas de control y las SOM tenían mayores concentraciones de BHB y urea y menores concentraciones de glucosa en comparación con SAV. La expresión hepática de los genes PCK1, PDK4 y HP estaba regulada a la baja en SOM y SAV en relación con el control. La expresión hepática de NFKB1 estaba regulada a la baja, mientras que la de SOCS2 estaba regulada al alza, en SAV en comparación con CON.
A pesar de la ausencia de efectos del tratamiento en las variables productivas, los cambios en los perfiles sanguíneos y en la expresión hepática de los genes entre los tratamientos. Estos resultados sugieren que la sombra combinada con el enfriamiento por evaporación fue eficaz para aliviar los efectos negativos del estrés térmico.
Introducción
El estrés por calor (EC) causa importantes pérdidas económicas en todo el mundo (St Pierre, Cobanov, & Schnitkey, 2003). Se estima que la problemática se va a agravar debido a que la temperatura a nivel global está aumentando al igual que la frecuencia e intensidad de olas de calor (Beniston et al., 2007), y también debido a que los programas de mejoramiento genético están seleccionando animales más productivos que son más sensibles al EC (Ravagnolo, Misztal, & Hoogenboom, 2000);(Kadzere, Murphy, Silanikove, & Maltz, 2002).
El estrés por calor ocurre cuando las condiciones del ambiente no le permiten al animal mantener su temperatura corporal dentro de valores fisiológicos normales (Bligh, 1973). En esta situación el animal desencadena mecanismos con el objetivo de mantener la homeotermia y se alteran, entre otros procesos, el comportamiento, el consumo y la producción de leche (West, 2003;(Lance H. Baumgard & Rhoads, 2012). La producción de leche disminuye porque los animales reducen su consumo con el objetivo de producir menos calor de fermentación (Wheelock, Rhoads, VanBaale, Sanders, & Baumgard, 2010);(R. P. Rhoads, Baumgard, & Suagee, 2013) y también porque la glucosa, que en situaciones normales se utilizaría para sintetizar lactosa y consecuentemente estimular la producción de leche, se utiliza como fuente de energía (O’Brien, Rhoads, San ders, Duff, & Baumgard, 2010);(Kvidera et al., 2017).
Una de las estrategias de manejo más utilizadas para disminuir los efectos negativos del EC es la modificación del ambiente a través de sombras y sistemas de refrigeración. Modelizaciones realizadas en los Estados Unidos, estiman que las pérdidas económicas producto del EC, se pueden reducir hasta en un 40% si se implementan medidas de mitigación (St-Pierre et al., 2003). (Valtorta, Leva, & Gallardo, 1997) y (Román, Saravia, Astigarraga, Bentancur, & La Manna, 2017) encontraron menores frecuencias respiratorias y temperaturas rectales en vacas le cheras que tuvieron acceso a sombra comparadas con vacas que no tuvieron (Román et al., 2017), también encontraron que vacas con acceso a sombra y a sombra combinada con aspersión y ventilación presentaban mayores consumos de materia seca y mayores producciones de leche.
Chen et al., (1993) y Tarazón-Herrera et al., (1999) encontraron mejores respuestas productivas en vacas con acceso a sombra combinada con “evaporative cooling” que en vacas que solo tenían acceso a sombra.
La lactancia avanzada es un momento importante en la vida productiva de la vaca lechera ya que antecede al periodo de transición en el que acontecen grandes desafíos metabólicos (Mann et al., 2016). Vacas que llegan al periodo seco con baja condición corporal tienen comprometido su sistema inmune (Sordillo & Mavangira, 2014) y son más susceptibles a sufrir problemas en el periparto (Heuer, Schukken, & Dobbelaar, 1999) (Hoedemaker, Prange, & Gundelach, 2009) ;(Roche et al., 2015). En sistemas pastoriles estos efectos pueden ser más marcados.
El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del uso de sombra y sombra combinada con aspersión y ventilación sobre la producción, composición de la leche, y expresión génica en vacas Holando en lactancia avanzada.
