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Bacteriófagos como desinfectantes de superficies

Publicado: 10 de diciembre de 2018
Por: Xoana Ortiz (Universidad Nacional de Luján y Becaria, Comisión de Investigaciones Científicas); Florencia Prosdócimo; Ernesto Vignoni; Mauricio De Franceschi; y Hebe Alicia Barrios. Universidad Nacional de Luján. Buenos Aires. Argentina
INTRODUCCIÓN
En la avicultura comercial, la tifosis aviar, cuyo agente etiológico es Salmonella enterica subespecie enterica serotipo Gallinarum (SG), afecta a gallinas de postura y causa perjuicios económicos no sólo por la alta mortalidad de las aves sino también por la extremada dificultad de su prevención y control. Los bacteriófagos son virus que infectan y destruyen a las bacterias. Esta actividad lítica y huésped específico los ubica como alternativa terapéutica y profiláctica frente a patógenos como Salmonella. Los fagos, se los puede utilizar además, como una herramienta complementaria para el control de bacterias sobre las superficies y así, evitar el uso masivo de tratamientos químicos que pueden favorecer la selección y proliferación de bacterias resistentes. En un trabajo anterior (Barrios y col.), se demostró que la actividad del fago no se modifica en presencia de los desinfectantes de uso común en avicultura. 
El objetivo del trabajo fue determinar si la aplicación de fagos disminuye el recuento de SG en superficies contaminadas experimentalmente. 
 
MATERIALES Y MÉTODOS 
Bacteriófago: aislado de las heces de una gallina con tifus (Prosdócimo y col). Cepa bacteriana: cultivo SG de campo. Fueron utilizados 6 diferentes superficies, privilegiando las que se encuentran en contacto con las aves. 
 
Cada ensayo correspondió a distintas superficies. 
Ensayo 1: 10 pequeños rectángulos de cinc de comederos; 
Ensayo 2: 10 contenedores (cazoletas) de plástico de bebederos; 
Ensayo 3: 10 bases plásticas de polipropileno de jaulas; 
Ensayo 4: 10 trozos de cinta recolectora de tela; 
Ensayo 5: 10 trozos de rejas metálicas de jaulas; 
Ensayo 6: 10 tubos de polipropileno para la circulación del agua. 
 
Antes de comenzar las pruebas se verificó la ausencia de SG en cada una de las superficies. Posteriormente, los diferentes materiales se sumergieron en un recipiente que contenía un cultivo overnight de SG, se secó en flujo laminar y se incubó 60 minutos a 37°C. A la hora, se determinó la cantidad de unidades formadoras de colonia por ml (UFC/ml) de SG.
 
Luego, cada ensayo se dividió en dos tratamientos;
Tratamiento 1: 5 materiales fueron rociados con109 unidades formadoras de placa por ml (UFP/ml) de fago,
Tratamiento 2: 5 materiales fueron rociados con solución fisiológica (SF).
 
Después de recibir el respectivo tratamiento, las superficies se incubaron a 37°C durante 3 horas. Luego, con un hisopo, se tomaron muestras de las superficies de cada uno de los ensayos con sus distintos tratamientos y fueron colocados en frascos que contenían 150 ml de agua peptona (AP), incubando a 37°C durante 24 horas, para proseguir con las marchas bacteriológicas (Caffer y Terragno, 2001). La determinación de los fagos se realizó mediante la técnica de doble capa (Clokie y Kropinski, 2009) Los datos se analizaron estadísticamente mediante una prueba t. 
 
RESULTADOS 
En todas las superficies ensayadas se constató ausencia de SG (controles). Luego de la contaminación con SG durante 60 minutos, las superficies mostraron altos recuentos de la enterobacteria (entre 2x105 y 2,55x107 UFC/ml)
 
Los resultados obtenidos (Tabla 1) demuestran que en aquellas superficies que recibieron el Tratamiento 1 se observa una marcada disminución de la carga bacteriana con respecto a las que recibieron el tratamiento 2. 
 
Mediante una prueba de hipótesis utilizando el estadístico t, se comprobó que existe una diferencia significativa entre tratamientos con un nivel de confianza del 95%. 
 
Tabla 1: Recuento de SG en las diferentes superficies tratadas

 
DISCUSIÓN 
La desinfección con fagos presenta varias ventajas como menor selección de bacterias resistentes y lisis de las poblaciones bacterianas más rápida y prolongada en el tiempo (Spirincigo, 2011). Nuestros resultados demuestran que el bacteriófago utilizado es capaz de disminuir las poblaciones de SG en todas las superficies ensayadas y puede ser empleado como agente bactericida, junto a otros agentes químicos, en los programas de higiene y desinfección. 
 
CONCLUSIONES 
Los bacteriófagos líticos ofrecen una herramienta complementaria alternativa para el biocontrol de SG en los ambientes de las granjas de gallinas de postura. 
 
BIBLIOGRAFÍA 
-BARRIOS, H; ORTIZ, X; GISMONDI, M. 2015. Bacteriófagos líticos para el biocontrol de la tifosis aviar. XI Congreso Argentino de Virología. Buenos Aires, Argentina. Libro de resúmenes 118- 119. 
-CAFFER, M. & TERRAGNO, R. 2001. Manual de procedimientos para la caracterización de Salmonella. Servicio de Enterobacterias. Departamento de Bacteriología. INEI - ANLIS Dr Carlos G. Malbrán, Buenos Aires, Argentina 
-CLOKIE, M.; KROPINSKI, A. 2009. Bacteriophages. Methods and Protocols. Vol 1 y 2. Springer Protocols. Human Press, New York.
Trabajo presentado en las XI  Jornadas Internacionales de Veterinaria Práctica. Agosto de 2015.  Mar del Plata, Buenos Aires (Argentina)
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Autores:
Mauricio De Franceschi
Universidad Nacional de Lujan
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Ernesto Vignoni
Universidad Nacional de Lujan
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Florencia Prosdócimo
Universidad Nacional de Lujan
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Hebe Barrios
Universidad Nacional de Lujan
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