Potente efecto inmunosupresor del Adenovirus grupo C, serotipo-4. Correlación entre la respuesta inmune Th1 Th2. Causante del Síndrome de Hepatitis Hidropericardio: Meta análisis

1 introducción.

El Síndrome de Hepatitis Hidropericardio (SHH) es una enfermedad altamente prevalente en el mundo, Es una grave enfermedad inmunosupresora de las aves de corral, causada por el Adenovirus Aviar serotipo 4 (FAdV-4) (Fowl Adenovirus Seotype-4 por sus siglas en ingles). Fue identificado por primera vez en Pakistán en 1989[1]. el Adenovirus Aviar (FAdV-4) ha sido reportado al rededor del mundo en países como Estados Unidos[2] Canadá[3] Corea del Sur[4] Chile[5].y presenta un grave impacto económico sobre la industria a nivel mundial[6] El FadV-4 se caracteriza por presentar una acumulación de liquido transparente o de color pajizo de consistencia acuosa o gelatinosa en el saco peri cardiaco, hepatitis, nefritis y presenta una alta tasa de mortalidad que oscila entre el 30 al 70%[7-8]. La mayoría de los estudios se han centrado en la patogénesis de los cambios en hígado y corazón [9] Se han desarrollado varias vacunas como el homogenizado de hígado inactivado, vacunas vivas o inactivadas en emulsión de aceite y nuevas vacunas de nueva generación de tecnología en células madres.

Se ha reportado que varios adenovirus desencadenan una fuerte apoptosis y una respuesta pro inflamatoria y antinflamatoria en las células que conforman los órganos de respuesta inmune [10].La Apoptosis es un fenómeno fisiológico y patológico, cuando este fenómeno biológico se expresa de forma excesiva provoca una disfunción fuerte en los órganos que la están padeciendo, La infección por virus altamente patógenos como el Adenovirus Aviar serotipo 4 (FAdV-4), este virus utiliza la apoptosis para escapar de la actividad antiviral en el huésped y mantener su replicación al disminuir la activación del MCI-I (Complejo Mayor de Histocompatibilidad Tipo 1) [8-11]. Las Infecciones virales por FadV-4 son reconocidas inicialmente por los receptores RING-I o Toll like Receptors [12], la señalización por la activación de estos receptores provoca la liberación de varias citosinas inflamatorias en mayor cantidad IL-8 y TNF-α, que activan la inmunidad celular (Th1) e IL-6 citosina pro inflamatoria que activa la respuesta inmune celular (Th2) en menor grado [13] Lo cual desencadena una fuerte respuesta inflamatoria que recluta una gran cantidad de células como Monocitos, Macrófagos (MF) Linfocitos que causa una gran daño en las células de los principales órganos linfoides como Bolsa de Fabricio, Timo y Bazo [14].

La siguiente Revisión Sistemática y Meta-análisis se llevo a cabo con los objetivos de proporcionar información detallada de :1, Evaluación del el tropismo del FadV-4 sobre las células del sistema inmune y la capacidad de producir daño orgánico que genere apoptosis y una fuerte respuesta inflamatoria, 2. Evaluar la capacidad de respuesta inmune celular (Th1) Vs La respuesta inmune humoral (Th2) 3, Reportar sobre la alta posibilidad de generar una potente inmunosupresión que lleve a presentar casos de confecciones con la enfermedad infecciosa de la bolsa y Salmonella spp.

2.0-Clasificación y características biológicas del virus FAdV-4

Los adenovirus aviares (FAdV) pertenecen al género Aviadenovirus, que junto con otros cuatro géneros (Mastadenovirus, Atadenovirus, Siadenovirus e Ichtadenovirus) son miembros de la familia Adenoviridae. Los adenovirus aviares se han clasificado en cinco especies (A a E) y se han subdividido en doce serotipos (FAdV 1 a 8a y 8b a 11) y FadV-4 causante del Síndrome de Hepatitis Hidroericardio(SHH) (Especie FadV-C)[15,16] , se han reportado aumentos drásticos en china desde 2015 que afectan pollos entre la 3 y 5 semana de edad, La infección con estos aislados hipervirulentos de FAdV-4 resultó en una mortalidad del 80% al 100% [17] .El virus no tiene envoltura y su genoma es ADN de doble cadena aproximadamente con unpeso de 45kb [18].

