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Compatibilidad del probiótico Bacillus subtilis PB6 con antimicrobianos a base de formaldehído y ácidos orgánicos

Publicado el: 9/6/2021
Autor/es: Kemin Industries

INTRODUCCIÓN

La línea CLOSTATTM se desarrolló como una alternativa a los antibióticos promotores del crecimiento utilizados en la alimentación animal. Bacillus subtilis PB6 está presente en los productos de la línea, que inhibe Clostridium perfringens en estudios in vitro y in vivo¹. CLOSTATTM Dry se administra a aves y cerdos a través del pienso, mientras que CLOSTATTM  SP Dry se desarrolló para agregarse al agua potable como una vía alternativa de administración. Por tanto, CLOSTATTM tiene versiones para ser administradas a aves y cerdos vía pienso, además de añadirse al agua de bebida como vía alternativa de administración. El presente trabajo busca verificar la compatibilidad de Bacillus subtilis PB6 con los ácidos orgánicos más comunes utilizados en la acidificación del agua, como Sal CURBÒ líquido (a base de formaldehído), Sal CURBÒ K2 líquido (a base de ácidos orgánicos) y el ácido fórmico.

MATERIALES Y MÉTODOS

Tratamiento de agua experimental:

Primero, el agua utilizada en el estudio se esterilizó en autoclave (15 minutos, 121°C) para eliminar las bacterias existentes. Después de enfriar, se añadieron Sal CURBÒ líquido y Sal CURBÒ K2 líquido a los matraces estériles a los niveles de inclusión recomendados de 20% (v/v) y 5% (v/v), respectivamente. El efecto del ácido fórmico solo se evaluó en dos niveles de inclusión: ácido fórmico al 2,55% (v/v) y ácido fórmico al 2,95% (v/v); estos valores corresponden a las concentraciones presentes en Sal CURBÒ líquido y Sal CURBÒ K2  líquido, respectivamente. Se añadió Bacillus subtilis PB6 (formulado en un producto CLOSTATTM) a todas las muestras de agua a un nivel de inclusión de 2.5 g / L. Las muestras de agua se almacenaran a temperatura ambiente sin agitar. La recolección de esporas se realizó después de 1 hy 24 h, después de 7 y 14 días.

Recuento de esporas de Bacillus subtilis PB6 en muestras de agua:

Se utilizaron dos métodos ligeramente diferentes para contar las esporas de Bacillus subtilis PB6. Los viales se agitaron antes del muestreo y se tomaron dos muestras de 1 ml de cada vial. En el primer método, se utilizó una solución salina tamponada con fosfato (PBS) para la preparación de todas las diluciones. En el segundo, se utilizó agua de peptona (BPW) como diluyente para preparar las diluciones.

Procesamiento de datos estadísticos:

Los recuentos microbianos en diferentes formulaciones se analizaron utilizando Statgraphics Plus Versión 5.1 Professional Edition.

RESULTADOS

Recuento total de esporas de muestras de agua tratada:

El Cuadro 1 muestra el pH de las muestras de agua tratada. Los recuentos totales de esporas de muestras de agua tratadas con diferentes inhibidores del crecimiento bacteriano se determinaron de acuerdo con los métodos de enumeración, PBS o BPW como diluyente, en los Cuadros 2 y 3, respectivamente.

Cuadro 1. Mediciones de pH de muestras de agua tratada

Compatibilidad del probiótico Bacillus subtilis PB6 con antimicrobianos a base de formaldehído y ácidos orgánicos - Image 1

Se ha demostrado que el pH de las muestras de agua diluida tiene un efecto sobre la recuperación de esporas de PB6 de las muestras de agua tratada. El pH de las muestras de agua diluidas tratadas con Sal CURBÒ líquido, Sal CURBÒ K2 líquido y la concentración más alta de ácido fórmico todavía estaba por debajo de pH 6 cuando se utilizó la solución salina tamponada con fosfato (PBS) como diluyente, que nuevamente tiene efecto negativo sobre la recuperación de esporas (Cuadro 2). Sin embargo, la capacidad tamponadora del agua peptídica tamponada (BPW) fue lo suficientemente alta para recuperar el pH de todas las muestras de agua diluida por encima de pH 6,5.

Cuadro 2. Recuperación de esporas de Bacillus subtilis PB6 de muestras de agua tratadas con PBS como diluyente. Las medias ± desviaciones estándar seguidas de letras diferentes en las columnas son significativamente diferentes (p <0,05, ANOVA, LSD).

 Compatibilidad del probiótico Bacillus subtilis PB6 con antimicrobianos a base de formaldehído y ácidos orgánicos - Image 2

No hubo una reducción significativa en el recuento de esporas de Bacillus subtilis PB6 cuando las muestras de agua se trataron con Sal CURBÒ líquido y se almacenaron durante 7 días (Cuadro 3).

Cuadro 3. Recuperación de esporas de Bacillus subtilis PB6 de muestras de agua tratadas según el método de enumeración utilizando BPW como diluyente. Las medias ± desviaciones estándar seguidas de letras diferentes en las columnas son significativamente diferentes (p <0,05, ANOVA, LSD).

Compatibilidad del probiótico Bacillus subtilis PB6 con antimicrobianos a base de formaldehído y ácidos orgánicos - Image 3

CONCLUSIÓN

La recuperación de esporas de Bacillus subtilis PB6 fue significativamente menor en muestras de agua tratadas con Sal CURBÒ K2 Líquido o ácido fórmico después de 7 días de almacenamiento a temperatura ambiente. Sin embargo, la dosis evaluada para Sal CURBÒ K2 Líquido en agua fue del 5% (50 kg / t.), una cantidad aproximadamente 17 veces mayor que la dosis que usamos en la alimentación animal (1-3 kg/t.). Así, se concluyó que Bacillus subtilis PB6 mostró una buena resistencia a Sal CURB K2 y al propio ácido fórmico, y se mantuvo estable en relación al tratamiento con formaldehído.

Referencias bibliográficas

 
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