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Plasma Secado por Atomización en Nutrición Avícola: Salud Intestinal y Desempeño Productivo

El plasma secado por atomización en nutrición avícola es una fuente proteica funcional rica en inmunoglobulinas y péptidos bioactivos. Su prevención y control de trastornos entéricos se implementan mediante la modulación de la mucosa intestinal, manteniendo umbrales de inclusión del 1.0% al 3.0% en dietas de arranque, lo que previene la enteritis necrótica y optimiza el rendimiento productivo [3].

Desafío Técnico y Causa Primaria: El plasma secado por atomizacion en nutricion avicola mitiga la disrupción entérica por Clostridium perfringens y calor en pollos broilers.

Impacto Cuantitativo: Reducción del índice de conversión de 1.65 a 1.58, disminución de mortandad entérica en 4.5% y ganancia de peso acumulada de +35 g/ave a los 14 días.

Protocolo de Intervención Verificado: Suplementación con SDP al 1.5% a 3.0% (3 a 4 g acumulados/ave) en el alimento preiniciador (0-10 días de vida) a 200 °C de aire de entrada en secado spray.

Mecanismo de Acción del Plasma Atomizado en la Salud Intestinal Avícola

La suplementación con plasma secado por atomización preserva la integridad ultraestructural del enterocito y reduce la infiltración de mediadores proinflamatorios en el epitelio digestivo del pollo broiler [2].

El plasma animal secado por atomización (SDP, por sus siglas en inglés Spray-Dried Plasma) es un ingrediente complejo rico en proteínas funcionales, inmunoglobulinas plasmáticas (principalmente IgG y IgM), factores de crecimiento, albúmina, transferrina y péptidos bioactivos activos [19]. A diferencia de las fuentes proteicas puramente nutricionales destinadas a aportar aminoácidos para la síntesis de tejido muscular, el SDP ejerce una actividad biológica directa en la superficie del tracto gastrointestinal de las aves, un órgano que consume aproximadamente el 37% del oxígeno metabólico total y concentra más del 70% de las células inmunitarias del organismo aviar [2].

Momento Clave: «En yeyuno, el plasma aviar disminuye el factor de crecimiento tumoral y aumenta la expresión de proteínas de unión estrecha, mejorando la estabilidad intestinal y elevando la interleucina 10 plasmática.»

Disertante: Gabriel MalloVer video completo »

En el lumen intestinal de los pollos de engorde, las inmunoglobulinas intactas presentes en el plasma secado por atomización neutralizan patógenos entéricos y toxinas mediante mecanismos de exclusión competitiva y aglutinación [7]. Este proceso evita la adhesión microbiana a los receptores del glicocálix de los enterocitos, impidiendo la activación de la cascada proinflamatoria mediada por la vía del factor nuclear kappa B (NF-κB). Al inhibir esta señalización, se reduce sustancialmente la liberación de citoquinas proinflamatorias como la interleucina-1 beta (IL-1β), el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) y la interleucina-6 (IL-6), previniendo la inflamación de la submucosa intestinal y el consiguiente edema epitelial [14].

"El tracto digestivo de un ave consume el 37% del oxígeno metabólico y contiene más del 70% de las células inmunes; al reducir la carga patógena luminal mediante hemoderivados funcionales, evitamos el gasto energético derivado del proceso inflamatorio y preservamos la estructura digestiva." — Gabriel Mallo, M.V., Esp. Nutrición Aviar [2]

A nivel histo-morfométrico, la atenuación del estado inflamatorio reduce significativamente la apoptosis en el vértice de las vellosidades intestinales y disminuye la hiperplasia compensatoria en las criptas de Lieberkühn [4]. Esto se traduce en un incremento cuantificable en la relación entre la altura de la vellosidad y la profundidad de la cripta (relación V:C) en el duodeno y yeyuno, expandiendo el área de superficie funcional para la absorción de nutrientes [10]. Asimismo, la ingesta de péptidos bioactivos promueve la hiperexpresión de proteínas de unión estrecha (tight junctions), tales como la zonula occludens-1 (ZO-1), ocludina y claudina-1, fortaleciendo la función de barrera física y reduciendo la permeabilidad paracelular a nivel entérico [19].

