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Comparación de dos métodos automatizados para análisis de leche bovina

Publicado: 18 de septiembre de 2018
Por: Villaseñor GF1, Ruvalcaba GJM1,2, Espinosa MMA3, Arteaga GRI4, Ruvalcaba AMJ5, Montes OLR6*, Hernández JAL5, Érica AL5. 1Campo Experimental Centro Altos de Jalisco-INIFAP-CIRPAC; 2 Centro de Investigación en Biotecnología Aplicada-IPN. Ex-Hacienda San Juan Molino Carretera Estatal Tecuexcomac-Tepetitla Km 1.5, Tlaxcala, México: 3Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento Animal; 4Centro Nacional de Recursos Genéticos, INIFAP-CIRPAC; 5Centro Universitario de los Altos.
Resumen

Dada la importancia de contar con técnicas de análisis que permitan conocer de manera rápida y precisa la composición de la leche, diversos instrumentos han sido desarrollados. Los instrumentos basados en el uso de espectroscopia de infrarrojo ofrecen precisión y rapidez en el análisis de muestras de leche y otros derivados. Sin embargo, una de las principales limitantes es la inversión que representa este tipo de equipos, además de su difícil portabilidad, lo que complica su uso rutinario a niveles más cercanos a los sitios de producción o centros de recepción de leche. En ese sentido, se han desarrollado equipos portátiles basados en uso de ultrasonido, con resultados en poco tiempo, menor inversión y mantenimiento; sin embargo, no hay evidencia suficiente sobre su precisión y confiabilidad. Por ello, en el presente estudio 145 muestras de leche colectadas en explotaciones lecheras familiares fueron analizadas para conocer su composición mediante el uso de dos equipos automatizados, uno basado en la técnica de infrarrojo y el otro en ultrasonido. Los resultados no mostraron diferencia estadística significativa (P>0.05) entre equipos de análisis para los porcentajes de grasa, proteína, sólidos totales y sólidos no grasos. La información obtenida podría aprovecharse para generar análisis de asociación y modelos de ajuste que permitan brindar mayor certeza a los resultados obtenidos por ultrasonido.

Palabras clave: Composición de leche, lechería familiar, infrarrojo, ultrasonido.

 

Introducción
Conocer la composición y cambios en la leche bovina, es importante para asegurar la calidad de los derivados que se elaboran a partir de ella, conocer el estado de salud de los animales que la producen, evaluar la efectividad de las dietas, mejorar la detección de enfermedades a nivel de ubre, monitorear la fertilidad y parámetros reproductivos, entre otros (Brandt et al., 2010). En ese sentido, la calidad de leche puede afectarse negativamente por condiciones anti- higiénicas durante su obtención y/o manipulación, rutinas de ordeño inapropiadas y el estado de salud de la vaca a nivel de la glándula mamaria. (Haman, 2005; Brandt et al., 2010). Adicionalmente, la información generada puede ser útil para monitorear el estado nutricional de los animales y la adaptación a cambios en la dieta. Los constituyentes en leche que mayor información pueden proporcionar sobre el estado metabólico y nutricional de la vaca son grasa, proteína, urea y acetona (Mottram et al., 2002); mientras que grasa y proteína están directamente relacionados con la cantidad de energía y fibra que se suplementa en la dieta y la relación de ambos (grasa:proteína) es el indicador más sensible del estado metabólico. Algunos otros constituyentes como son lactosa y caseína total en leche, y su variación puede servir como indicador de enfermedades como mastitis. Por todo lo anterior, es importante contar con métodos adecuados de análisis de leche que permitan tener resultados en el menor tiempo posible y con la confiabilidad suficiente para que los resultados puedan ser utilizados para la toma de decisiones. Para atender esta demanda, diversos equipos con métodos automatizados para el análisis de leche han sido desarrollados, incluidos métodos rápidos, no-destructivos, basados en la respuesta de la leche al aplicar ultrasonido u ondas electromagnéticas. El principal de ellos (reconocido por la normatividad internacional), es el basado en la espectroscopia de infrarrojo por transformada de Fourier (Biggs 1967) ofreciendo una gran exactitud y repetibilidad, sobre todo cuando la muestra es colectada y homogeneizada apropiadamente. Sin embargo, para fines prácticos o rutinarios, sobre todo para sistemas familiares de producción de leche, no siempre es posible el acceso a este tipo de instrumentos, por lo que es común el uso de analizadores más económicos y portátiles, como son los basados en el uso de energía ultrasónica. Estos equipos regularmente son utilizados para determinar grasa, lactosa y proteína y de acuerdo a ensayos, cumplen con los requerimientos de análisis para manejo del hato y toma de decisiones (Ordolff, 2005). Algunas ventajas de estos equipos, sobre los que se basan en el uso de infrarrojo es que requieren una menor inversión inicial, tienen mayor portabilidad, las operaciones de limpieza son sencillas y en función del correcto manejo, la calibración se mantiene estable. Sin embargo, al no ser un método oficial de análisis es importante contar con evidencia de su exactitud y repetibilidad en las mediciones que realizan.
