Introducción
Herpesvirus tipo 4, también llamado Gammaherpesvirus bovino 4 (BoHV4) ha sido aislado de bovinos con infecciones respiratorias, vulvovaginitis, mastitis, abortos, endometritis e incluso en animales aparentemente sanos. Se asocia mayoritariamente a infecciones del tracto reproductivo de los bovinos, particularmente durante el periodo posparto (ChastantMaillard, 2013). La diseminación viral mediante secreciones nasales, orales o genitales representa una fuente de infección para otros animales. Los hospedadores latentemente infectados son fuentes potenciales de transmisión viral para el rebaño (Morán y col., 2015).
En países de la región, tanto Brasil como en Argentina el virus ha sido detectado desde hace varios años (Costa y col. 2011; Kruger y col., 2015). En Uruguay, las pérdidas reproductivas son el principal problema en la ganadería de cría a nivel nacional, se desconoce la presencia de virus en el rodeo nacional y cuál es el impacto que el mismo puede tener en la salud animal. En cuanto las principales virosis involucradas en fallas reproductivas diagnosticadas en Uruguay, podemos mencionar el virus de la Rinotraqueítis infecciosa bovina IBR (BoHV1) y el virus de la diarrea viral bovina (DVB), ambos ampliamente difundidos en los rodeos lecheros nacionales. Sin embargo, hasta el momento no se ha considerado el BoHV4 como agente causal de fallas reproductivas en Uruguay y su posible impacto en la salud animal. Debido a los diferentes cuadros que causa este virus, la complejidad del diagnóstico clínico, el propósito de este estudio fue detectar BoHV4 en rodeos lecheros en Uruguay.
Materiales y Métodos
Se utilizaron 597 muestras extraídas por venopunción de la vena coccígea (2009 y 2016) correspondientes a ganado Holando multiparo, clínicamente sanos pertenecientes a pequeños productores de los departamentos de Florida, Durazno y Tacuarembó. Para la detección de anticuerpos (Ac) específicos contra BoHV_4 y Ac contra los otros dos virus de importancia reproductiva (BoHV1 y DVB), se utilizó un kit comercial marca Bio X Diagnostics (BIOABORTION ELISA KIT, Belgique, Europe).
Se realizó la técnica de nPCR para la detección de genoma viral en 17 muestras. La extracción del genoma viral se hizo de muestras de sangre por el método de FenolCloroformo. El protocolo de amplificación utilizado fue descrito previamente por Wellenberg y col.
(2001) y Campos y col., (2014). Obteniendo un fragmento de 364pb del gen que codifica para la glicoproteína B (gB) del BoHV4. Como control positivo se utilizó la cepa Movar. Trece productos de PCR fueron secuenciados en ambos sentidos (Forward y Reverse) (Macrogen Inc., Corea) por el método Sanger. Se construyó el árbol con el software MEGA 6 utilizando además cepas de referencia y de la región extraídas del GenBank. La relación evolutiva se estimó utilizando el algoritmo de “vecino más próximo”.
Resultados y Discusión
De un total de 597 sueros de bovinos Holando en lactación clínicamente sanos, se obtuvo 195 (32.7%) animales seropositivos a BoHV4, de los cuales 65.6% fueron clasificados como “positivos débiles”. Por departamento, 34% (84/163) resultó serología positiva en Tacuarembó, 23% (57/247) en Durazno y 52.4% (54/103) en Florida, siendo estas diferencias significativas (p=0.00). Del total de las 597 muestras, 285 (47,7%) animales fueron seropositivo al BoHV1, de los cuales 114 (19%) fueron seropositivos a ambos herpesvirus (BoHV1 y BoHV4). De este resultado, se evidenciaron que 81 muestras de 195 seropositivas a BoHV4, no lo fueron para el BoHV1. En cuanto al DVB la mayoría de los animales fueron seropositivos (94,4%). De estos, 170 (28.5%) fueron seropositivos a BoHV4 (Tabla 1). De un total de 47 animales del departamento de Florida con antecedentes reproductivos, el 85% (40/47) fueron seropositivos a BoHV4. Se eligieron 17 muestras al azar que fueron procesadas mediante nPCR para la detección del genoma viral, obteniéndose 4 negativos y 13 positivos. Posteriormente, se enviaron a secuenciar las 13 amplificaciones obtenidas. Las secuencias obtenidas fueron depositadas en el banco de datos del GenBank (Número de acceso: MH799307, MH799308, MH799309, MH799310, MH799311, MH799312, MH799313, MH799314, MH799315, MH799316, MH799317, MH799318, MH799319).
En Uruguay hasta el momento, se desconoce la situación de BoHV4 en la población bovina, siendo este el primer reporte de la detección serológica y molecular del virus. En el presente ensayo se detectó un 32.7% de seropositividad a BoHV4 en el total de las muestras analizadas, habiendo uno de los establecimientos, con una seroprevalencia de 85%. Del total de muestras analizadas, más del 50% son muestras clasificadas como débilmente positivas. De la filogenia obtenida, se destaca que las cepas de BoHV4 en Uruguay están agrupadas con otras cepas de la región (Brasil y Argentina), y otros países del mundo como Italia y Turquía.
Si bien en la actualidad, las enfermedades reproductivas y más específicamente las virosis, cada día ocupan un papel más importante, en Uruguay existen pocas evidencias claras de los agentes infecciosos involucrados a nivel reproductivo. En caso que se demuestre que BoHV4 es un importante agente en Uruguay, se debería buscar estrategias de control distintas a la vacunación, teniendo en cuenta que no existe inmunidad cruzada frente a este y otros herpesvirus que sí están en las vacunas reproductivas, como BoHV1. En conclusión, este trabajo demuestra por primera vez la presencia de BoHV4 en bovinos en Uruguay. Se desconoce completamente el rol y el impacto del virus en los índices reproductivos del país, lo que deja abierta la discusión sobre la necesidad de incorporarlo dentro de los agentes diferenciales de fallas reproductivas.