Utilización de la técnica warthin starry para la determinación de lawsonia intracelullaris y brachyspira spp en cortes histopatológicos de intestino de cerdo

Lawsonia intracelullaris (Li) y Brachyspira spp (Br) son causantes de enteritis en los cerdos, con o sin diarrea. Estos microorganismos se ubican en íleon y colon produciendo allí lesiones características. Los cuadros clínicos y las lesiones anatomopatológicas son insuficientes para dar diagnósticos certeros de las enfermedades causadas por estos patógenos. Lawsonia es una bacteria intracelular, no crece en medios in vitro convencionales, por lo que el aislamiento y diagnóstico serológico resultan complicados cobrando relevancia el diagnóstico histopatológico(1).

Las lesiones observadas en tejidos con tinción de hematoxilina-eosina (HE) evidencian alteraciones típicas de las acciones patógenas de Li y Br en colon, pero es necesario encontrar la asociación de las lesiones histopatológicas con la presencia de las bacterias en su ubicación típica y con la forma característica para confirmar la enfermedad. La técnica de Warthin Starry (WS) posee Nitrato de Plata, este precipita sobre la pared de la bacteria haciendo que se observe más gruesa de lo normal. Esta técnica es utilizada para poner en evidencia la presencia de agentes bacterianos de estructuras espiroquetales y Li. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el uso de la técnica de Warthin Starry sobre cortes histopatológicos de intestino de cerdos con diarrea a fin de diagnosticar las enfermedades producidas por Li y Br.

 

En el presente estudio se realizó un muestreo en 61 cerdos con diarrea, de entre 8 y 21 semanas de edad, mediante necropsia y toma de muestras de la última porción del íleon y la primera del colon, fijándose en formalina al 10%. Se procesaron de rutina hasta su inclusión en parafina. Se realizaron dos cortes de cada muestra. Luego se desparafinaron, rehidrataron y tiñeron una con HE y la otra con WS según lo expresado por Faine en 1965, Luna en 1968, y con las modificaciones realizadas por Youngs en 1969 y Woods y Ellis en 2000 (1).

 

De los 61 animales, 5 presentaron las lesiones típicas de EPP en íleon y solo 2 presentaron numerosas bacterias intracelulares de color negro, de forma curva o de coma en la porción apical del citoplasma de los enterocitos inmaduros de las criptas de Lieberkühn, compatibles con Li por WS, también se encontraron dentro de macrófagos de la lámina propia, sueltas en la luz de las glándulas y en abscesos criptales. Mientras que, 24 animales evidenciaron en colon la presencia de lesiones compatibles con DP y EIP y numerosas estructuras compatibles con espiroquetas en el borde proximal de la superficie epitelial y en la luz de las criptas de Lieberkühn.

 

Los principales hallazgos histopatológicos observados tanto en las criptas ileales como en colon coinciden con las encontradas en otros trabajos donde se describe a Li y a Br como los agentes causantes (2, 3). Si bien WS no es específica y tiene ciertas limitaciones al ser utilizada en tejidos necrosados o autolíticos, resultó sumamente útil a la hora de visualizar ambos agentes etiológicos con su forma, tamaño y ubicación características, además de las lesiones histopatológicas descriptas para cada enfermedad que, al igual que HE, permitirían inferir que las enfermedades se encontraban presentes (4).

A pesar de que algunos reportes indican que WS es una técnica complicada y que se requiere de experiencia para hacerla, resultó ser una técnica rápida y simple, una vez que se lograron ajustar la temperatura, los tiempos de trabajo y se siguieron algunas de las recomendaciones expresadas por Stevens, S. en 2005. Por estos motivos consideramos que podría ser aplicada de rutina y resultaría en un ahorro económico y de tiempo al momento de diagnosticar posibles agentes causales de enteritis en cerdos reemplazando a las modernas técnicas de inmunohistoquímica.

 

1- Huerta y col. Comparison of diagnostic tecniques for Porcine Proliferative Enteropathy (Li). J Comp Path. 129: 179-185. 2003.
2- Jensen y col. 2010. Detection of Li in Formalinfixed Porcine Intestinal Tissue Samples: Comparison of Immunofluorescence and In-situ Hybridization, and Evaluation of the Effects of Controlled Autolysis. J Comp Path. 142: 1-8. 2010.
3- Achacha y col. Develompment of an experimental model allowing discrimintion between virulent and avirulent isolates of Serpulina (Treponema) hyodysenteriae. Can. J. Vet. Res. 60; 45-49. 1996.
4- Rodríguez y col. Prevalencia de enteropatía proliferativa porcina y caracterización histopatológica de las lesiones asociadas en cerdos sacrificados en el Matadero Municipal de Medellín, Colombia. Rev Col Cienc Pec. 17(1): 11-19. 2004.
5- Stevens, S. The Warthin-Starry technique (modified). The demonstration of microorganisms in tissue sections. en: http://users.adam.com.au/royellis/morg.htm. 2005.