Objetivo
Comparar los resultados obtenidos de la composición de leche cruda de bovino, en un analizador automático por ultrasonido y un analizador por espectroscopia de infrarrojo.
Materiales y métodos
En 11 unidades de producción de leche características del sistema de lechería familiar o semitecnificado (Arias et al., 2010), se realizaron visitas durante un periodo de seis meses, para obtener un total de 145 muestras (45 ml) de leche cruda. La colecta de muestras se llevó a cabo durante el ordeño mediante el uso de pesadores de leche (Waikato®), con reservorio auto-muestreador. Las muestras se depositaron en recipientes de plástico de 50 ml de capacidad con conservador a base de Bronopol y se conservaron en refrigeración (4-7 °C) hasta su análisis. Previo a este, las muestras de leche fueron colocadas en baño maría sin agitación hasta alcanzar una temperatura de 40°C, seguido de agitación suave durante dos minutos para homogeneizar todos los constituyentes. Enseguida las muestras fueron estabilizadas a 24°C para su análisis. El análisis de composición se llevó a cabo mediante espectroscopia de infrarrojo en un equipo Milkoscan FT- 120 (Foss®) y mediante analizador ultrasónico (Ultrasonic milk analizar AKM-98 FARM ECO®). Los parámetros incluidos en la evaluación fueron grasa, proteína, lactosa, solidos totales y sólidos no grasos. Para determinar si existieron diferencias entre equipos para los resultados de composición de la leche, para cada uno de los meses analizados se realizaron análisis de varianza a través del paquete estadístico SAS, con un nivel de significancia α de 0.05.
Resultados
Los promedios para cada uno de los componentes de la leche se muestran en el Cuadro 1. Los valores promedio del porcentaje de grasa, proteína, sólidos totales y sólidos no grasos no mostraron diferencia (P>0.05) entre los equipos de análisis estudiados. Sin embargo, para lactosa, crioscopía y densidad se observaron diferencias (P<0.05) en los resultados promedio registrados. En general, el porcentaje de grasa, proteína, lactosa y sólidos totales muestran un incremento en el segundo mes y posteriormente se observan decrementos hasta llegar al sexto mes. Esto fue similar en los resultados obtenidos con los dos equipos de análisis. Sin embargo, para el porcentaje de sólidos no grasos, la composición fue variable en los 6 meses analizados.
Comparación de dos métodos automatizados para análisis de leche bovina - Image 1
Discusión
Los resultados obtenidos indican que no hay diferencias entre el análisis por infrarrojo y el análisis por ultrasonido para la mayoría de los principales indicadores de composición de la leche: grasa, proteína, sólidos totales y sólidos no grasos. Es importante destacar que los resultados obtenidos para la totalidad de los indicadores se encuentran dentro de los valores publicados en sobre composición de leche producida en explotaciones lecheras familiares (Bernal et al 2007), y basados en las mínimas diferencias que se observan en los resultados obtenidos en los dos equipos, el analizador basado en ultrasonido representa una alternativa confiable para medir la calidad composicional de la leche a nivel de unidad de producción o en centros de acopio de leche. La información obtenida en el presente estudio podría ser aprovechada para ser analizada a mayor profundidad, bajo procedimientos que demuestren asociación entre la determinación obtenida bajo ambas técnicas de análisis, lo que permitiría generar mayor evidencia sobre la exactitud y repetibilidad que ofrece la técnica de análisis por ultrasonido, y de ser necesario, generar modelos de ajuste que brinden mayor exactitud a las determinaciones.
El comportamiento observado en las concentraciones porcentuales de diferentes componentes fue similar entre equipos de análisis, por lo que el análisis por ultrasonido brindaría no sólo resultados similares en los componentes de leche, sino además permite observar tendencias de cambio a través del tiempo similar a lo que registra un equipo de análisis aceptado internacionalmente. Es importante mencionar que la variabilidad observada en ambas técnicas es similar, y podría estar asociada no solo al principio de la técnica, sino al tipo de conservador utilizado para el transporte de las muestras. Se ha reportado que, al menos para el caso de análisis por infrarrojo, tanto el uso de bronopol como conservador, así como tiempos prolongados de conservación previo al análisis, favorecen la generación de lecturas incorrectas, sobre todo para proteína (Barbano et al., 2010).
