Criopreservacion y congelacion de embriones bovino.
Publicado:28 de enero de 2009
Por:Mauricio Quintero
Queridos compañeros,quisiera saber si ustedes me pueden ayudar con sus conocimientos para realizar un protocolo de criopreservacion o congelacion de embriones bovinos, y luego la posterior descongelacion para implantarlos, quisiera saber tambien los procedimientos y tecnicas.
Cualquier aporte les quedo inmensamente agadecido.
MAURICIO QUINTERO.
Gracias por tu informacion Doctor Serrano, quisiera saber sobre que maquina de congelación me habla y sobre los medios de
mantenimiento, y en el caso de Fertilización In vitro se sigue el mismo procedimiento???
Gracias, Mauricio Q.
ok. entiendo que se lavan los embriones en medio de mantenimiento que contiene etilenglicol con 1.5 M, cinco veces y dos veces en tripsina y luegos otras 5 veces en etilenglicol con 1.5 M y se depositan los embriones en etilenglicol y se realiza el empajillado como lo indico el compañero Jairo Santander
Victor Villarreal
Hola Buenas noches.
Aprovechando la intervención del doctor Jairo Serrano, leí en unos documentos sobre transferencia de embriones que una vez la hembra bovina ha sido superovulada se deben realizar entre dos a tres inseminaciones para fecundar la mayor cantidad de óvulos posible. Quisiera saber ¿ con que espacios de tiempo se realizan las inseminaciones ?
Y por otro lado, hablando de los equipos para realizar la colecta de los embriones ¿ la sonda o cateter Foley es reutilizable ?
Muchas gracias Dr. Jairo
SI ALGUIEN ME PUEDE APOYAR
En una congeladora de embriones, la resistencia de color negro, que se introduce en una caja de unicel,.... ¿cual es el nivel optimo de llenado de nitrógeno ? .
Ademas trae un accesorio de plástico que parece un vaso negro pequeño, ¿este para que sirve?.
ultima ´pregunta... es necesario sellar la pajilla con calor para congelar embriones o con el tapón es suficiente ¿cual es el procedimiento adecuado una vez que esta empajillado el embrión?
El Dr Serrano olvido mencionar algunos detalles bien importantes
El tiempo que se debe demorar en el proceso entre la colocacion del embrion en Etilenglicol y el enpajillamiento NO debe exceder mas de 5 minutos (toxicidad del medio) luego el tiempo entre el enpajillamiento y el seeding tampoco puede pasar de otros 5 minutos como maximo.
(El seeding se debe realizar maximo a los 10 minutos de estar en contacto el embrion con el etilenglicol), ya despues de haber hecho el seeding en cada pajilla puede estar en la cryocamara del congelador mas tiempo sin problema, esta cryocamara debe estar a -6 grados centigrados, para esto debe tener nitrogeno liquido y arrancar el programa anteriormente. La congeladora se demora aprox 1 hora para bajar a -32 grados, luego se estabiliza por 15 min y luego se colocan en la canastilla del termo a -196 grados.
Para descongelar se debe realizar en termo con agua a 30 grados, durante 10 a 15 seg. El medio de transferencia No es solo PBS debe llevar antibiotico-antimicotico, suero fetal bovino (Comercialmente su nombre es HOLDING, y lo produce BIOLIFE, VIGRO,EMCARE.
No es completamente necesario Ecografo para realizar transferencia de embriones, es una gran ayuda, pero si ud es bueno en palpacion diagnostica no necesita comprarlo.
Los embriones producidos INVITRO tienen bajos resultados de implantacion con la congelacion lenta, para ellos el ideal es vitrificacion, asi obtenemos tasas de preñez similares a embriones producidos in vivo y congelados lento.
Para transferencia de embriones se debe inseminar al menos 2 veces con intervalo de 12 horas entre las dos, o 3 veces a las 6-12 y 18 horas de la primera monta a la donante. El cateter de Foley latex es desechable, No se debe reutilizar,hay tambien Foley de silicona reutilizable autoclavable, pero el balon con mas de dos o tres usos se rompe.
Para enfriar la cryocamara se debe colocar nitrogeno hasta la mitad primero, y luego de conectado el controlador de temperatura se debe llenar total.
El vaso negro es el tapon para cubrir las pajillas , el tamaño de este tapon depende de el tipo de sello que se le cocloque a la pajilla de embriones, si es corto, largo o si lo que lleva la informacion del embrion es otra pajilla con conector.