Materiales y métodos
El experimento fue revisado y aprobado por el Comité de Ética y Bienestar Animal de INIA.
Se llevó a cabo en la Unidad de Lechería de INIA La Estanzuela, desde el 9 de enero al 9 de marzo de 2015.
Diseño experimental, animales y manejo
El experimento consistió en un diseño en bloques completamente aleatorizado, en el cual 48 vacas multíparas de parición invernal fueron bloqueadas por días en lactancia (197 ± 48 días), número de lactancias (2,4 ± 1,3), condición corporal (CC; 2,8 ± 0,23), peso vivo (PV; 536 ± 41 kg) y nivel de producción previa y asignadas al azar a cada uno de los siguientes tratamientos:
- Control (CTL) (n=16): Encierro en un corral de tierra desde el ordeñe de la mañana hasta las 20:00 horas sin ninguna medida de mitigación del estrés por calor.
- Sombra (SOM) (n=16): Encierro en un corral de tierra desde el ordeñe de la mañana
Cuadro 1. Ingredientes y composición química de la dieta.
hasta las 20:00 horas con acceso ilimitado a sombra artificial.
- Sombra + aspersión + ventilación (SAV) (n=16): Encierro en un corral de tierra desde el ordeñe de la mañana hasta las 20:00 horas con acceso ilimitado a sombra artificial más dos sesiones de aspersión y ventilación en la sala de ordeñe: una a la salida del ordeñe de la mañana y otra antes del ordeñe de la tarde.
La sombra fue provista con una malla plástica de color negro con un 80% de intercepción de la radiación. La estructura sobre la cual estaba instalada tenía orientación este - oeste, 3,5 m de altura en el extremo sur y una declinación de 15% hacía el norte. El área de sombra disponible por vaca fue de 4,5 m2.
Los animales fueron ordeñados dos veces por día (a las 5:00 y a las 15:00 horas).
La alimentación fue similar para los animales de los 3 tratamientos y consistió en:
- Balanceado comercial en comederos indi viduales en la sala de ordeñe.
- Ración parcial mezclada (RPM) durante el encierro diurno en comederos grupales.
- Pastoreo desde las 20:00 horas hasta el ordeñe de la mañana.
Las dietas fueron formuladas para cubrir los requerimientos y alcanzar una producción individual diaria de 22 litros de leche (NRC., 2001). En Cuadro 1 se describen los ingredientes y la composición química de la dieta suministrada.
Las vacas del tratamiento SAV recibieron diariamente dos sesiones de aspersión y ventilación en la sala de ordeñe. Cada sesión consistió en 2 series de 2 minutos de aspersión (caudal 300 litros/hora) seguidos de 15 minutos de ventilación (ventilador Magnum 52”, GEA, 32980 CFM, altura: 3 m, diámetro: 1,3 m).
Mediciones
Caracterización del ambiente
Para caracterizar el ambiente térmico durante el período experimental se utilizó el Índice de temperatura y humedad (ITH; (Armstrong, 1994).
ITH = (1,8 Ta + 32) – (0,55 – 0,55 HR) × (1,8 Ta – 26)
donde: Ta = temperatura del aire (°C); HR = humedad relativa del aire (%).
EL ITH se calculó utilizando datos de la estación meteorológica de INIA, ubicada cerca del lugar del estudio.
Producción y composición de la leche
La producción individual de leche se registró diariamente. Se tomaron 3 muestras de leche semanales (compuestas por leche del ordeñe am y pm) para determinar la composición química y la calidad sanitaria de la misma. Se determinaron los contenidos de grasa butirosa, proteína bruta, lactosa, urea y recuento de células somáticas.
Consumo
Se midió el consumo individual en 10 animales de cada tratamiento por un periodo de 3 días consecutivos (9 al 11/02). Para medir el consumo de RPM los animales fueron ubicados en corrales individuales (60m2/vaca) con acceso a agua y acceso a sombra (para SOM y SAV). El consumo de ración se estimó por diferencia entre el alimento ofrecido y remanente.