Etapa / Sitio	Proceso Fisiológico o Reacción	Impacto Biológico y Cuantitativo	Cita Técnica
Lumen Duodenal	Aglutinación de enteropatógenos por IgG/IgM plasmáticas	Reducción de adhesión bacteriana en un 65%	[7]
Glicocálix Epitelial	Bloqueo de la vía NF-κB y supresión de IL-1β y TNF-α	Caída del gasto metabólico inmune en 15%	[14]
Enterocito Apical	Expresión aumentada de enzimas borde en cepillo (Maltasa/Amilasa)	Incremento de digestibilidad aparente en +4.2%	[10]
Unión Paracelular	Hiperexpresión de ARNm para Zonula Occludens-1 y Ocludina	Disminución de la permeabilidad intestinal	[19]

El control inmunológico ejercido por el SDP altera favorablemente el microbioma del ciego y del yeyuno. Al limitar el extravasado de proteínas plasmáticas hacia la luz intestinal producido por lesiones entéricas, se remueve el sustrato proteico de fermentación del cual dependen microorganismos patógenos e inflamatorios como Clostridium perfringens y Escherichia coli [9]. Simultáneamente, esta estabilidad del ecosistema microbiano favorece la proliferación de poblaciones bentónicas de bacterias benéficas, tales como Lactobacillus spp. y Bifidobacterium spp., las cuales sintetizan ácidos grasos de cadena corta (AGCC, principalmente acetato y butirato) que nutren activamente al colonocito y estimulan la proliferación del epitelio digestivo [7].

Plasma Secado por Spray en Dietas de Preiniciación y Arranque de Broilers

La adición de un 1.5% a 3.0% de plasma atomizado durante los primeros diez días de vida incrementa la masa relativa de vellosidades duodenales en un 18% y acelera la maduración enzimática intestinal [4].

En la primera semana de vida post-eclosión, el pollo de engorde experimenta una transición metabólica crítica, pasando de una nutrición lipídica endógena basada en la absorción del saco vitelino a un régimen alimentario exógeno rico en carbohidratos y proteínas vegetales completas [3]. Durante esta fase inicial, la capacidad enzimática exocrina del páncreas y la expresión de peptidasas en el borde en cepillo de la mucosa intestinal son inmaduras. La inclusión del plasma secado por atomizacion en nutricion avicola durante la fase preinicial (días 0 a 7 u 0 a 10) proporciona proteínas de altísima digestibilidad ileal estandarizada (superiores al 95%), minimizando el flujo de nitrógeno no digerido hacia las secciones posteriores del tracto digestivo [3].

Fig. 2: Evidencia Técnica — Composición nutricional del SDP para aves (Dr. Steve Leeson)

El aporte nutricional y funcional del SDP en la etapa de preinicio se ajusta rigurosamente en las matrices de formulación de raciones de alta densidad energético-proteica. De acuerdo con las caracterizaciones bromatológicas de la industria, el plasma secado por atomización contiene un perfil de proteína cruda entre el 70% y el 78%, un aporte de lisina digestible de 6.8% a 7.2%, de treonina digestible de 4.1% a 4.5%, y un equilibrado contenido de valina y triptófano [3]. A diferencia de otras fuentes concentradas proteicas, el SDP provee una matriz altamente palatable que estimula el consumo temprano de alimento (feed intake), factor correlacionado de forma directa con el peso corporal final del broiler a la edad de faena [5].

"Consumir entre 3 y 4 gramos acumulados de plasma atomizado por ave durante los primeros 7 a 10 días de vida es suficiente para asegurar la hipertrofia precoz del epitelio intestinal y un salto cualitativo en la conversión alimenticia del lote." — Luís Rangel, M.V., M.Sc., Nutricionista Animal [5]

Las estrategias de dosificación en dietas de preiniciación avícola varían según la gravedad del desafío biológico de la granja y la arquitectura del programa nutricional. Las directrices técnicas recomiendan niveles de inclusión del 1.0% al 2.5% de la ración preiniciadora para sistemas con alto estatus sanitario, y de hasta un 3.0% a 5.0% en granjas con antecedentes de enteropatías estacionales o alta carga microbiana en cama [13]. Esta estrategia garantiza que cada pollito ingiera la dosis acumulada óptima de 3.0 a 4.0 g de SDP en la fase de pre-arranque, sentando las bases fisiológicas para una absorción de nutrientes maximizada durante todo el ciclo productivo [5].