Conclusiones
El uso de instrumentos basados en ultrasonido para determinar la composición fisicoquímica de leche cruda, representan una alternativa confiable y comparable con el análisis por espectroscopia de infrarrojo, especialmente para la determinación del contenido de grasa, proteína y sólidos totales. Estudios adicionales son necesarios, especialmente para generar modelos de ajuste que permitan obtener resultados con la mayor precisión, a través del uso de equipos basados en ultrasonido.
Referencias
Arias CLE, Hernández MP, Estrada CE, Rodríguez CJA, Martínez LR, Ruvalcaba GJM, Peña CAL, Tovar GMR, Nuñez HG. 2010. Tipología de los sistemas de producción de Lechería Familiar en los Altos de Jalisco. XLVI Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Campeche 2010. ISBN 978-607-425- 385-6
Barbano D. M., Wojciechowski K. L., y Lynch J. M. 2010. Effect of preservatives on the accuracy of mid-infrared milk component testing. J. Dairy Sci. 93:6000– 6011
Bernal M. L. R., Rojas G. M. A., Vázquez F. C., Espinoza O. A., Estrada F. J. Castelán O. O. A. Determinación de la calidad fisicoquímica de la leche cruda producida en sistemas campesinos en dos regiones del Estado de México. Veterinaria México [en linea] 2007, 38 (octubre-diciembre).
Biggs, D.A. 1967. Milk Analysis with the Infrared Milk Analyzer Journal of Dairy Science , Volume 50 , Issue 5 , 799 – 803.
Brandt M., Haeussermann A., y Hartung E. 2010. Invited review: Technical solutions for analysis of milk constituents and abnormal milk. J. Dairy Sci. 93:427–436.
Hamann, J. 2005. Diagnosis of mastitis and indicators of milk quality. Pp 82–91 en Mastitis in Dairy Production: Current Knowledge and Future Solutions. H. Hogeveen, ed. Wageningen Academic Publishers, Wageningen, the Netherlands.
Mottram, T., M. Velasco-Garcia, P. Berry, P. Richards, J. Ghesquiere, and L. Masson. 2002. Automatic on-line analysis of milk constituents (urea, ketones, enzymes and hormones) using biosensors. Comp. Clin. Pathol. 11:50–58.
Ordolff, D. 2005. Untersuchungen zur bewertung der milchqualität durch mobile systeme zur milchanalyse (Estudios sobre la evaluación de la calidad de la leche por parte de los sistemas móviles para el análisis de milán). Bericht des Instituts für Betriebstechnik und Bauforschung. Pp 134 en Jahresbericht 2005. Bundesforschungsanstalt für Landwirtschaft (FAL), Braunschweig, Germany.
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Autores:
Jose Martin Ruvalcaba
INIFAP México
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Mario Alfredo Espinosa Martínez
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Sergio Darío Rozycki
30 de octubre de 2019
Estimados, recordemos que el valor solo de acidez puede no indicar adecuadamente lo que está pasando. Hay que tener tb el valor del pH. Acidez de 14 °D con pH > 6,8-6,9 indicaría (a priori) mastitis. De la mozzarella que no pega puede ser tb que no se haya bajado suficientem. el pH, a 5,2 antes del hilado. El agregado de cloruro de calcio generalm. es suficiente en 200 ppm (0,2 grs / lt). Se podría probar con un poco más. Saludos, Sergio.