El consumo de balanceado se midió en la sala de ordeñe por diferencia entre ofrecido y remanente. Para estimar el consumo de pastura los animales fueron colocados en parcelas individuales. Se realizaron cortes para estimar la disponibilidad de pastura y se definió el tamaño de parcela que asegure una asignación de 10 kg MS/vaca.
El consumo se estimó por diferencia entre la biomasa inicial y la biomasa post pastoreo según (Haydock & Shaw, 1975). Se utilizó un marco de 0,1 m2. Se identificaron 3 puntos en la escala de biomasa para pre pastoreos y 3 para post pastoreos. Se cortó el forraje de cada marco al ras del suelo. Se evaluaron 10 marcos en pre pastoreo y 10 en post en cada parcela individual. Todos los alimentos fueron muestreados. Se secaron en estufa a 65°C y se molieron con una malla de 1 mm. Se realizaron muestras compuestas semanales para cada alimento para determinación de FDN, FDA, LDA, proteína cruda y cenizas.
Comportamiento
Se realizaron observaciones de comportamiento animal durante 4 periodos de 24 horas cada uno. Todos los animales fueron observados cada 15 minutos. Se asumió que entre cada observación los animales permanecían realizando la misma actividad. Las actividades registradas fueron:
- Comiendo RPM (desde ordeñe am a 20:00 horas).
- Pastoreando (desde las 20:00 horas al ordeñe am).
- Echada.
- Rumiando.
- Bebiendo.
Peso vivo y condición corporal
Todos los animales se pesaron cada 15 días después del ordeñe de la mañana sin desbaste previo. Ese mismo día se determinaba la condición corporal (escala de 1 a 5; (Ed monson, Lean, Weaver, Farver, & Webster, 1989). Durante todo el experimento la deter minación fue realizada por el mismo obser vador previamente entrenado.
Frecuencia respiratoria y temperatura rectal
La frecuencia respiratoria (FR) y la temperatura rectal (TR) se midieron dos veces por semana luego del ordeñe de la mañana y antes del ordeñe de la tarde. La FR se determinó visualmente contando los movimientos del flanco derecho durante 1 minuto. La TR se midió con un termómetro digital (precisión ± 0,1 °C).
Metabolitos, enzimas y hormonas en sangre
Se extrajeron muestras de sangre semanales de todas las vacas una vez por semana de la vena yugular. Se determinaron las concentraciones en suero de glucosa, colesterol, NEFA, betahidroxibutirato, urea, al búmina, proteínas totales, enzima aspartato transaminasa (AST), insulina, IGF1 y hapto globina.
Expresión génica en hígado
Se realizaron biopsias hepáticas para estudiar la expresión de genes relacionados con el metabolismo de los carbohidratos, el estrés y el sistema inmune (Cuadro 2).
Cuadro 2. Nombre y función de los genes.
Se realizaron las biopsias de hígado a 7 animales de cada tratamiento. Las biopsias fueron realizadas con anestesia local siguiendo el procedimiento propuesto por (Hoff, Tox, & Budd, 2012). La abundancia en la transcripción de cada gen se determinó por PCR en tiempo real (Graugnard et al., 2013).
Análisis estadístico
Los datos fueron analizados según un proce dimiento para modelos mixtos (Proc Mixed; SAS Institute, 1996). El modelo para la mayoría de las variables fue:
Yijk = µ + Cov + B(A)i + Tratj + Fechak + (Trat x Fecha)jk + Eijk
Donde: Yijk es la variable respuesta, µ es la media, cov es el efecto de la covariable (producción de leche o composición del mes anterior), Bi es el efecto del bloque (1 a 16), Tratj es el efecto del tratamiento (CTL; SOM; SAV), Fechak es el efecto de la fecha de medición (según corresponda), (Trat x Fecha) jk es el efecto de la interacción Trat x Fecha y Eijk es el error experimental. El animal (A) anidado dentro del bloque fue considerado el efecto aleatorio.