Dosis objetivo acumulada de SDP por ave: 3.0 g a 4.0 g

Secuencia del Proceso	Parámetro / Condición
Fase 1	Dosis objetivo acumulada de SDP por ave: 3.0 g a 4.0 g
+-- Inclusión al 2.0% en alimento preiniciador (Consumo 0-10 días: 200 g/ave)	-
Fase 2	Aporte: 4.0 g SDP
+-- Inclusión al 1.5% en alimento preiniciador (Consumo 0-10 días: 200 g/ave)	-
Fase 3	Aporte: 3.0 g SDP

Asimismo, el uso de SDP en dietas de inicio actúa de forma sinérgica con la microflora benéfica. Al prevenir el daño mecánico o inmunogénico de la pared digestiva por antígenos alimentarios (como las β-conglicininas o los factores antitrípsicos no desnaturalizados de la harina de soya convencional), el estroma intestinal requiere menor energía de mantenimiento [12]. Los aminoácidos digestibles y la energía metabólica ahorrada son reorientados biológicamente hacia el desarrollo acelerado de la masa muscular de la pechuga y la expansión de la capacidad inmunitaria adaptativa bursa-dependiente [2].

Beneficios del Plasma Animal Frente al Estrés Ambiental y Desafíos Inmunológicos

El plasma secado por atomización mitiga las caídas de consumo inducidas por el estrés térmico severo y mantiene la tasa de crecimiento corporal en ambientes de alta densidad poblacional [6].

Fig. 4: Evidencia Técnica — Plasma Atomizado: Inmunomodulación y Salud Intestinal en Broilers (Ricardo Esquerra, R., Joy Campbell y Javier Polo)

El estrés ambiental, constituido principalmente por las altas temperaturas (estrés por calor), las variaciones térmicas bruscas, la mala calidad del aire (elevada concentración de amoníaco > 20 ppm) y la sobrepoblación en los galpones (> 14-16 aves/m²), induce un estado de distrés sistémico en las aves de engorde [8]. Bajo estrés térmico, el broiler redistribuye el flujo sanguíneo periférico mediante vasodilatación hacia las zonas desprovistas de plumas para disipar calor, reduciendo la perfusión vascular en el lecho esplácnico y digestivo [6]. Esta isquemia intestinal causa hipoxia tisular, depleción de ATP intracelular en las células epiteliales, generación descontrolada de especies reactivas del oxígeno (ROS) y la consecuente rotura de los complejos proteicos de las uniones oclusivas [8].

El síndrome de "intestino permeable" (leaky gut) subsiguiente permite la traslocación masiva de endotoxinas liposacáridas (LPS) bacterianas y patógenos hacia la circulación portal. En aves alimentadas con dietas suplementadas con plasma secado por atomizacion en nutricion avicola, la gravedad de este fenómeno se reduce sustancialmente. Las inmunoglobulinas y albúminas plasmáticas solubles presentes en el lumen previenen la lisis bacteriana descontrolada y neutralizan el LPS luminal antes de que tome contacto con los receptores Toll-like Receptor 4 (TLR-4) presentes en las células dendríticas y macrófagos de la lámina propia [7].

Fig. 5: Evidencia Técnica — SDP mejora broilers bajo estrés y alta densidad (Globalvet)

Frente a desafíos bacterianos y parasitarios severos, como las coinfecciones entre Eimeria spp. (coccidiosis) y Clostridium perfringens (causante de la enteritis necrótica), la inclusión de SDP ha demostrado reducir dramáticamente la tasa de mortalidad y la gravedad de las lesiones macroscópicas e histológicas [9]. Las lesiones causadas por la replicación de eimerias destruyen el epitelio apical, provocando la fuga de plasma sanguíneo al lumen. Este exudado proteico provee el medio ideal para la proliferación salvaje de cepas toxigénicas de C. perfringens (productoras de toxina alfa y NetB) [9]. La presencia de SDP en la dieta compensa la pérdida de defensas mucosales, inhibe el sobrecrecimiento clostridial y acelera la tasa de renovación (turnover) enterocítica [9].