Caracterizacon Molecular del FadV-A

_{^{Figura 1. Caracterización Molecular del FadV-4. 1A estructura del FadV-4 compuesta por 10 proteínas (Adaptado de Areayi et al.,2021[19]).1B Micrografías electrónicas con tinción negativa de partículas virales presentes en sobrenadantes de cultivo de virus purificado en placa, aislado de una muestra de hígado patológico. La simetría icosaédrica y las estructuras capsoméricas resueltas indican la presencia de adenovirus. (Adaptado de Arshud Dar et al.,2012[20]).}}

2.1-Proteina Hexon

El hexón un monómero del FadV-4, es la proteína estructural más abundante, con 937 residuos de aminoácidos y un peso molecular de aproximadamente 107 kDa. Se encuentra en una abundancia de 40 a 820 copias por virión y desempeña un papel vital no solo en la organización del genoma, sino también en la actividad neutralizante del virus y la especificidad del serotipo [21] . Cada molécula de proteína hexón consta de dos regiones de pedestal conservadas, P1 y P2, involucradas en la formación del trímero de hexón, y cuatro bucles (L1, L2, L3 y L4). Los bucles L1, L2 y L4 se ubican en el lado externo de cada monómero de hexón; estos bucles son responsables de la unión de anticuerpos, mientras que L3 se sitúa internamente y estabiliza la interfaz entre P1 y P2. Los bucles que contienen varias regiones hipervariables (HVR), en las que cuatro HVR (HVR1-HVR4) se encuentran en el bucle L1, dos en el bucle L2 y una en el bucle L4, contienen determinantes antigénicos e inmunogénicos y, por lo tanto, se utilizan para diferenciar 12 serotipos de FadV [22] Dado que los aislados altamente virulentos de FAdV-4 contienen varias mutaciones en el gen hexón, se generaron clones infecciosos de FAdV-4 clonando el genoma completo de CH/HNJZ/2015, un aislado altamente patógeno de FAdV-4, y ON1, una cepa no patógena, en el vector p15A-cm. Se construyó un virus recombinante que contenía hexón, y la patogénesis del virus rescatado se comparó con los virus parentales, rON1 y rHNJZ en pollos SPF de 3 semanas de edad. Los pollos infectados con virus rescatados que albergaban el gen hexón de HNJZ desarrollaron signos clínicos similares a los de la infección natural, lo que indica que la proteína hexón está relacionada con la patogénesis de FAdV-4[23] Estos hallazgos sugirieron que la proteína hexón regula la virulencia de la cepa de FAdV-4.Además, se determinó que en la posición 188 del hexón, el aminoácido arginina (R) es importante para determinar la patogenicidad de este virus. La sustitución de R por isoleucina (I) se realizó para crear la cepa mutante R188I, y la cepa rR188I y la cepa de tipo salvaje se replican bien in vitro ; sin embargo, la cepa rR188I no es patógena según la neutralización del suero in vivo y proporciona protección contra HHS, lo que sugiere que el aminoácido R en la posición 181 es crítico para la patogénesis [23] .

2.2-Proteina fibra

Entre las tres proteínas de la cápside de FAdV-4, las proteínas de fibra sobresalen de una base de pentón de la partícula viral y juegan un papel importante en la infección viral y la patogenicidad. Los patrones de fibra de los doce serotipos de FAdV mostraron un grado extremo de diversidad. A diferencia de la mayoría de los serotipos de FAdV, los serotipos 1, 4 y 10 tienen dos proteínas de fibra distintas (fibras 1 y 2) en su superficie [24] Cabe destacar que la Fibra-1 de un nuevo FAdV-4 hipervirulento tiene 431 aminoácidos, mientras que la Fibra-2 tiene 479 aminoácidos, lo que sugiere que la Fibra-1 podría ser la fibra corta del FAdV-4. Se ha demostrado que la Fibra-1 desencadena directamente la infección por FAdV-4 al unir sus dominios de pomo y tallo al dominio 2 (el receptor de coxsackie y adenovirus; CAR) de la célula huésped [25] .

