El objetivo del estudio fue evaluar in vitro e in vivo la capacidad de la mezcla de compuestos húmicos (NaHu) con dos fuentes de aceites esenciales (AE) como promotores de crecimiento. La evaluación in vitro de la capacidad eubiótica, se realizó en un simulador de digestión. Se utilizaron seis tratamientos, compuestos por alimento para pollo mezclado con diferentes concentraciones de NaHu y AE, además de dos controles (alimento para pollo y fitobiótico). Se determinó la cantidad de: ácido grasos volátiles, azúcares, microorganismos probióticos y patógenos.

Para la evaluación in vivo se analizaron datos de campo y se realizó un bioensayo utilizando 2820 pollos con cinco tratamientos a base de NaHu con AE además un control antibiótico promotor de crecimiento (APC). Se determinaron las variables: consumo, peso final, conversión e índice de productividad.

En la prueba in vitro Los tratamientos compuestos por NaHu (750ppm) y AE de Lippia origanoides (LO) microencapsulado (100ppm) y NaHu, AE de LO (75ppm) y Eugenia caryophyllata (EU) (50ppm) presentaron mayor cantidad de probióticos y ácidos de cadena corta reduciendo la proliferación de Ecoli.

En el bioensayo se observó que las aves con fitobióticos no presentaron diferencias en peso final, consumo ni índice de productividad respecto al control, respecto a la conversión alimenticia el tratamiento con NaHu, AE de LO (50ppm) y AE de EU (50ppm) fue mejor que el APC. En conclusión, las mezclas de NaHu y AE poseen capacidad eubiótica sobre el sistema digestivo, correlacionado con la capacidad in vivo, de reemplazar los APC.

Palabras clave: Promotor de crecimiento, avicultura, aditivo.

INTRODUCCIÓN

En la actualidad el riesgo que genera el uso de antibióticos promotores de crecimiento APC sobre la salud de los consumidores y la posibilidad en el aumento de la resistencia de las bacterias a los antimicrobianos ha generado que los consumidores cada vez demanden productos animales sin uso de aditivos sintéticos (Mohsen et al., 2017). Por lo que el uso de compuestos fitobióticos como los aceites esenciales se ha convertido en una alternativa natural de gran importancia para la industria avícola (Natasa Glamoclija et al., 2016).

Los AE son una mezcla de diversos metabolitos secundarios de las plantas como terpenos, aldehídos y alcoholes entre otros, que pueden ser obtenidos de las diferentes partes de la planta. Los AE se han utilizado en la alimentación de animales debido a los efectos benéficos que tiene sobre la salud, como ser antioxidante, antibacteriano y la capacidad de estimular los procesos digestivos (Ding et al., 2017).

Dentro de los efectos que estos aditivos tienen la capacidad de generar en el organismo animal, es de destacar la capacidad eubiótica de estas sustancias, en la que las bacterias potencialmente patógenas son controladas aumentando la población de bacterias benéficas para el hospedador y manteniendo la estabilidad de dicha interacción en el tracto gasto intestinal (Natasa Glamoclija et al., 2016; Arpášová et al., 2018). En este contexto, el objetivo del presente estudio fue evaluar in vitro e in vivo la capacidad los humatos de sodio en mezcla con aceites esenciales de Lippia origanoides y Eugenia caryophyllata como promotores de crecimiento naturales en el pollo de engorde.

METODOLOGÍA

La realización de la prueba de aditivos fitobioticos compuestos por humatos de sodio y aceites esenciales como reemplazo al uso de promotores de crecimiento fue realizado por el grupo de innovación, desarrollo e investigación de Promitec Santander, Colombia, dicha prueba constó de tres fases, en las que se realizaron prueba in vitro, in vivo y de campo. Para esto se realizó un primer ensayo in vitro de la capacidad eubiótica de los fitobióticos utilizando un simulador de la digestión. La segunda parte de la prueba constó de un bioensayo en pollo de engorde en una granja tipo experimental y finalmente se realizó un seguimiento del uso del aditivo en una prueba de campo en granja comercial de pollo de engorde.

