Contaminación de huevos en la incubadora

La transmisión de cepas APEC (Avian Pathogenic Escherichia coli) por contaminación de huevos incubables o infección embrionaria ha sido descrita (Barnes et al., 2003). Puede ocurrir que aunque pocos pollitos eclosionen ya infectados, la difusión de las cepas tenga lugar por transmisión horizontal en el momento de la eclosión, infectándose gran cantidad de pollitos procedentes del mismo o de otros lotes de reproductoras en las nacedoras (Dhillon & Jack, 1996). Estas cepas APEC pueden dar lugar a infecciones localizadas como onfalitis y celulitis o a infecciones sistémicas, observándose como patologías principales perihepatitis, pericarditis, aerosaculitis, neumonía y casos de sinovitis y osteomielitis.

La condronecrosis bacteriana con osteomielitis da lugar a cojeras que originan retraso en el crecimiento, mala calidad de pollito y decomisos en matadero, produciendo pérdidas económicas importantes para la industria avícola. Aunque otras bacterias, principalmente Staphylococcus aureus, producen un cuadro similar, Escherichia coli también se ha descrito como una causa importante de estos problemas (McNamee & Smith, 2000).

El objetivo de este estudio fue determinar si Escherichia coli era el agente infeccioso implicado en el proceso, estudiar el perfil de sensibilidad antibiótica de los aislados e investigar los clones circulantes así como el posible origen y diseminación de los mismos.

 Varios lotes de broilers comenzaron con cojeras a partir de la segunda semana de vida, siendo en general lotes procedentes de tres granjas de reproductoras (A, B y C). Se analizaron 60 pollitos recién eclosionados, 20 procedentes de la granja de reproductoras A, 20 de la granja de reproductoras B y 20 de la granja de reproductoras C. 10 pollitos de cada uno de los lotes se analizaron previamente a su vacunación (lote A1, lote B1 y lote C1) y los otros 10 tras administrarles las vacunas correspondientes junto con gentamicina (lote A2, lote B2 y lote C2).

Las muestras que se analizaron fueron saco vitelino y médula ósea del fémur, siguiendo el método descrito por McNamee et al. (1998). Las muestras se cultivaron en agar sangre, agar MacConkey, agar sal manitol, agar Enterococcosel y en el caso de los huesos en caldo infusión cerebro corazón. En este último caso, tras 24 horas de enriquecimiento a 37º C, se sembraron los caldos en los medios sólidos citados anteriormente.

Los aislados de Escherichia coli obtenidos se examinaron para determinar su sensibilidad a diferentes antimicrobianos por el método de difusión en disco. Además, se caracterizaron por electroforesis en campo pulsante (PFGE) siguiendo el protocolo descrito por Pulsenet (Ribot et al., 2006).

Los resultados de la incidencia de Escherichia coli en los distintos lotes y muestras analizadas se recogen en la Tabla 1. En todas las cepas aisladas se estudió el perfil de resistencia a diferentes antimicrobianos. Los resultados obtenidos se recogen en la Figura 1.

Tabla 1: incidencia de E. coli en los lotes de pollitos en relación a las muestras analizadas.

 Figura 1: porcentaje de resistencia a diferentes antimicrobianos según los lotes.

El hecho de que se hayan aislado 4 cepas sensibles a gentamicina en el lote C2 podría explicarse por fallos en la administración de la vacuna, ya que 2 de ellas proceden del vitelo y hueso del mismo pollito. Con la técnica de la electroforesis en campo pulsante se obtuvieron un total de 12 pulsotipos. Dos de ellos fueron los mayoritarios (Figura 2), detectándose uno en hueso y vitelo de los tres lotes de pollitos antes de ser vacunados y otro, resistente a gentamicina, solo en hueso de los lotes B2 y C2, es decir tras la vacunación.

 Figura 2: imagen de electroforesis en campo pulsante

Los carriles 2, 3 y 10 corresponden al clon resistente a gentamicina y los carriles 4,5 y 6 al clon de hueso y vitelo que se aisló a partir de pollitos procedentes de los tres lotes de reproductoras. Los otros pulsotipos corresponden a clones no mayoritarios. Carril M: marcador de pesos moleculares.

El primer punto destacable es el elevado porcentaje de aislamientos de Escherichia coli a partir de vitelo y hueso de pollitos no vacunados, lo cual ha sido observado en otras integraciones con problemas de mortalidad elevada en primeras semanas de vida (García Peña et al., 2009a). Este hecho, unido al aislamiento de cepas de un mismo pulsotipo en pollitos procedentes de distintas granjas de reproductoras, hace pensar que la entrada de estas cepas en la cadena productiva se produjo por huevos contaminados y posterior difusión en el momento de la eclosión (García Peña et al., 2009b). Así, la transmisión vertical de cepas de un mismo clon de Esherichia coli resistente a fluoroquinolona ha sido descrita. Asimismo, este clon produjo poca mortalidad embrionaria, aunque posteriormente dio lugar a problemas de colibacilosis en la granja (Petersen et al., 2006). Sería necesario analizar hisopos cloacales de las reproductoras de las tres granjas para confirmar si hay transmisión vertical y determinar el origen de las cepas.

La osteomelitis por Escherichia coli se produce normalmente tras una infección generalizada (Hofacre, 2003). Sin embargo, la clínica observada en los broilers consiste en la aparición de cojeras a partir de la segunda semana de vida, sin observarse problemas en el arranque de los pollitos ni otras patologías como pericarditis, perihepatitis, etc.. Esto podría deberse a que estas cepas tengan un tropismo particular por la médula ósea, lo que explicaría que haya un porcentaje de aislamientos mayor en hueso que en vitelo de pollitos sin vacunar. También, los pollitos se tratan con antibiótico cuando comienzan los síntomas y se elimina la infección generalizada, pero probablemente el antibiótico no alcanza la concentración adecuada ni se administran el tiempo suficiente para eliminar la infección en el tejido óseo.

Otro aspecto importante es el elevado porcentaje de cepas multirresistentes. Así, un 30% de las cepas son resistentes a enrofloxacina, amoxicilina y doxiciclina y otro 33% tenían ese mismo perfil de resistencia pero añadiendo además la gentamicina. Los antibióticos frente a los que se observan menor porcentaje de resistencias y por tanto los más aconsejables para el tratamiento serían la lincoespectinomicina y la apramicina.