Pastor Ponce Ceballo
28 de agosto de 2019
Hola Martin. Excelente sus precisiones Asi debe ser. Yo trabaje con el Dr Castañeda. Un entrañable amigo de Argentina que ya no esta fisicamente pero si en nuestros corazones. En cuba en el cenlac teniamos ese mismo procedimiento y siempre resolvio las discrepancia de manera tecnica que es lo justo. Saludos
Pastor Ponce Ceballo
28 de agosto de 2019
Con respecto a lo que plantea el Sr Jose Lizardo, es necesario contar en cada país con algún laboratorio nacional de referencia acreditado donde el productor pueda enviar la muestra discrepante. Pero el tercer laboratorio debe cooperar con el productor e incluso coordinar de forma conjunta productor y procesador para que el análisis sea valido y aceptado por ambas partes, sea cual sea el resultado. Generalmente cuando se realiza de forma independiente por el productor o por la industria y sin un buen criterio de muestreo alguna de las partes no acepta el resultado. Por ello es casi obligado trabajar de conjunto para aclarar cual es el problema. Los contratos de recibo de leche debían incluir que acción seguir cuando existen discrepancias en el analisis
Pastor Ponce Ceballo
23 de agosto de 2019
Estimado Luis Alberto. El punto esta en que es lo que necesito para la situacion que tengo. Si en el centro de acopio puedo tener un crioscopio pues eso es lo mejor (siempre que este calibrado regularmente) pero no siempre es asi. Entonces la prueba con el lactodensimetro calibrado y a 15 Grados si es posible, me da un criterio de si acepto la leche o rechazo. Con leches de alto sólidos la densidad es mas dificil que se mueva por debajo de 1,029 pero con leches en rangos de 1,029 a 1,030 si es mas fácil y el % de agua añadida que se detecta es menor (animales finos y altas producciones). Pero las pruebas del lab portátil son sencillas y fáciles de realizar y usted puede tener tanto como técnico de campo como del centro de acopio una idea de lo que esta recibiendo y decidir. Pero no como criterio de pago que para eso si se requiere de un laboratorio confiable y con pruebas robustas. Por ej en el centro de acopio si es muy bueno un equipo sencillo de ultrasonido (siempre que este calibrado). Pero cuando no hay ni lo uno ni lo otro, el lab portátil es muy bueno pues puedo ver si la mastitis es fuerte o débil, si la leche esta ácida (positiva al alcohol), si la adiciona de agua es sustancial, si esta sucia o no e incluso si tiene inhibidores. El solo hecho de realizar pruebas a la leche hace que algunos productores sean mas cuidadosos con la calidad y por otra parte el técnico tiene una base mínima para evaluar la situacion. Es un enfoque de sentido practico y a la vez económico
Pastor Ponce Ceballo
22 de agosto de 2019
Si el objetivo de la investigación es sobre composición de la leche cruda ya sea de vacas, cabras o búfalos lo recomendable es utilizar un equipo infrarrojo ya sea de Foss o de otra firma, pero no recomendaría hacer dichos estudios con ultrasonido. Cuando no se tienen materiales de referencia se pueden adquirir por ej las de MUVA. Si participa en alguna interlaboratorio también es una vía de tener confiabilidad. Finalmente también se pueden fabricar muestras de control interno en el mismo lab pero para eso debo tener validado al menos Kjeldhal para proteínas, gerber para grasa, enzimático para lactosa y desecación por balanza infrarroja o en estufa para sólidos totales. La suma de los tres componentes individuales mas 0,75 deben dar aproximadamente igual que los sólidos por desecación, Personalmente siempre prefiero materiales de referencia para un control digamos semestral y muestras propias para el control diario o semanal. El problema con las muestras para control interno es que los métodos oficiales deben estar pero que muy bien pues en ocasiones un solo método oficial mal realizado te cambia toda la calibración del equipo, debido a que se corre la suma de los mismos. Las muestras de control interno se pueden conservar con bronopol al menos para dos semanas en frío sacando solo la alícuota que se vaya a utilizar en el día de trabajo. Por ello se preparan varias del mismo material y origen y pasarse unas 10 del lote por el equipo para tener el valor del equipo y después el valor de los métodos oficiales y poder ajustar si es necesario. En fin este trabajo depende mucho de la cultura de trabajo del laboratorio. Estructura un sistema de control interno es una necesidad de cualquier lab confiable pero hay que combinar pues el costo de los materiales de referencia son muy alto. Hoy al menos los equipos foss tambien se pueden calibrar en linea pero la calibración interna no se sustituye por nada
Pastor Ponce Ceballo
21 de septiembre de 2018
