Aislamiento de Actinobacillus Pleuropneumoniae Serotipo 4 en Argentina

Actinobacillus pleuropneumoniae (App) es el agente etiológico de la Pleuroneumonía Porcina, que constituye una de las enfermedades respiratorias de mayor impacto económico en la producción de cerdos ya sea por muerte de animales o por cuadros subclínicos crónicos que afectan los índices productivos. Se conocen 15 serotipos de App, cuya identificación en una granja es importante debido a que no poseen la misma patogenicidad (Gottschalk y Taylor, 2006). Cada serotipo produce toxinas hemolíticas/ citotóxicas denominadas como ApxI, ApxII, ApxIII y ApxIV (Haesebrouck y col., 1997), que originan lesiones caracterizadas por una neumonía o pleuroneumonía fibrinosupurativa, hemorrágica y necrotizante (Gottschalk y Taylor, 2006). En la Argentina se han reportado aislamientos de los serotipo 1, 3, 5a, 5b, 7, 8, 12 y 15 (Tamiozzo, 2012).
Por otro lado, si bien el uso de tratamientos antimicrobianos sigue siendo la medida más eficaz para el control de la enfermedad, la aparición de cepas resistentes a algunos de los antimicrobianos de uso común (Kucerova y col. 2011), hace necesario la realización de un antibiograma previo.
El objetivo de este trabajo consiste en informar sobre el aislamiento de Actinobacillus pleuropneumoniae serotipo 4 en una muestra de pulmón de cerdo.

Se trabajó en una granja confinada de ciclo completo, de un solo sitio con 110 madres ubicada en la región oeste del país, que presentaba problemas recurrentes de pleuritis observadas en los cerdos en frigorífico. Paralelamente, en un lote de animales de 60 días de edad, donde se produjo un brote de cuadros respiratorios agudos con el 12% de mortalidad, se procesaron muestras de pulmón de uno de los animales muertos, donde se observaron lesiones focales de 1- 7mm de diámetro, firmes, blancas, bordes netos, crepitantes al corte que se encontraban diseminadas por todo el parénquima (secuestros). La pleura visceral se encontraba engrosada, opaca con leve pérdida de transparencia.

Las muestras de tejido pulmonar fueron sembradas en agar sangre (5% de sangre de oveja) y agar McConkey según protocolos bacteriológicos de rutina, con el agregado de una estría de Staphylococcus epidermidis. Las colonias de App fueron clasificas por sus características estructurales (satelitosis, CAMP) y tinción de GRAM. Previa obtención de ADN del aislamiento con el kit comercial de Fermentas®, la confirmación de la  cepa se realizó por PCR a través de la amplificación del gen omlA. La tipificación se hizo mediante la amplificación de los genes omlA, apx (Gram, 2000), apxIB, tbp1, wzz2 y hp2 (Xie, 2010).

Además, se evaluó la susceptibilidad del aislamiento de App a antimicrobianos de uso común en cerdos por el método de difusión con discos, en agar con 5% de sangre ovina y suplementado con NAD. Los antibióticos evaluados fueron: Norfloxacina, Florfenicol, Ceftiofur, Tiamulina y Doxicilina.

Se aisló A. pleuropneumoniae biotipo I (NAD dependiente) de las muestras del pulmón lesionado. Los cebadores utilizados en la PCR permitieron amplificar las regiones de los genes apxIII, omlA IV y apxIB, por lo que la cepa fue clasificada como serotipo 4.

Por último, la cepa de App aislada fue clasificada como resistente a Doxicilina y Tiamulina; y sensible a Ceftiofur, Florfenicol y a la Norfloxacina.

 

La metodología implementada permitió detectar A. pleuropneumoniae serotipo 4 en un cerdo muerto con lesiones pulmonares crónicas. Considerando lo descripto por Haesebrouck y col. (1997) referido a que la principal toxina producida por App serotipo 4 es la ApxIII, que no es hemolítica pero si fuertemente citotóxica, podemos comprender la naturaleza de las lesiones anatomopatologicas halladas en los pulmones analizados, donde prevalecieron los focos necróticos, con ausencia de las lesiones hemorrágicas descriptas por Gottschalk y Taylor (2006), que suelen estar asociadas a los serotipos 1, 5 y 7, entre otros. Además, los frecuentes decomisos por pleuritis de los cerdos de esta granja en el frigorífico, podrían indicar un comportamiento subclínico crónico de este agente dentro de la población.

El perfil de resistencia a antimicrobianos de la cepa de App recuperada, coincide con la resistencia a tetraciclinas y a tiamulina reportada por Kucerova y col. (2011) en algunas cepas del este de Europa, aunque, en ese trabajo también se observaron algunas cepas resistentes al florfenicol.

Hasta nuestro conocimiento, este es el primer reporte de aislamiento de App serotipo 4 en Argentina, si bien, habría sido aislado en otra granja recientemente (Zielinski y Bessone Com. Per., 2009). Coincidiendo con lo planteado por Gottschalk y Taylor (2006) sobre la importancia de conocer los serotipos presentes en las granjas del país, este trabajo aporta información significativa para poder no solo aplicar medidas preventivas eficaces, como la vacunación, sino también para disminuir el impacto productivo producido por estos serotipos poco virulentos de App que se presentan en forma subclínica y crónica. Además, dada la infrecuente presentación de este serotipo a nivel mundial, es necesario realizar estudios moleculares sobre esta cepa para lograr una caracterización completa de la misma.