Resultados
Caracterización del ambiente
En la Figura 1 se presenta la evolución de los ITH medio, mínimo y máximo durante el periodo experimental. Los valores ITH medio, mínimo y máximo promedio del periodo experimental fueron 69,8, 53,1 y 82,6 res pectivamente. De todo el periodo, hubo un 33% del tiempo con valores de ITH medio por encima 72, valor considerado crítico para vacas lecheras en producción.
Figura 1. Condiciones ambientales (ITH medio, mínimo y máximo) del periodo experimental y umbrales críticos inferior y superior (68 y 72 respectivamente).
Producción y composición de la leche
No se encontraron diferencias significativas en producción de leche (kg/día) ni en leche corregida por grasa al 4% (P > 0,05; Cuadro 3). El tratamiento SAV mostró un mayor contenido de lactosa (P < 0,05) y una tendencia a menor contenido de grasa butirosa (P < 0.10).
El contenido de proteína fue similar entre tratamientos (P > 0,05). Sin embargo, el tratamiento SOM presentó una producción de proteína inferior (P < 0,05).
Cuadro 3. Producción y composición de la leche de vacas Holando en lactancia avanzada bajo diferentes medidas de mitigación del estrés por calor.
1 Tratamientos: CTL = control; SOM = sombra; SAV = sombra + aspersión y ventilación.
2 Significancia del tratamiento, fecha e interacción tratamiento x fecha: NS, P > 0,05; *, P < 0,05; †, P < 0,10.
3 Error estándar de la media.
4 Leche corregida por grasa al 4%. Medias seguidas de letras distintas difieren. Letras mayúsculas indican tendencias (P < 0,10) y minúsculas indican diferencias sig nificativas con P < 0,05.
Consumo
En la Cuadro 4 se presentan los resultados obtenidos en consumo. El consumo de materia seca total (CMS) (tanto en kg MS/día y en % del peso vivo), el consumo de concentrado, el consumo de PMR y la eficiencia de conversión fueron similares entre tratamientos (p > 0,05). Los tratamientos SOM y SAV presentaron una tendencia (P < 0,10) a mayor consumo de pastura en kg MS/día. Sin embargo, cuando el consumo de pastura se expresó en % del PV no hubo diferencias entre tratamientos (P > 0,05).
Cuadro 4. Consumo de materia seca total, consumo de cada componente de la dieta y eficiencia de conversión de vacas Holando en lactancia avanzada bajo diferentes medidas de mitigación del estrés por calor.
1Tratamientos: CTL = control; SOM = sombra; SAV = sombra + aspersión y ventilación.
2 Error estándar de la media.
3 Significancia del tratamiento: NS, P > 0,05; †, P < 0,10.
4 Consumo de materia seca total.
5 Eficiencia de conversión = LCG 4% (kg)/CMS (kg DM)
Medias seguidas de letras distintas presentan diferencias (P < 0,10).
Comportamiento
Las variables relacionadas con el comportamiento animal resultaron similares entre tratamientos (Cuadro 5; P > 0,05), con excepción del tiempo de pastoreo. El mismo resultó significativamente inferior en animales del tratamiento CTL (P < 0,001).
Cuadro 5. Comportamiento (en minutos por día) de vacas Holando en lactancia avanzada bajo diferentes medidas de mitigación del estrés por calor.
1Tratamientos: CTL = control; SOM = sombra; SAV = sombra + aspersión y ventilación.
2 Significancia del tratamiento, de la fecha y de la interacción tratamiento x fecha: NS, P > 0,05; *, P < 0,05; **, P < 0,01; ***, P < 0,001.
3 Error estándar de la media.
Medias seguidas de letras distintas son diferentes (P < 0,001).
Peso vivo y condición corporal
El uso de medidas de mitigación no afectó el PV, la CC ni la variación de CC durante el periodo experimental (P > 0,05; Cuadro 6). Sin embargo, hubo un efecto sobre la variación de PV durante el periodo experimental: las vacas del tratamiento SAV perdieron menos PV que las de los otros tratamientos (P < 0,05).