2.3-Proteina penton

El pentón es una proteína estructural principal, es responsable de la internalización de los virus durante el ciclo de infección. El pentón está compuesto por dos unidades: una base y una proyección (fibra) [26]

2.4-Proteinas estructurales PX

La proteína estructural PX del FAdV-4 contiene aproximadamente 179 residuos de aminoácidos y tiene un peso molecular de 20 kDa; esta proteína también forma un complejo con el ADN genómico del FAdV-4. Se ha informado que las proteínas PX de varias cepas virulentas de FAdV-4, como HNJZ, SDDZ, SXCZ, AHBZ, JSXZ y HuBWH en China, difieren de la cepa no patógena FAdV-4 ON1 en solo dos aminoácidos, en las posiciones 11 y 129. Las cepas virulentas tenían sustituciones de alanina [25]. Las cepas virulentas tenían sustituciones de alanina (A) en lugar de treonina (T) en ambas posiciones (A11T, A129T), en comparación con la cepa no patógena FAdV-4 ON1. Por lo tanto, se ha descubierto que los aminoácidos en las posiciones 11 y 129 (A11 y A129) son importantes por que causan una fuerte apoptosis en las células foliares que conforman la bolsa de Fabricio que son inducida inducida por las PX [27].

2.5-Proteinas no estructurales (Nsp-V) (ORF). (ORF1B Inhibe Producción IRF7 en Aves).

Las proteínas no estructurales (Nsp) del FAdV-4 desempeñan funciones vitales en su patogenicidad, replicación del genoma y ensamblaje viral. La proteína 100k tiene un peso molecular de 95 kDa y contiene aproximadamente 798 residuos de aminoácidos. Esta proteína está codificada por el gen L4 durante la última etapa de la infección y participa en la trimerización del hexón, lo que permite la generación eficiente de virus progenie [28] Los ORF, ORF20A y ORF28, están ubicados en la región terminal 3', y ORF1B esta ubicado en la región terminal 5', son exclusivos de FAdV-4 y están ausentes en Aviadenovirus e incluso en Mastadenovirus, Los ORF1B solo se detectó en las células infectadas y no en los viriones maduros. Además, los niveles de expresión de ORF1B disminuyeron gradualmente durante la infección por FAdV-4, lo que sugiere que esta proteína es un transcrito génico temprano [29] Varios estudios han indicado que la infección viral induce modificaciones en los transcriptomas de las células diana, incluyendo ARN codificantes y no codificantes (ARNnc). Los microARN (miARN) son pequeños ARNnc de aproximadamente 20-24 nucleótidos de longitud. Los miARN degradan o reprimen la traducción de los ARNm diana [30]. Yuan et al., 2021 observó que gga-miR-30c-5p potenciaba la replicación del FAdV-4 en células LMH. La replicación del FAdV-4 se evaluó mediante la expresión de las proteínas Hexon y Px. La expresión de estas proteínas aumentó significativamente en las células LMH infectadas con FAdV-4 y transfectadas con gga-miR-30c-5p [31] experimentos recíprocos realizados por Yuan et al., 2021 mostraron que la apoptosis se inhibió al bloquear la actividad de gga-miR-30c-5p mediante el uso de inhibidores. Estos hallazgos sugieren que gga-miR-30c-5p actúa como proapoptótico en las células LMH y que su expresión disminuye durante la infección por FAdV-4, Lo anterior demuestra que el causante de la apoptois en los órganos inmunes especialmente en la bolsa es el (miARN) gga-miR-30c-5p [30].

3.0-El papel de la infección por FAdV-4 en las respuestas inmunitarias del huésped

La proteína E1A del Adenovirus bloquea la señalización mediada por IFN-a/b (Del Complejo Mayor de Histocompatibilidad tipo I- MCI-I) en un punto anterior a la activación de ISGF-3 bloqueando la fosforilacion de l IRF-7 en el citoplasma celular que a su vez bloquea la fosforilacion de la molécula ISRE en el núcleo disminuyendo la activación antiviral ejercida por el Factor Nuclear (NF-κB) en el núcleo de la célula [32] . (Ver Figura 2)

_{^{Figura 2.}}_{^{Esquema de la señalización de IFN por la vía Jak-Stat. Adaptado de Samuel. A (2001). Antiviral Actions of Interferons[32]}}