Simulación de la digestión In-vitro. la evaluación in vitro de la capacidad eubiótica de la mezcla de humatos de sodio con aceites esenciales se utilizó un simulador del ecosistema microbiano intestinal, compuesto de siete reactores multicámara controlados para reproducir las condiciones enzimáticas, de pH y de tiempo del sistema digestivo del pollo de engorde. En la prueba se utilizaron seis tratamientos compuestos por alimento de pollo suplementado con cuatro aditivos formados por la mezcla de humatos de sodio con aceites esenciales de LO y EU, y dos controles, uno de alimento de pollo con antibióticos promotores de crecimiento y otro control con el fitobiotico sin alimento de pollo (Tabla 1). cada una de las siete cámaras del simulador se tomaron muestras para determinar la producción de ácidos grasos de cadena corta y se realizó la cuantificación de unidades formadoras de colonia de microorganismos probióticos y potencialmente patógenos para cada uno de los tratamientos por medio de cultivos microbiológicos.

Tabla 1 Composición de aditivos correspondientes a los tratamientos

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** AE microencapsulado por atomización

Bioensayo en pollo de engorde. Se realizó un estudio utilizando 2820 pollos de engorde ROSS 308 de un día de edad, 50% (1410) machos y 50% (1410) hembras separados por sexo; los cuales se alojaron en un galpón con 60 corrales en piso de cascarilla de arroz, el alimento se suministró por medio de comederos manuales tipo tolva. Durante todo el periodo experimental los animales recibieron agua y alimento a voluntad, balanceado de acuerdo a las recomendaciones del NRC (1994) y Rostagno et al., (2011) a base de maíz y torta de soya (tabla 2), variando únicamente el aditivo que se aplicó para cada tratamiento.

Al iniciar el experimento los pollos fueron aleatorizados en un diseño irrestrictamente al azar, compuesto por seis tratamientos; los cuales contaron con 10 repeticiones (5 de machos y 5 de hembras) y 47 aves por unidad experimental. Los tratamientos constaron de: un control con antibiótico promotor de crecimiento y cinco tratamientos que contuvieron diferentes concentraciones de la mezcla de humatos de sodio con aceites esenciales, como se muestra en la tabla 1.

Tabla 2 Composición de aditivos correspondientes a los tratamientos

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**AE Microencapsulado por atomización

Durante el periodo experimental, se registraron diariamente las variables de consumo y mortalidad, cada semana se obtuvo el consolidado de estas variables además de registrarse el peso vivo, la ganancia de peso, la conversión alimenticia y el índice de productividad (IP). Los resultados de las variables cuantitativas se analizaron mediante el análisis de varianza y la prueba de Tukey (P<0,05) para comparar las medias entre tratamientos en caso de hallar diferencias significativas.

Prueba de campo. Para la prueba de campo se utilizó el fitobiotico compuesto NaHu a 750ppm, AE de LO a 75ppm y AE de EU a 25ppm en alimento comercial de pollo de engorde sin antibiótico promotor de crecimiento en pollo de engorde de la línea Ross AP en una granja de cría comercial. Los pollos tuvieron un ciclo productivo de 37 días, momento en el cual se obtuvieron las variables productivas de peso final, conversión alimenticia, índice de productividad y factor de eficiencia americano. El seguimiento de los animales y sus variables productivas se llevó a cabo durante cinco ciclos de producción de la granja. Los datos fueron tabulados y analizados por medio de estadística descriptiva.

RESULTADOS

Simulación de la digestión In-vitro.
Desarrollo bacteriano:Al determinar el efecto de los diferentes aditivos naturales en el alimento de pollo de engorde sobre el recuento de unidades formadoras de colonia de bacterias probióticas, se observó que el tratamiento dos compuesto por alimento de pollo mezclado a NaHu (750ppm) y AE de LO microencapsulado por atomización (100ppm) y el tratamiento cuatro que contenía compuestos húmicos, AE de LO(75 ppm) y EU (50ppm) presentaron mayor aumento de bacterias benéficas, siendo especialmente mayor este efecto en los segmentos del simulador correspondientes al íleon y el intestino grueso (Gráfico 1). Por su parte los grupos control compuestos de alimento de pollo sin aditivo y un aditivo natural independiente, presentaron el menor desarrollo de este tipo de bacterias.