Para embriones se puede sellar la pajilla de las dos maneras con calor dejando un espacio de aire en la punta 2mm, o con el tapon. El problema es que si por alguna razon el tapon no queda bien colocado entrara nitrogeno a la pajillla y en el momento de descongelarla puede rajarse o explotar al entrar en contacto el nitrogeno con el aire perdiendose a veces el embrion.
FELIZ REPRODUCCION
Tengo experiencia en vitrificación de embriones producidos in vitro e in vivo, utilizando como crioprotector base la Dimetilformamida, mezclada con dimetilsulfoxido. Este proceso consiste en exponer los embriones por poco tiempo (25 seg) a una alta concentración de crioprotectores y empacarlos (2 a 3 embriones) en una OPS open pulled strow (pajilla abierta y estirada) esta es una pajilla de 0.25 cc que mediante un proceso de exposición al calor, se logra estirar, tratando de reducir su volumen y su diametro, los embriones son cargados por capilaridad con solo tocar las gotas en donde se encuentran los embriones y la mezcla de los crioprotectores. Este metodo descarta la posibilidad de usar equipos (congeladores automaticos), nuestro grupo de trabajo ha evaluado la sobreviviencia posdesvitrificación con resultados alentadores
amigos foristas; todos aportan,pero miro que nadie da imformacion exacta del procedimiento con detalles esenciales como; cantidad de PBS,holding etc. equipo a utilizar.quien vende estos productos si son carisimos.
gracias amigos
Sin tanto rodeo, alguien me puede decir mas o menos en Antioquia, Colombia, cuanto me cuesta pegar un embrion o existen empresas en Colombia que me cobren por embrion pegado, o me vendan las receptoras preñadas y a como me pueden costar preñadas de simmental... Gracias, hablo de embriones comerciales no de super estrellas, mi objetivo es tener la raza pura y ya luego multiplicarla.
hola amigos todos :ya hice la misma pregunta.pero no importa,aqui voy de nuevo:en los videos te hablan de las vondades que da la transferencia de embriones pero a mi me dicen que eso es solo para grandes ganaderos. y dificil de aprender¿es sierto eso?me dicen cuanto cuesta producir tus propios embriones? gracias a todos.
Hola amigo, la tecnica es sencilla, lo debe realizar un especialista desde ya, pero hay muy buenos aqui en Argentina, que brindan el servicio, en tu pais los debe haber, y es una tecnica que esta al alcance de cualquier productor que lo necesite para mejorar su rodeo, solo hay que estar decidido a hacerlo,y ser muy paciente, los resultados se ven con el tiempo...saludos amigos.
amigo juan camacho:agradesco su contestacion.pues desde mayo hice la pregunta y nadie habi acontestado;le imformo que en centroamerica alos gobierno les vale un bledo no traer esta tecnica y mucho menos ala empresa privada,he querido pasar un curso completo sobre reproduccion bovino,desdee la superovulacion,transferencia de embriones,crioconservacion y aspiracion folicular,pero aqui ni la transferencia de embriones existe sino que tienen que venir de otro pais a hacerlo alos grandes ganaderos y menos del .009 de la poblacion de ganaderos sabe de que existe esta tecnica,que pena;ultima pregunta¿existen otros productos igual al Folltropin,ya que considero demasiado caro $160.dolares. gracias y saludos
Hola amigo, no conocia la situacion en tu pais, aqui a la Argentina llegan muchos colegas a capacitarce especialmente colombianos, ecuatorianos,paraguayos,etc, tecnica que aplican en su pais algunas empresas locales, este año hicimos una capacitacion en el INTA Balcarce,(dictada por el Dr Ricardo Alberio) con unos ecuatorianos que pertenecian a dependencias del gobierno y otros a empresas privadas, quiero decir que se estan interesando por la tecnica en paises hermanos y me parece perfecto, un alstima que alli no la difundan, existe otro producto de nombre Pluset( FSH y LH )de 20 ml, entiendo que es mas economico..saludos amigo.
Hola Doctor Camacho,buen dia a todos los amigos foristas,aprecio su informacion,me gustaria tener su correo electronico para saber cuando son las proximas capacitaciones duracion y costo del mismo en la Argentina. al repecto,o saber si alguien de los compañeros foristas saben de algun centro que imparta estos cursos aqui en Centro America,favor dejarmelo saber.gracias saludos desde Nicaragua.
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