El proceso de señalización se inicia mediante la unión del ligando IFN a sus subunidades receptoras correspondientes. El IFN-α y el IFN-β se representan mediante el rombo, y el IFN-γ mediante la esfera. La unión del IFN conduce a la activación de pares superpuestos de factores de transcripción Jak y Stat mediante fosforilación de tirosina. Las quinasas Jak-1 y Tyk-2 se activan por el IFN-α/β(MCI-I), lo que conduce a la fosforilación y dimerización de las proteínas Stat-1 (p91) y Stat-2 (p113) y su posterior translocación, junto con IRF-7/9(p48), al núcleo. El complejo de estas tres proteínas, conocido como factor 3 de genes estimulados por IFN (ISGF-3), activa la transcripción de genes inducibles por IFN-α/β a través del ISRE. Las quinasas Jak-1 y Jak-2 se activan por el IFN-γ, lo que provoca la fosforilación y homodimerización de la proteína Stat-1 y su posterior translocación al núcleo. El complejo dimérico de Stat-1, conocido como GAF (factor de activación gamma), activa la transcripción de genes inducibles por IFN-γ(MCI-II)a través del elemento potenciador GAS.

Se cree ampliamente que ciertos componentes de la inmunidad innata son cruciales para combatir la infección por FadV-4 en aves. Uno de estos componentes inmunes innatos son las β-defensinas aviares (AvBD), que desempeñan un papel fundamental en las infecciones virales. Se ha informado que la mayoría de las AvBD (AvBD 5, 7, 8, 9 y 13) se regularon positivamente en tejidos específicos de aves infectadas con FAdV-4, y se observó una correlación positiva entre los niveles del genoma de FAdV-4 y la regulación positiva de las AvBD mencionadas, lo que sugiere el papel importante de las AvBD en la respuesta inmune a la infección por FAdV-4 [33] En consecuencia, varias vías relacionadas con la inmunidad, incluyendo la vía de señalización del receptor tipo Toll (TLR 7/21), la inflamación inducida por FAdV-4 mediada por MyD88 y la vía de interacción citosina-receptor de citosinas, se activan después de la infección por FAdV-4 [34] La sintasa de GMP-AMP cíclico (cGAMP) (cGAS) es un sensor de ADN que desencadena la inducción de respuestas inmunes innatas para producir IFN-I y citosinas pro inflamatorias, Poco después de unirse al ADN de doble cadena dentro del citosol, el cGAS convierte GMP-AMP cíclico (2', 3'-cGAMP) que sirven para activar el estimulador de genes de IFN (STING) [35] STING experimenta cambios conformacionales significativos cuando se une a 2',3'-cGAMP, recluta la quinasa de unión a TANK (TBK1), lo que lleva a la fosforilación del factor regulador de IFN 7 (IRF-7) y del factor nuclear κB (NF-κB), y finalmente expresa IFN-a/b y citosinas pro inflamatorias IL-1b [36] Finalmente, se demostró que chcGAS participaba en la detección de FAdV-4 en células LMH, y la inhibición de chcGAS promovió la infección por FAdV-4 en células LMH. Todo esto indica que chcGAS desempeña un papel antiviral durante la infección por FAdV-4 a través de la vía de señalización STING para inducir la expresión de IL-1β e IFN-β. [37] Recalco que la cGAS ha sido bien estudiada en mamíferos, sin embargo, en pollos la Cgas (chcGAS) no ha sido estudiada a fondo. La cGAS reconoce patógenos que contienen ADN mientras que las células que carecen de cGAS no responden eficientemente a los virus de ADN[37]. la infección por FAdV-4 ha resultado en un aumento de los niveles de expresión de IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-18, IFNγ y TNF-α en condiciones in vivo e in vitro ue generan una fuerte inflamación de los órganos [34]. (Ver Figura 3)

_{^{Figura 3:}}_{^{Diagrama esquemático de la respuesta inmune innata y la autofagia celular inducidas por FAdV-4 en el bazo. Adaptao de Zhu.C et al.,(2024)[38]}}

3.1 La proteína ORF1B del adenovirus aviar serotipo 4 suprime la producción de interferón tipo I al inhibir la translocación nuclear de IRF7.