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^{Gráfico 1. Recuento de Lacobacillus spp y Bifidobacterium spp en reactores de simulación de digestión. (T1) NaHu + AELO 100ppm (T2) NaHu + AELO 100ppm µencapsulado por atomización (T3) NaHu + AELO 1250ppm (T4) NaHu + AELO 75ppm + AEEU (T5) Control con alimento de pollo (T6) Control con fitobiotico.}

Respecto al conteo de Escherichia coli, todos los tratamientos de alimento de pollo mezclados con compuestos húmicos y aceites esenciales presentaron una menor cantidad de dicha bacteria durante el paso por el simulador en comparación con el alimento de pollo sin aditivo, observándose este efecto tanto en intestino delgado como grueso (Gráfico 2).

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^{Gráfico 2. Recuento de E.coli en reactores de simulación de digestión. (T1) NaHu + AELO 100ppm (T2) NaHu + AELO 100ppm µencapsulado por atomización (T3) NaHu + AELO 1250ppm (T4) NaHu + AELO 75ppm + AEEU (T5) Control con alimento de pollo (T6) Control con fitobiotico.}

Ácidos de cadena corta: La producción de los ácidos grasos volátiles: butírico y acético y del ácido láctico en los diferentes segmentos del simulador por efecto de los tratamientos utilizados, fue superior en el tratamiento dos compuesto por alimento de pollo mezclado con NaHu (750ppm) y AE de LOmicroencapsulado por atomización (100ppm) y el tratamiento cuatro que contenía compuestos húmicos, AE de LO (75 ppm) y Eugenia Caryophyllata (50ppm), mientras que la menor producción de estos ácidos se observó en el alimento de pollo con AE de LO(125 ppm) y en el grupo control compuesto por el alimento de pollo sin aditivo.

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^{Gráfico 3. Producción de ácido butírico (mg/L) en reactores de simulación de digestión. (T1) NaHu + AELO 100ppm (T2) NaHu + AELO 100ppm µencapsulado por atomización (T3) NaHu + AELO 1250ppm (T4) NaHu + AELO 75ppm + AEEU (T5) Control con alimento de pollo (T6) Control con fitobiotico.}

Bioensayo en pollo de engorde
Respecto a los parámetros zootécnicos se pudo observar que los tratamientos con los pesos significativamente mayores correspondieron con el tratamiento 5 (NaHu + AELO 100 ppm + AEEU 25 ppm), seguido por tratamiento 4 (NaHu + AELO 50 ppm + AEEU 50 ppm) y el Tratamiento 2 (NaHu + AELO 100ppm µ encapsulado por atomización), los cuales fueron estadísticamente superiores al control. Por su parte la mejor conversión alimenticia la presentó el tratamiento 4 (NaHu + AELO 50 ppm + AEEU 50 ppm) siendo estadísticamente inferir a la del grupo control con antibiótico promotor de crecimiento, mientras que no se encontraron diferencias entre el control y los otros grupos de aditivos.

Tabla 2. Resultados productivos en pollo de engorde usando mezclas de humatos de sodio con aceite esencial.

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El índice de productividad como un indicador de la capacidad del alimento de generar ganancia de peso observó que el tratamiento 4 (HS con 50ppm de AELO y 50ppm de AEEU presento el desempeño para esta variable, obstante ninguno no se encontraron diferencias en los tratamientos que recibieron aditivos con NaHu y AE en relación con el grupo control (Gráfico 4).