Cuadro 6. Peso vivo, condición corporal y sus variaciones a lo largo del periodo experimental de vacas Holando en lactancia avanzada bajo diferentes medidas de mitigación del estrés por calor.
1Tratamientos: CTL = control; SOM = sombra; SAV = sombra + aspersión y ventilación.
2 Significancia del tratamiento, de la fecha y de la interacción tratamiento x fecha: NS, P > 0,05; *, P < 0,05.
3 Error estándar de la media.
4 Condición corporal: escala de 1 a 5 puntos.
5 Variación de peso vivo a lo largo del periodo experimental.
6 Variación de condición corporal a lo largo del periodo experimental.
Medias seguidas de letras distintas son diferentes (P < 0,05).
Frecuencia respiratoria y temperatura rectal
El uso de medidas de mitigación no afectó la frecuencia respiratoria en la mañana (Cua dro 7; P > 0,05) pero si en la tarde. Animales del tratamiento CTL presentaron una FR significativamente superior (P < 0,05).
La temperatura rectal en la mañana fue similar entre tratamientos (P > 0,05) pero en la tarde fue inferior en animales del tratamiento SAV (P < 0,05).
Cuadro 7. Temperatura rectal (°C) y frecuencia respiratoria (respiraciones/minuto) de vacas Holando en lactancia avanzada bajo diferentes medidas de mitigación del estrés por calor.
1Tratamientos: CTL = control; SOM = sombra; SAV = sombra + aspersión y ventilación.
2 Significancia del tratamiento, de la fecha y de la interacción tratamiento x fecha: NS, P > 0,05; *, P < 0,05.
3 Error estándar de la media.
Medias seguidas de letras distintas son diferentes (P < 0,05).
Metabolitos, enzimas y hormonas en sangre
Los animales del tratamiento CTL tuvieron una mayor concentración de insulina (P < 0,05; Cuadro 8) que los animales de SOM y SAV. Por otro lado, los animales del tratamiento SAV presentaron una mayor con centración de glucosa y menores concentraciones de betahidroxibutirato y de urea (P > 0,05). No hubo diferencias significativas en las restantes variables en estudio (P > 0,10).
Cuadro 8. Metabolitos, enzimas y hormonas en sangre de vacas Holando en lactancia avanzada bajo diferentes medidas de mitigación del estrés por calor.
1Tratamientos: CTL = control; SAV = sombra; SAV = sombra + aspersión y ventilación.
2 Significancia del tratamiento, de la fecha y de la interacción tratamiento x fecha: NS, P > 0,05; *, P < 0,05; †, P < 0,10.
3 Error estándar de la media.
4 Como la variable no presentó una distribución normal se presenta la significancia de la variable transformada.
Medias seguidas de letras distintas son diferentes (P < 0,05).
Expresión génica en hígado
La expresión relativa de los genes PCK1, PDK4 y HP fue menor en vacas de los tratamientos SAV y SOM en comparación con vacas del tratamiento CTL (P < 0,05; Figura 3). La expresión relativa de NFKB1 fue menor en SAV comparada con CTL, pero fue similar entre SOM y CTL (P > 0,05). La expresión de SOCS2 fue superior en SAV en comparación con CTL (P < 0,05) pero fue similar en SOM y CTL. No se encontraron diferencias significativas entre tratamientos en la expresión relativa de los genes HSPA1B y XBP1 (P > 0,05).
Figura 3. Expresión génica en hígado de vacas de los tratamientos SAV y CTL relativa a la expresión tratamiento control (CTL). El símbolo * indica que la expresión del gen fue estadísticamente diferente de la expresión en el tratamiento CTL.