La inmunidad innata, que actúa como primera línea de defensa, se inicia cuando los patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP) se unen a los receptores de reconocimiento de patrones (PRR) y activan la producción de interferón tipo I (IFN-I) y múltiples genes estimulados por IFN (ISG) para promover la eliminación viral (Figura 2). La sintasa de GMP-AMP cíclico (cGAS) se considera el principal sensor del ADN citosólico. Tras detectar el ADN viral, cGAS sintetiza el segundo mensajero cGAMP para activar el estimulador de genes de interferón (STING), que recluta la quinasa 1 de unión a TANK (TBK1) para fosforilar y activar el factor regulador de IFN 3 (IRF3) e IRF7, lo que finalmente resulta en la producción de IFN-I [39]. El FadV-4 causa el bloqueo de la respuesta de IFN-I de forma eficaz para evadirla respuesta antiviral(Figura 3). Dado que la vía de señalización cGAS/STING es inhibida por el FadV-4 lo que produce un bloqueo de la actividad antiviral por la ausencia en la señalización citoplasmática de esta proteína [40].

S.Gao.,et al(2026)[40] Demostró que la infección por FadV-4 desencadena la activación de IRF7 y su migración al núcleo, donde se une a la región promotora para promover la transcripción de IFN-βe inhibir la expresión viral; Los Resultados Demostraron que el ORF1B anula el tráfico de IRF7, Para lo cual se transfectaron células DF-1 con plásmidos de expresión de EGFP-ORF1B y DsRed-IRF7 por separado o juntos, y se analizó la localización de ORF1B e IRF7 mediante microscopía confocal[40] la expresión ectópica de ORF1B impidió la translocación nuclear de IRF7, lo que hizo que la fluorescencia roja se observara completamente en el citoplasma. Los datos mostraron que IRF7 solo podía detectarse en el citoplasma, pero no en el núcleo cuando se expresaba simultáneamente con ORF1B, lo que sugiere que ORF1B restringía el transporte de IRF7 al núcleo, lo que le permite al FadV-4 ser eliminado por el complejo mayor de Histocompatibilidad I (MCH-I) [40].

Potente efecto inmunosupresor del Adenovirus grupo C, serotipo-4 (FAdV-4)(Correlación entre la respuesta inmune Th1 Th2). Causante del Síndrome de Hepatitis Hidropericardio: Meta análisis - Image 4

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_{^{Figura 4. FAdV-4 ORF1B inhibe la actividad de IFN-β al dirigirse a IRF7. Adaptado de S. Gao., et al (2026) [40] (A)HA-IRF7 se cotransfectó con IFN-luc, pRL-TK y el plásmido de expresión de ORF1B, o un vector vacío en células DF-1. 24 horas después, los lisados celulares se analizaron mediante el ensayo DLR.(B) Las células DF-1 se cotransfectaron con el plásmido de expresión HA-IRF7 y ORF1B, o con un vector vacío. 24 h después, se midieron los niveles de ARNm de IFN-β (B) y los niveles de proteína. ANOVA para A, B. **, P < 0,01, y ****, P < 0,0001.}}

3.2 Apoptosis de la infección por FadV- 4 sobre los órganos inmunes Bazo, Timo y Bolsa de Fabricio

Niu. Y. et al., (2019)[10], Examinó la morfología de los órganos linfoides en pollos infectados experimentalmente con una cepa hipervirulenta de fadV-4, Los resultados indicaron que el virus provocó la depleción de linfocitos y un deterioro del crecimiento en el timo y la bolsa de Fabricio [10]. Posteriormente se investigaron más a fondo los mecanismos subyacentes al daño de los órganos linfoides mediado por Adenovirus mediante análisis TUNEL y de transcripción de genes apoptóticos. La apoptosis de los linfocitos en los órganos linfoides fue evidente a los 5 días posteriores a la infección[10]. Se obtuvieron pruebas de apoptosis a partir de los patrones de expresión de genes asociados a la apoptosis (Bax, Bcl2, P53 y Caspasa-3) [41]. Y se demostró que el ARNm de Caspasa-3 se reguló positivamente de forma significativa entre los 4 y 5 días posteriores a la inducción de la apoptosis en 3 órganos[10]. La caspasa-3 es una molécula efectora importante en la activación de la cascada de caspasas que, una vez activada, desencadena cambios apoptóticos característicos en las células, causando la muerte celular, se demostró en los perfiles de expresión de genes relacionados con la apoptosis a los 1, 3, 4 y 5 días posteriores a la infección con el adenovirus aviar serotipo 4 que la Caspasa 3 aumentaba significativamente en la Bolsa de Fabricio con un valor de 30.000 (Expresión relativa de mRNA) en bazo el valor fue de 25 y en timo fue de 10, lo que conduce a una lesión es muy fuerte en los centros germinativos que conducen a una fuerte LINFOPENIA al dia 4 post-infección originada por daño celular en dicho órgano [10] (Figura 5).