Un gran saludos estimado amigos Galo y Juan Emilio. Primero a Yuri Murillo le digo que no hay equipos malos y buenos. El punto esta en tiene definido para que lo quiero. Si tienes uno de referencia estas obligado a utilizar los equipos y métodos oficiales, es decir que han sido sometidos a validación internacional por organizaciones autorizadas y generalmente ya tienen normas que los avalan. Si es para otros objetivos como pude ser una tesis es valido el Master Eco que ya es esta bastante perfeccionado u otro pero tienes que establecer los rangos de desempeño que permites, si es un centro de acopio o para técnicos que controlan calidad en fincas o criterios de aceptación de leche no se requieren tantos requisitos técnicos, PERO SIEMPRE CALIBRADOS. Desde hace tiempo desarrollamos un concepto que le llame laboratorio portátil en un maletín o caja para tener indicadores básicos en fincas con lactodensímetros, acidez, prueba del alcohol en placa Petri, jarro de fondo negro, prueba de cmt, tiras para inhibidores. en fin todo esto es simple y practico, asi que depende mucho lo que yo establezco como el objetivo del análisis. Ahora Juan Emilio, cuanto quisiera volver a esas intensas jornadas y trabajos donde tu también participaste pero mi trabajo aca en RD realmente no me da chance pero espero liberarme en un año y si me quedan fuerzas creo que lo retomaremos. Lamentablemente perdimos al Dr Roberto Castañeda pero queda su equipo con quien podemos hacer muchas cosas juntos. Que bueno saber de ti y espero que la ultima versión del DIRALEC salga algún dia como un nuevo método de análisis rápido de bacterias con las tres B que se necesitan para eso. un abrazo. Pastor Ponce
Galo M.Izurieta
Pasteurizadora Quito (Ecuador)
20 de septiembre de 2018
Estimado Pastor, es muy grato leer tus articulos especialmente de leche.De la expreriencia como tu manifiestas es importante la calibracion de los equipos, especialmente con patrones y realizar regularmente pruebas de interlaboratorios para comprobar resultados. Saludos
Pastor Ponce Ceballo
20 de septiembre de 2018
Saludos estimado amigo Dr Rene Perez no se olvida con el tiempo. Aclarando mas a la persona que pregunat si debe calibrar un equipo IR de confirmo que tambien debe hacerse. Existene varias maneras. La mas sencilla es comprar muestras de referencia por ej que dispone una empresa europea llamada MUVA y tambien la red argentina de lanoratorios lacteos entre otras. La segunda forma es preparando uno mismos patrones o referencias en el propio laboratorio con leche entera conservada con bronopol pero para eso tiene que tener muy bien calibrados los metodos estandard de Kjeldhal, Gerber o Rose Gotlieb y algun metodo enzimatico para lactosa, aunque en esta ultima tambien se puede utilizar una solucion a partir de lactosa pura para analisis. Se corren los metodos oficiales, se pasan las muestras por el equipo y se ajusta si es necesario, aunque en IR es muy dificil que se salgan de rango. Esas muestras las puede mantener en refrigeracion conservadas con bronopol (2 bromo enitro 1,3 proponodiol). Las muestras controles deben prepararse de una mezcla de leche no de una sola vaca y homogenizar bien pues aqui en tema de la grasa es lo mas complicado. Los solidos totales los puede comprobar en una balanza de humeddad bien calibrada y la suma de los componentes individuales laas 0,75g% de minerales le debe coincidir en terminos analiticos de la desviacion permitida. De vez eb cuando es bueno participar enun interlaborariol para leche. Saludos. Pastor
René Alejandro Pérez R
Red Láctea Colombia
19 de septiembre de 2018
Indudablemente, es cierto cada palabra de Dr. Ponce IR es más sólido . Ultrasonido es un equipo de cuidado y ajuste permanente para utilidades menores. Esperemos que la tecnología permita equipos ROBUSTOS de menor costo, en un futuro próximo.
Pastor Ponce Ceballo
19 de septiembre de 2018
Como Director del CENAC de Cuba realice mas de 2 millones de análisis primero con el 104, y después con dos minor (ahora esta el mars de Foss y otros no solo de Foss). También realizábamos ajuste a muchos equipos de ultrasonidos. Definitivamente la tecnología IR y NIR son equipos mas robustos y precisos en exactitud y repetibilidad pues leen directamente sobre los enlaces peptídico, hidroxilo y carboxilo de proteína, lactosa y grasa y suman los solidos con ajuste mineral. El resultado no proviene de un formula cuantitativa como sucede con los ultrasonidos y combinaciones. Por esa razón los equipos IR son los que están reconocidos con normas oficiales internacionales. Ello no significa que los ultrasonidos sean malos pues están fabricados para pequeñas plantas, centros de acopio y negocios pequeños y laboratorios habilitados pero no oficiales pues tienen un menor precio. En algunos casos no se aceptan tampoco en los habilitados para el pago. El punto esta en que deben ser calibrados de forma sistemática pues se van de rango de aceptación. Por eso en su momento elaboramos muestras estándar para poder calibrarlos o se pueden comprar ya certificadas. Pero eso si hay que mantenerlos bajo estricto control en condiciones de uso diario que no es lo mismo que en un estudios de comparación en condiciones controladas. Saludos. Pastor
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