Discusion
En este estudio el uso de medidas de mitigación del EC no mejoró la producción de leche ni de leche corregida por grasa al 4% (LCG4%). El consumo de materia seca total fue similar entre tratamientos y en parte puede explicar la falta de efectos sobre la producción de leche. Otros factores que pueden explicar la ausencia de diferencias son el nivel productivo y el momento de la lactancia. Vacas de alta producción son más sensibles al estrés por calor porque tienen mayor producción interna de calor (Kadzere et al., 2002) ;(West, 2003)). Además, como se mencionó anteriormente, vacas en momentos más tempranos de la lactancia son más sensibles al estrés por calor y su producción mejora cuando tienen acceso a medidas de mitigación (Román et al., 2017). Los animales en este estudio se encontraban en lactancia avanzada y con relativamente bajos niveles productivos (alrededor de 19 kg/d). Los resultados sugieren que animales con estas características son menos sensibles desde el punto de vista productivo al estrés por calor y no responden al uso de medidas de mitigación.
En cuanto al comportamiento, no se encontraron marcadas diferencias entre tratamientos, con excepción del tiempo dedicado al pastoreo. Los animales del tratamiento CTL dedicaron menos tiempo al pastoreo. Sin embargo, el consumo de pastura en porcentaje del peso vivo fue similar entre tratamientos, lo que indica que esos animales compensaron de alguna manera ese menor tiempo con mayor tamaño o tasa de bocado. El pastoreo se realizó durante la noche, momento en que los ITH son más bajos. Esas condiciones podrían provocar que los animales se recuperen y que pastoreen con más intensidad.
A pesar de la ausencia de respuestas en producción, el uso de medidas de mitigación afectó otras variables que impactan en la performance de la vaca lechera.
Los primeros signos visibles del estrés por calor son los aumentos en la frecuencia respiratoria y en la temperatura rectal (Brown Brandl, Nienaber, Eigenberg, Hahn, & Freetly, 2003). En este estudio, el uso de medidas de mitigacion disminuyo tanto la FR como la TR en la tarde, momento del día en que los valores de ITH son más altos (en promedio por encima de 72). Las frecuencias respiratorias fueron menores en ambos tratamientos con acceso a sombra. En cambio la temperatu ra rectal fue más baja solo en el tratamiento SAV, indicando que la sombra combinada con aspersión y ventilación fue más efectiva que la sombra sola. En cuanto a la composición de la leche, hubo diferencias en producción de proteína (kg/d) y en el porcentaje de grasa de la leche, aunque esas diferencias no parecen deberse al uso de medidas de mitigación. La concentración de lactosa fue superior en el tratamiento SAV. Las vacas de ese tratamiento además presentaron mayo res concentraciones de glucosa en sangre. La glucosa es el precursor de la lactosa en glándula mamaria. El hecho de que ambas variables sean superiores en ese tratamiento indica que destinaron la glucosa disponible para la síntesis de lactosa (M. L. Rhoads et al., 2009).
La insulina, que cumple un rol central en el metabolismo de los lípidos y los carbohidratos, fue mayor en los animales del tratamiento CTL. En ese tratamiento, la glucosa en sangre fue menor. El comportamiento en esas dos variables se debe a que en condiciones de mayor estrés por calor la glucosa que en condiciones normales se utilizaría en glándula mamaria, es redirigida al músculo para ser usada como fuente de energía (L H Baumgard & Rhoads, 2007). La glucosa en el músculo produce menos calor de fermentación que los ácidos grasos (O’Brien et al., 2010). Este uso alternativo de la glucosa es una de las estrategias del organismo para hacer frente al estrés por calor.
La condición corporal resultó similar entre tratamientos. Sin embargo, la variación de peso a lo largo del periodo experimental fue mayor en los animales de los tratamientos CTL y SOM. En condiciones de estrés por calor el metabolismo de los lípidos se altera debido a cambios en los niveles de insulina circulante (Lance H. Baumgard & Rhoads, 2012). Se cree que gran parte del peso que se pierde corresponde a tejido muscular (Shwartz, Rhoads, VanBaale, Rhoads, & Baumgard, 2009). Los tratamientos CTL y SOM presentan mayores niveles de urea en sangre, que, entre otras cosas, indican que hubo movilización de músculo. Eso, sumado a que los niveles de NEFA en sangre fueron similares entre tratamientos, sugieren que tanto en CTL como en SOM hubo pérdida de peso proveniente de músculo, y que el uso de sombra sola no alcanzó para evitar la misma.