"En modelos de desafío entérico con Clostridium perfringens y Eimeria, la adición de plasma secado por spray mantuvo la tasa de supervivencia de las aves por encima del 96% y redujo la conversión alimenticia en más de 12 puntos en comparación con los controles infectados no tratados." — Dr. Javier Polo, Vicepresidente de I+D, APC Inc. [9]

Matriz de PCC	Indicador Operativo / Parámetro Crítico	Umbral Crítico Mínimo/Máximo	Frecuencia de Monitoreo	Acción Correctiva Inmediata	Cita Técnica
1. Selección de Sangre	Inspección veterinaria ante-mortem de animales donantes	100% de animales aprobados para consumo humano	Continuo por lote	Rechazar materia prima de zonas con enfermedades notificables OIE	[19]
2. Enfriamiento Prontuario	Temperatura de la sangre fresca post-recolección	Mantenimiento estricto a ≤ 4.0 °C	Registrador automático continuo	Descartar lotes con temperatura > 8.0 °C por proliferación microbiana	[20]
3. Concentración Membrana	Sólidos solubles pre-atomización por nanofiltración	Concentración objetivo del 20% al 25% de sólidos	Por lote de producción	Re-procesar por membrana si el nivel de sólidos es < 18%	[19]
4. Secado Spray (Entrada)	Temperatura de aire de entrada en cámara de secado	200.0 °C a 220.0 °C	Monitoreo SCADA en tiempo real	Ajustar flujo de gas si cae por debajo de 195.0 °C	[22]
5. Secado Spray (Salida)	Temperatura mínima del producto en la corriente de salida	Mínimo estricto de ≥ 80.0 °C	Interlock automático instantáneo	Parada automática del sistema de empaque si T < 80.0 °C	[19]
6. Tratamiento UV-C	Irradiación de fotopurificación en fase líquida	Dosis acumulada de 3,000 J/L	Continuo en línea de flujo	Recirculación obligatoria si la fluencia baja de 2,800 J/L	[24]
7. Almacenamiento Térmico	Cuarentena post-empaque a temperatura controlada	Mantenimiento a ≥ 20.0 °C por un mínimo de 14 días	Diaria con termógrafos calibrados	Extender la cuarentena si T ambiental cae < 18.0 °C	[22]
8. Control de Cenizas	Nivel de minerales y cenizas en el producto final (SDP 78)	Máximo permitido del 8.0% al 9.0% de cenizas	Por cada lote final empaquetado	Ajustar el lavado en fase de nanofiltración y desalinizante	[2]
9. Granulometría y Humedad	Porcentaje de humedad e higroscopicidad final	Máximo estricto del 5.0% al 8.0% de humedad	Por lote terminado	Rechazar sacos empacados con humedad > 8.5%	[3]
10. Mezclado en Planta	Homogeneidad de dispersión de SDP en alimento preiniciador	Coeficiente de Variación (CV) < 5.0%	Evaluación mensual en mezcladora	Incrementar el tiempo de mezclado seco a un mínimo de 180 s	[5]

Impacto de las Proteínas de Plasma en la Conversión Alimenticia y Rendimiento a la Canal

La inclusión de proteínas plasmáticas deshidratadas mejora el índice de conversión alimenticia en 7 puntos de eficiencia y eleva el rendimiento de canal eviscerada en un 1.2% [13].

Fig. 3: Evidencia Técnica — SDP mejora eficiencia alimentaria y crecimiento en pollos (Dr. Steve Leeson)

Los parámetros zootécnicos clave en la avicultura de engorde comercial —ganancia diaria de peso (GDP), índice de conversión alimenticia (FCR) y rendimiento de carne de pechuga a la canal— están directamente vinculados a la eficiencia digestiva de la fase de arranque [4]. La inclusión estratégica de plasma secado por atomizacion en nutricion avicola desencadena un efecto acumulativo de crecimiento. Las aves que reciben de 1.5% a 3.0% de SDP en la fase preinicial (días 0-10) logran un peso corporal significativamente superior al día 14 (con incrementos de +25 g a +40 g por ave respecto al control), ventaja morfológica que se amplifica hacia el final del ciclo zootécnico (día 35-42), resultando en pesos de faena entre 80 g y 150 g superiores por ave [10].

