Ocurrencia de Cryptosporidium Spp. en cerdos de granjas intensivas. Estudio preliminar del diagnóstico molecular.

Publicado el: 8/12/2016
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Introducción

Los cerdos son infectados por distintas especies/genotipos de Cryptosporidium spp. Estudios recientes revelaron la presencia de C. suis y C. scrofarum en un amplio rango de edades, siendo consideradas como las especies específicas de cerdos. El objetivo de este trabajo fue determinar la ocurrencia de Cryptosporidium spp. en cerdos de granjas intensivas y llevar a cabo un estudio preliminar para la identificación del género Cryptosporidium y de las especies específicas de cerdos.

 

Materiales y métodos

Se tomaron muestras individuales de materia fecal (n=452) de cerdos provenientes de 13 granjas de Buenos Aires, La Pampa, Santa Fé, Entre Ríos y Misiones, desde el año 2013 al 2016, Las muestras fueron obtenidas de lechones de primera, segunda, tercera y cuarta semana de vida.

Para la identificación microscópica de ooquistes ácido-alcohol resistentes se concentraron las muestras por sedimentación – flotación y se colorearon con Ziehl-Neelsen modificado (ZNM). La extracción de ADN de muestras positivas a la presencia de ooquistes se realizó con ZR fecal DNA kit (Zymo, USA). El ADN se amplificó por Nested- PCR en dos etapas. Primero se utilizaron pares de primers para obtener fragmentos del gen 18S rRNA de 830 pb correspondientes al género Cryptosporidium. En una segunda etapa se utilizaron pares de primers para amplificar fragmentos del 18S rRNA correspondientes a las especies específicas de cerdos (482 pb= C. suis y 443 pb= C. scrofarum). Los productos de ambas PCR fueron analizados en geles de agarosa al 1,5% y visualizados por tinción con Sybr safe.

 

Resultados

De las 452 muestras evaluadas, 40 resultaron positivas a la presencia de ooquistes de Cryptosporidium spp. (8,8%). Cryptosporidium spp. fue identificado en 11 de los 13 establecimientos evaluados y en todas las edades estudiadas. De 7 muestras positivas seleccionadas para el diagnóstico molecular sólo una resultó positiva a la PCR género-específica como también a la segunda PCR dando como resultado un fragmento de 482 pb correspondiente a Cryptosporidium suis.

 

Discusión

La tasa de infección encontrada coincidió con la reportada por otros países, sin embargo la prevalencia en Argentina aún se desconoce.

La detección microscópica de ooquistes empleando la técnica de coloración descripta es considerada como una herramienta accesible para completar el diagnóstico coproparasitológico en lechones.

El diagnóstico molecular es importante para conocer las especies/genotipos que afectan a los cerdos de nuestra región y establecer una posible relación entre éstos y la edad de presentación.

Estudios posteriores se llevarán a cabo para aumentar la sensibilidad de la técnica de nested-PCR y se realizará la secuenciación de los fragmentos de 830 pb para determinar la presencia de especies/genotipos no específicos de cerdos así como también infecciones mixtas.

 

Bibliografía

1. Nemejc K. et al. Occurrence of Cryptosporidium suis and Cryptosporidium scrofarum on commercial swine farms in the Czech Republic and its associations with age and husbandry practices. Parasitology Reserch.. 2013. 112:1143-1154.
2. Jeníková M. et al. New view on the age-specificity of pig Cryptosporidium by species-specific primers for distinguishing Cryptosporidium suis and Cryptosporidium pig genotype II. Veterinary Parasitology 2011.176: 120-125.

 
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