En cuanto a la expresión de determinados genes en hígado, vemos que la expresión de PCK1 y PDK4 fue menor en SOM y SAV con respecto a CTL. Ambos genes tienen funciones que aumentan las reservas de glucosa (R. P. Rhoads et al., 2013). Se encontraron diferencias en la expresión del gen NFKB1. Ese gen aumenta ante la ocurrencia de procesos inflamatorios (Khan et al., 2015). La expresión fue similar en CTL y SOM pero fue inferior en SAV. Esto sugiere que los ani males de CTL y SOM pueden hacer estado cursando un proceso inflamatorio con la consecuente activación del sistema inmune. En condiciones de estrés por calor suelen ocurrir alteraciones de la permeabilidad del tracto gastroinstestinal (L.H. Baumgard, Keating, Ross, & Rhoads, 2015). Esto ocurre porque la sangre se mueve desde los aparatos respiratorio y gastrointestinal hacia la periferia del cuerpo para que la temperatura se pueda disipar por convección (Kadzere et al., 2002) . A causa de ello, las células del tracto gastrointestinal se quedan sin oxígeno (Ro llwagen et al., 2006) y permiten el ingreso de lipopolisacáridos al torrente sanguíneo, (Hall et al., 2001) (Pearce et al., 2013) lo que desencadena una respuesta inflamatoria local ((Mani, Weber, Baumgard, & Gabler, 2012)). Cuando el sistema inmune reconoce señales moleculares de patógenos produce citoquininas que son mediadores que inducen inflamación y generan una respuesta de fase aguda (Daha, 2011; (Ceciliani, Ceron, Ecker sall, & Sauerwein, 2012). Cuando el sistema inmune se encuentra activado utiliza como único combustible a la glucosa (Kvidera et al., 2017). No se encontraron diferencias en los niveles de haptoglobina en sangre, sin embargo la expresión del gen HP que está relacionado con la síntesis de esta proteína fue superior en vacas del tratamiento CTL.
Esto indica que esos animales estuvieron sufriendo de estrés crónico a causa del calor. Los resultados observados en la expresión de los genes PCK1, PDK4, NFKB1 y HP sumados a las concentraciones de glucosa en sangre y en leche sugieren que animales de los tratamientos CTL y SOM sufren de algún grado de estrés, y estarían destinando la glucosa para satisfacer las necesidades del sistema inmune activado en lugar de destinarla a la síntesis de lactosa.
El gen HSPA1B interviene en la síntesis de la proteína de shock térmico HSP70. Las proteínas de shock térmico se producen cuando las células son expuestas a condiciones estresantes. La HSP70 cumple un rol muy importante protegiendo a las células de daños por inflamación, estrés oxidativo y altas temperaturas (Morimoto & Santoro, 1998) (Roti Roti, 2008). El gen XBP1 está relacionado con estrés del retículo endoplasmático de la célula. Aún no hay suficiente información sobre cambios en la expresión de ese gen en vacas lecheras en situaciones de EC, pero trabajos realizados con cultivos celulares, indican que células sometidas a altas temperaturas tienen mayor expresión del mismo 84 (Adachi et al., 2009). No se encontraron di ferencias entre tratamientos en la expresión de estos genes. Esto fue inesperado dadas las funciones que cumplen los mismos. Quizás los niveles de EC que ocurrieron durante el periodo experimental no fueron suficientes para provocar cambios en la expresión de estos.
Conclusiones
Podemos concluir que el uso de medidas de mitigación del estrés por calor no mejoró la producción, la composición de la leche ni el consumo de materia seca en vacas en lactancia avanzada. Sin embargo, se observó que vacas sin acceso a sombra e incluso con acceso a sombra pero sin aspersión y ventilación presentaron mayores variaciones de peso, alteraciones en sus perfiles sanguíneos y en la expresión de algunos genes que indican que estaban sufriendo algún grado de estrés y activación del sistema inmune. Estas alteraciones indican falta de bienestar en los animales y pueden afectar negativamente la reproducción, la producción en la lactancia siguiente y la salud.