Expresión de genes Apoptoticos en Timo, Bazo Y Bolsa de Fabricio

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_{^{Figura 5. Perfiles de expresión de genes relacionados con la apoptosis en la bolsa de Fabricio, Timo y Bazo a los 1, 3, 4 y 5 días posteriores a la infección con el adenovirus aviar serotipo 4. Adaptado de Niu. Y. et al., (2019)[10] Niveles de ARNm de Caspasa 3. El eje y representa el cambio relativo en la expresión del gen diana en comparación con el control, y la línea superior (y = 1) en el eje x representa el control. Los datos se expresan como media ± desviación estándar (n = 5 pollos por grupo). Los asteriscos indican diferencias significativas (P < 0,05, mediante ANOVA de una vía).}}

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_{^{Imagen 1. A: Bolsas de Fbricio atrofiadas lotes con SHH (Valle del cauca), B: Bazos(Esplenomegalia) lotes con SHH (Valle del cauca) C, D: lotes con SHH Hidropericardio y Hepatitis Pollos de engorde (Santander) :Fotografías propiedad: Jairo Araque, John Jairo Salazar, Pablo Savedra (Servicio Tecnico Amerivet-Colombia).}}

4.0 Cargas Virales y Mortalidad de FadV-4 Virus de Alta Patogenicidad.

Liao.J. et al., 2025 [41] A partir de los análisis de red basados en los genomas completos, la ADN polimerasa y los genes del hexón, las cepas FAdV-4 con la deleción 1966 formaron un clado independiente distinto de las cepas FAdV-4 tradicionales; el HNU-XXY-2019 estaba claramente distante tanto del clado FAdV-4 1966-del como de las cepas FAdV-4 tradicionales. Los ácidos nucleicos del virus pudieron detectarse en los hisopos fecales desde el DPI 3(Días Post Infección), observándose una mayor excreción viral en ambos grupos infectados hasta el DPI 15, mientras que después del DPI 15, la excreción viral en ambos grupos infectados disminuyó hasta la última prueba en el DPI 21 (Figura 6). Curiosamente, en comparación con el grupo Subcutáneo, se observó una mayor excreción viral en el grupo oral antes del DPI 15, mientras que, en el grupo Subcutáneo, la excreción viral aumentó de forma relativamente lenta y gradual hasta el DPI 15.

_{^{Figura 6. Excreción viral de pollos SPF inoculados oral o subcutáneamente con FAdV-4 HNU-XXY-2019.Adapatado de Liao.J. et al., 2025 [41]}}

_{^{Figura 7. Supervivencia y Mortalidad (%) de pollos SPF inoculados oral o subcutáneamente con FAdV-4 HNU-XXY-2019.Adapatado de Liao.J. et al., 2025 [41]}}

5.0 Revisión Sistemática y Meta análisis Potente efecto inmunosupresor del virus Adenovirus gropo C FadV-4

5.1 Materiales y Métodos

5.1.1 Revisión de literatura

Se restringió la búsqueda a los trabajos de investigación publicados desde 2019-2026 sobre la pregunta: Efecto inmunosupresor del virus Adenovirus Grupo CFadV-4, se incluyeron todos los estudios publicados en idioma Ingles y español usando las bases de datos computarizadas (PUB MED, MED LINE, SCIENCE DIRECT), A los estudios publicados se les aplico el método de validación científica de QUALITY CONSORT : Numero de aves, Expresión de genes de mRNA(numérica) deINF-g (Para medir inmunidad celular), Expresión de genes de mRNA(numérica) de IL-8 (Para medir inflamación), Expresión de genes de mRNA(numérica) de IL-6 (Para medir la respuesta de la inmunidad humoral) en intervalos de tiempo de desafío de 1-10 días en órganos inmunes como bazo, Timo y Bolsa de Fabricio en pollos de engorde.