El beneficio en el índice de conversión alimenticia ajustado por peso (FCRc) se explica mediante la partición energética corporal. Cuando el aparato digestivo no padece inflamación crónica subclínica, el ave no desvía glucosa ni aminoácidos metabólicos hacia la producción de reactivos de fase aguda hepáticos (como haptoglobina y amiloide A sérico) ni hacia el recambio hiperplásico del epitelio digestivo [2]. Esta "economía metabólica" reasigna una proporción mayor de la energía metabolizable aparente (EMA) ingerida directamente hacia la deposición proteica en los miofilamentos de actina y miosina del músculo Pectoralis major [13].

INGRESO DE ENERGÍA Y AMINOÁCIDOS DENTRO DEL AVE

v v

[Dieta Control Convencional] [Dieta Suplementada con SDP]

- Alta inflamación subclínica - Ausencia de inflamación mucosa

- Elevada apoptosis enterocítica - Preservación de tight junctions

- Gasto en reactivos de fase aguda - Mínimo gasto inmune mantenido

v v

PÉRDIDA METABÓLICA DIVERGENTE REDIRECCIÓN NUTRICIONAL DIRECTA

- 15-25% EMA consumida en intestino - Maximización de deposición de actina

- FCR elevado (ej. 1.68) - Optimización de FCR (ej. 1.59)

- Caída de rendimiento de canal - Incremento del +1.2% en rendimiento

En evaluaciones de rendimiento al procesamiento industrial en plantas de faenamiento, la canal de broilers alimentados con SDP presenta un menor porcentaje de grasa abdominal (fat pad) y un incremento estadísticamente significativo en el rendimiento del corte principal (pechuga desosada) [13]. Este fenómeno se atribuye a la alta biodisponibilidad y perfecta digestibilidad del perfil de aminoácidos esenciales del plasma, especialmente la lisina, treonina y metionina, que reducen el desequilibrio proteico durante el desarrollo de las fibras musculares tempranas [3].

Parámetro Productivo o Característica de Canal	Dieta Control (Sin SDP)	Dieta Preiniciadora con SDP (2.0%)	Diferencia / Impacto Zootécnico	Referencia
Peso Corporal a los 7 Días (g/ave)	172.5 g	188.2 g	Incremento de +15.7 g (+9.1%)	[13]
Peso Corporal a los 42 Días (g/ave)	2,750.0 g	2,865.0 g	Incremento de +115.0 g (+4.18%)	[10]
Índice de Conversión (FCR 0-42 días)	1.685	1.612	Reducción de -0.073 (-7.3 puntos)	[4]
Mortalidad Acumulada (%)	4.80%	2.10%	Caída de 4.80% a 2.10% (-2.70%)	[9]
Rendimiento de Canal Eviscerada (%)	72.10%	73.35%	Aumento del +1.25% en canal	[13]
Rendimiento de Pechuga Desosada (%)	24.50%	25.80%	Incremento del +1.30% en músculo	[13]
Incidencia de Pododermatitis (Grave)	18.50%	6.20%	Reducción de 18.50% a 6.20%	[8]

Hemoderivados y Plasma Spray Dried como Alternativa Proteica a la Harina de Soya

El plasma secado por atomización ofrece una digestibilidad ileal estandarizada de aminoácidos superior al 92%, sustituyendo eficazmente a la harina de soya industrial en raciones de arranque [12].

La harina de soya (o soja) procesada por extracción de solvente es la fuente proteica basal en la avicultura mundial. Sin embargo, su inclusión en porcentajes elevados (> 30-35%) en dietas preiniciadoras de pollitos recién nacidos involucra serios inconvenientes fisiológicos debido a la presencia de antígenos termoestables (glicinina y β-conglicinina), oligosacáridos indigestibles (rafinosa y estaquiosa) y factores antitróficos residuales [2]. Estos componentes provocan reacciones alérgicas locales, aumento de la viscosidad en la digestas e hipertrofia pancreática compensatoria, reduciendo la eficiencia de utilización de los nutrientes [2].

"Mientras las proteínas vegetales aportan factores antinutricionales que requieren cuantificación para evitar caídas productivas, las proteínas animales procesadas por atomización aportan factores pronutricionales con alta actividad biológica." — Gabriel Mallo, M.V., Esp. Nutrición Aviar [2]

La sustitución parcial de la harina de soya o del concentrado de proteína de soya por plasma secado por atomizacion en nutricion avicola permite formular dietas con menor nivel de proteína cruda total sin sacrificar la concentración de aminoácidos digestibles ileales. Esto responde al concepto de la "Proteína Ideal", donde el equilibrio exacto de aminoácidos evita el exceso de nitrógeno plasmático. La deaminación de aminoácidos excedentes provenientes de fuentes vegetales de baja digestibilidad requiere un costo metabólico de 112 kcal de energía metabolizable aparente por cada kilo de peso metabólico para la síntesis y excreción de ácido úrico vía renal [2].

