Detección de anticuerpos contra el virus de la diarrea epidémica porcina en cerdos de granjas comerciales.

Publicado el: 8/2/2017
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Introducción.

Se realizó un estudio prospectivo longitudinal con los objetivos de:

  • Describir el patrón de excreción y comparar la sensibilidad de los tipos de muestras tomadas en cerdos en crecimiento, por medio de RT-PCR de hisopados fecales de cerdos muestreados individualmente, y muestras de heces y fluidos orales tomadas de corrales;
  • Describir la cinética de anticuerpos contra el virus de la PEDV en muestras de suero individuales y en muestras de fluidos orales mediante ELISA (IgA & IgG);
  • Establecer puntos de corte para IgA & IgG en el ELISA a virus completo (Whole-virus IgA & IgG ELISA).

 

Materiales y métodos.

Las muestras para lograr estos objetivos se obtuvieron de dos sitios de producción (uno positivo a PEDV y otro negativo).

La granja 1 (Missouri, USA) estaba constituida por un galpón de destete-terminación de 52 corrales con 800 cerdos aproximadamente. Se obtuvieron muestras de heces y fluidos orales de 6 corrales y muestras de 5 cerdos por corral (hisopados fecales y suero). Las muestras se tomaron a la llegada de los animales y luego a intervalos de 2 semanas durante 27 semanas. Alrededor de las 13 semanas de edad, la población de animales negativa a PEDV fue expuesta al virus usando técnicas estándares.

La granja 2 (Iowa, USA) estaba constituida por 3 galpones de destete-terminación con 40 corrales y aproximadamente 900 cerdos cada uno. Se obtuvieron muestras de fluidos orales de 36 corrales (4 corrales estaban vacíos) de cada uno de los galpones. Se obtuvieron muestras de suero de 20 cerdos en cada galpón. El muestreo se inició dentro de las dos semanas después de la llegada de los animales y se realizaron muestreos semanales, obteniendo un total de 9 muestreos.

Las muestras de heces y fluidos orales de corrales y los hisopados fecales individuales fueron analizados con RT-PCR para PEDV; los fluidos orales y las muestras de suero fueron analizadas con ELISA a virus completo para IgA e IgG usando procedimientos de rutina en el Laboratorio de Diagnóstico Veterinario de Iowa State University.

 

Resultados.

Los análisis estadísticos se realizaron utilizando un software estadístico (SAS Versión 9.4). Se utilizó un modelo de efectos mixtos con medidas repetidas para analizar la asociación entre la detección del PEDV por RT-PCR y las variables de interés: tipo de muestra y días post exposición (DPE). Se compararon las diferencias en proporción de positivos para PEDV RT-PCR en fluidos orales, hisopados fecales y heces de corrales mediante la prueba exacta de Fisher. Se realizó una estimación puntual y de intervalos de confianza de la sensibilidad y especificidad del ELISA a virus completo para IgG e IgA en muestras de suero y de fluidos orales utilizando la prueba binomial exacta (Fig. 2, 3).

En la granja 1, el virus fue detectado por RT-PCR en la primera toma de muestras post exposición (DPE 6) en hisopados fecales individuales, muestras fecales y fluidos orales de corrales (Fig. 1). Se detectaron los últimos positivos por RT-PCR en hisopados fecales y fluidos orales a los 69 DPE. El mayor porcentaje de muestras positivas se observó en fluidos orales (datos no mostrados). Se detectaron aumentos de IgG e IgA en suero y fluidos orales en muestras recogidas a los 13 DPE. La respuesta de IgA en fluidos orales continuó aumentando hasta los 97 DPE, mientras que las respuestas de IgA en suero alcanzaron un máximo a los 27 DPE (Fig. 2, 3).

La granja 2 fue negativa a RT-PCR durante todo el período de seguimiento. Estas muestras proporcionan una fuente de muestras negativas para el cálculo de los puntos de corte para la prueba de WV ELISA IgA e IgG.


Figura 1

Figura 2

Figura 3

 

Conclusión y discusión.

La cinética de anticuerpos IgG e IgA en fluidos orales y su comparación con las mismas en suero no ha sido previamente reportada. IgG e IgA contra PEDV se detectan fácilmente en suero y fluidos orales a los 10 - 14 días después de la exposición. La respuesta de IgA en fluido oral es particularmente notable por el nivel y la duración.

 
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