Variables que proveieron los estudios seleccionados para el Meta análisis: Potente efecto inmunosupresor del virus Adenovirus gropo C FadV-4

Variable	Indicador	Nivel
Interferón-g	INF-g	Continuo
Interleukina-8	IL-8	Continuo
Interleukina-6	IL-6	Continuo
Esquema de respuesta	Días Post infección (DPI)	Continuo
Tamaño de la Muestra	Numero de aves	Continuo
Año de publicación	Referencia y año de publicación	Si

5.1.2 Búsqueda de literatura

Para la búsqueda de literatura científica se usaron las siguientes combinaciones de palabras: [(Poultry OR Broiler OR Chiken OR Ducks) AND (Inmunosupresores efecto of Adenovirus FAdV-4 OR Inmune response to challenge of FadV-4 OR FAdV-4 Generated Severe Inflamatory Response OR Cytokine Gene Expression Pattern of FAdV-4) ]. Se reportaron 16 referencias bibliográficas, en la primera fase de selección se eliminaron 5 artículos por las siguientes razones: 3 no presentaron datos de citokinas, y 2 solo reportaron datos de mortalidad y supervivencia (Diagrama de flujo N 1)

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_{^{Diagrama de Flujo N 1. Diagrama de flujo que incluye el número de estudios incluidos en cada estado de la selección del proceso.}}

6.0 Análisis estadístico

6.1 Metodología estadística

Se realizo un análisis estadístico de el modelo de META ANALISIS DE EFECTOS ALEATORIOS con los 3 siguientes objetivos:

Comparar:

IFN-γ (Inmunidad celular) vs IL-6 (Inmunidad humoral)

IFN-γ (Inmunidad celular) vs IL-8 (Inflamación severa)

Comparación global entre IFN-γ, IL-6 e IL-8

Variables analizadas

Variable	Tipo	Unidad	Rol biológico
IFN-γ	Cuantitativa continua	mRNA (Log10)	Inmunidad celular (respuesta local en hígado)
IL-6	Cuantitativa continua	mRNA (Log10)	Inmunidad humoral (producción de anticuerpos)
IL-8	Cuantitativa continua	mRNA (Log10)	Inflamación severa (tormenta inflamatoria)
Días PI	Cuantitativa discreta	Días pos infección	Variable temporal (1, 2, 3, 5, 7 días)

6.1.2 Estadística descriptiva

Medidas calculadas para cada variable independientemente:

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7.0 Resultados

7.1 Cuadro 1. Estadística Descriptiva

Variable	Media(X)	Desviación Estantard(DE)	IC %(> 700)
IFN-γ	118.14	205.87	-1874-255
IL-8	195.97	476.63	-122-514.04
IL-6	13.55	13.19	883-18.27

IFN-γ (Inmunidad Celular) domina sobre IL-6 (Humoral)Estos datos confirman que el pollo de engorde responde al FAdV-4 principalmente con una respuesta celular local en hígado y otros órganos. La alta media (118.14) (P< 0.001) refleja una activación masiva de linfocitos Th1 y Macrófagos, Frente a al bajo estimulo de Producción de IgG de la IL-6 con una media de (13.55) que produce una baja carga de anticuerpos.

IL-8 (Inflamación) es tan alta como IFN-γ:IL-8 arrojo una media de (195.97) (P< 0.001)y alcanzo picos extremos (ej: 2200 en bazo, 600 en timo, 700 en riñón).Esto indica que el virus induce una fuerte tormenta inflamatoria, especialmente en bazo, corazón y riñón, lo que explica la por que se presenta una hidropericardio y además una fuerte inflamación en hígado y riñones. ambos procesos están acoplados: la inmunidad celular desencadena una inflamación severa mediada por IL-8. Esto sugiere que el daño tisular en Hepatitis por Cuerpos de Inclusión es dependiente de IFN-γ e IL-8.