Componente Bromatológico / Aminoácido	Plasma Secado Atomizado (SDP)	Harina de Sangre Entera (Spray)	Concentrado Proteico de Soya	Harina de Pescado Premium	Cita Técnica
Proteína Cruda (%)	78.00%	87.00%	65.00%	66.00%	[2]
Materia Seca (%)	92.50%	92.00%	90.00%	91.00%	[3]
Cenizas Total (%)	7.60%	4.20%	6.50%	15.00%	[2]
Lisina Digestible (%)	6.85%	7.40%	3.80%	4.90%	[3]
Metionina Digestible (%)	1.15%	1.05%	0.85%	1.75%	[3]
Treonina Digestible (%)	4.20%	3.80%	2.30%	2.60%	[2]
Triptófano Digestible (%)	1.35%	1.10%	0.78%	0.65%	[3]
Sodio / Cloro (%)	2.20% / 1.80%	0.45% / 0.35%	0.05% / 0.08%	0.80% / 1.10%	[2]
Digestibilidad Ileal Promedio	94.50%	82.00%	88.00%	89.00%	[3]

El uso de hemoderivados de alta bioseguridad sometidos al proceso de secado Spray-Dry (200 °C de aire de entrada y ≥ 80 °C de temperatura del producto de salida), combinado con almacenamiento térmico en cuarentena (20 °C por 14 días) e irradiación UV-C redundante, garantiza la inactivación biológica total de bacterias y patógenos aviares o porcinos [22]. La incorporación de SDP frente a fuentes tradicionales como la harina de pescado elimina de raíz el riesgo de contaminación por Salmonella spp. y la variabilidad en los niveles de aminas biógenas (como histamina y gizzardina), las cuales causan erosión de molleja y úlceras proventriculares en broilers comercialmente criados [9].

Preguntas Frecuentes (FAQ)

Q: ¿Qué medicamento se usa para tratar el Mycoplasma en aves? A: El tratamiento de elecciones clínicas contra infecciones por Mycoplasma gallisepticum o M. synoviae incluye macrólidos y lincosamidas como la tilosina, tilmicosina, tiamulina o tartrato de tilvalosina administrados en agua o alimento [1].

Q: ¿Qué es el Mycoplasma en aves? A: El Mycoplasma es un género de bacterias aviares desprovistas de pared celular que causa la Enfermedad Respiratoria Crónica (ERC) y aerosaculitis en broilers y ponedoras, provocando decomisos en planta de faena y mermas en la conversión [1].

Q: ¿Existe una vacuna contra el micoplasma en aves? A: Sí, existen vacunas vivas atenuadas (como las cepas F, 6/85 o TS-11) y bacterinas inactivadas comercialmente desarrolladas para inmunizar reproductoras y ponedoras comerciales frente a Mycoplasma gallisepticum [1].

Q: ¿Qué antibiótico se recomienda para los pollos con problemas respiratorios? A: Para cuadros respiratorios bacterianos complicados se recomiendan antibióticos de acción sistémica o respiratoria como la tilmicosina, enrofloxacina, doxi-ciclina o florfenicol bajo la supervisión directa del médico veterinario avícola [1].

Q: ¿Cuál es la dosificación y forma de inclusión del plasma secado por atomización en la dieta avícola? A: Se dosifica a razón del 1.5% al 3.0% exclusivamente en el alimento preiniciador (primeros 7 a 10 días de vida), asegurando un consumo objetivo de 3 a 4 g de SDP por ave [5].

Q: ¿Cómo se diferencia el plasma secado por atomización de la harina de sangre convencional? A: El SDP se obtiene centrifugando la sangre fresca para separar los glóbulos rojos del plasma, secándolo en frío/spray para preservar la funcionalidad de las inmunoglobulinas. La harina de sangre coagula y cocina la sangre completa, destruyendo las proteínas funcionales [2].