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^{Gráfico 4. Índice de productividad de pollo de engorde usando fitobioticos mezclas de humatos de sodio con aceites esenciales. (T1) NaHu + AELO 100ppm (T2) NaHu + AELO 100ppm µ encapsulado por atomización (T3) NaHu + AELO 75 ppm (T4) NaHu + AELO 50 ppm + AEEU 50 ppm (T5) NaHu + AELO 100 ppm + AEEU 25 ppm (T6) Control con APC.}

Prueba de campo.
Los resultados del seguimiento en las variables productivas en pollo de engorde criado en condiciones comerciales utilizando el fitobiótico con NaHu con AE de orégano a 75ppm y AE de clavo 25 ppm como reemplazo a los promotores de crecimiento durante cinco ciclos de producción evidencian constancia en los resultados zootécnicos con conversiones promedio de 1,43 y peso final de 1942 gramos a los 37 días de vida del pollo. Por su parte los parámetros indicadores de la eficiencia del alimento evidencian valores promedio de 136,2 en el índice de eficiencia americano y 95,6 en el índice de productividad, como se observa en la tabla 3.

Tabla 3. Parámetros productivos de pollo de engorde en cría comercial utilizando fitobiótico como reemplazo a los antibióticos promotores de crecimiento.

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DISCUSIÓN

En el presente estudio se pudo observar el efecto eubiótico que tuvieron las mezclas de aceites esencial con ácidos húmicos, estos hallazgos se encuentran de acuerdo con lo reportado por (Aksu & Bozkurt, 2009) quienes utilizando una mezcla de aceites esenciales con ácido húmicos a 1500ppm encontraron que decreció la cantidad de E.coli mientras que aumentaron las unidades formadoras de colonia de Lactobacillus en comparación con un grupo control. Respecto a esto, (Betancourt et al., 2012 b) reporta que el aceite esencial de orégano tiene un efecto bactericida selectivo, donde las bacterias benéficas como Lactobacillus y Bifidobacterium fueron menos sensibles que las bacterias potencialmente patógenas como Salmonella y E.coli. El efecto bactericida de este tipo de aceite esencial se encuentra relacionado con su composición química siendo el carvacrol y el timol dos de los componente de mayor relevancia y los cuales han mostrado tener la capacidad de alterar la membrana de la E.coli, aumentando su permeabilidad y despolarizando su potencial de membrana que lleva a esta a la muerte (Xu et al., 2008).

En el estudio In vivo realizado en pollo de engorde por Arif et al., (2018) encontró resultados concordantes con los observado en el presente estudio, donde en los ácidos húmicos y un fitobiótico evidenciaron tener efecto eubiótico con disminución de bacterias potencialmente patógenas y aumento en la población de bacterias benéficas; a su vez estos autores reportaron una mejora en las variables productivas como peso final y conversión alimenticia en los animales suplementados con ácidos húmicos, tanto solos como en mezcla con un fitobiotico de semilla de semilla de comino negro. Por su parte, nuestros resultados se encuentran de acuerdo con los encontrado por (Kemal celik et al., 2008) quienes observaron que la suplementación con 0,25% de ácidos húmicos mejoró los parámetros productivos del pollo de engorde, relacionándose con una inducción de buena salud intestinal por parte de los aditivos, donde lo NaHu y Aceites esenciales tendrían la capacidad de mantener la estabilidad de la microbiota intestinal y las condiciones ambientales para la eubiosis, de forma que se produce una mejor salud e integridad intestinal que da como resultado la óptima digestibilidad de los nutrientes del alimento (Betancourt et al., 2012 a;Sanmiguel et al., 2014).

CONCLUSIÓN

Los fitobioticos compuestos por mezclas de NaHu con AE de LO y EU, evidenciaron la capacidad de estimular la eubiosis de forma que contribuye a promover una mejor composición de la microbiota intestinales estimulando la proliferación de bacterias probióticas y disminuyendo la población de E.coli. Los resultados obtenidos en las pruebas in-vitro fueron consistentes con lo observado cuando se utilizaron los aditivos In-vivo en el pollo de engorde, los cuales tuvieron la capacidad de reemplazar los antibióticos como promotores de crecimiento, siendo especialmente importante los aditivos constituidos por la mezcla de NaHu con aceite esencial de LO a 75ppm y EU a 50ppm y la mezcla de NaHu con AE de LO a 100ppm microencapsulado por atomización lo que además evidenció la importancia de este proceso sobre el efecto potenciador del fitobiótico.

Evaluación del uso de mezclas de humatos de sodio y aceites esenciales como promotores naturales de crecimiento en pollo de engorde