IL-6 tiene valores más bajos y menos variables La inmunidad humoral es secundaria en esta infección, lo que explica por qué los pollos no desarrollan anticuerpos protectores eficaces rápidamente (P< 0.07)

Cuadro 2. Concentración de Citoquinas Vs los Días Post Infección

Días PI	IFN-γ (media)	IL-6 (media)	IL-8 (media)
1	82.54	9.60	21.50
2	1.25	0.18	—
3	218.98	17.40	503.70
4	—	2.50	—
5	2.90	9.70	61.70
7	7.00	3.30	0.75

Al día3 Post Infección se observa una concentración máxima de IFN-γ (218.98) e IL-8 (503.7) lo que indica que la inmunidad de tipo celular se expresa máximo en este dia, acompañada de una fuerte respuesta inflamatoria. La IL-6 tiene su pico también el día 3 (17.4), pero mucho menor. Entre los Días 5-7, Todas las citoquinas descienden drásticamente (excepto IL-8 que sube levemente el día 5), lo que indica la persistencia de la respuesta infamatoria.

_{^{Figura 8. Concentración de Citoquinas (INF- γ, IL-8, IL-6) Vs Días Post Infección}}

7.2 Evaluaciones Paramétricas

Cuadro 3. Prueba de normalidad: Shapiro-Wilk

Variable	W	p-valor	Conclusión
IFN-γ	0.52	< 0.001	No normal
IL-6	0.91	0.07	Normal (marginal)
IL-8	0.58	< 0.001	No normal

7.3 comparaciones entre Dos Variables de Respuesta Inmune

Cuadro 4. Prueba de Mann-Whitney U (Wilcoxon rank-sum)

Comparación	U	p-valor	Diferencia
IFN-γ vs IL-6	134.5	0.004	Significativa
IFN-γ vs IL-8	139.0	0.39	No significativa

La inmunidad celular (IFN-γ)(134.5 P< 0.004) es significativamente más alta que la inmunidad humoral (IL-6), Aunque IL-8 tiene una media más alta (195.97 vs 118.14),y la prueba Wilcoxon (139.0 P=0.39), no hay diferencia estadística entre ambos, probablemente por la alta variabilidad. Esto sugiere que ambos procesos (Inmunidad Celular e Proiflamacion Severa ) ocurren simultáneamente con intensidad similar.

7.4 Cuadro 5. Comparación entre las Tres variables (IFN-γ vs IL-8 vs IL-6) (Kruskal-Wallis)

Estadístico H	p-valor	¿Diferencia global?
11.78	0.0028	SÍ

Cuadro 6. Comparación entre las Tres variables (IFN-γ vs IL-8 vs IL-6) Comparaciones post-hoc (Dunn).

Par Comparado	Diferencia de Rangos	P-valor ajustado	Significativo?
IFN-γ vs IL-6	20.4	0.002	SÍ
IL-6 vs IL-8	-24.7	0.003	SÍ
IFN-γ vs IL-8	-4.3	0.57	NO

Análisis de resultados de la aplicación de la Bioestadística al comportamiento del virus enfrente a los tres tipos de moléculas imunes analizadas, desde el comportamiento de cada una hasta el comportamiento de las tres variables que identifican los 2 sistemas de respuesta inmune en las aves(Inmunidad humoral(IFN-γ vs IL-6) vs Inmunidad celular), teniendo en cuenta que la inflamación es un proceso dependiente de la inmunidad celular (IFN-γ).

Cuadro 7. Resultados de la respuesta inmune Th1 (IFN-γ- IL-8) vs Th2(IL-6) en el pollo

Comparación	Resultado	Interpretación Inmunidad en Pollo
IFN-γ > IL-6	SÍ	La respuesta Inmunidad celular predomina sobre la Inmunidad humoral
IFN-γ = IL-8	NO difiere	Inflamación severa es paralela a la inmunidad celular
IL-8 > IL-6	SÍ	La inflamación es mucho más intensa que la respuesta Inmune humoral

Cuadro 8. Correlación de Spearman (ρ):

Comparación	ρ (rho)	p-valor	Interpretación
IFN-γ vs IL-8 (todos los datos)	0.89	0.04	Correlación positiva muy fuerte

Existe una relación directa y significativa entre la activación de la inmunidad celular (IFN-γ) y la inflamación severa (IL-8). Esto sugiere que IFN-γ induce la liberación de la IL-8 en tejidos como bazo, riñón y corazón.

8.0 Meta análisis de efectos aleatorios (FOREST PLOT)

IFN-γ (Inmunidad celular)

Estudio/Autor n Media [INTERVALO DE CONFIANZA A 95%] (P< 0.05)

──────────────────────────────────────────────────────────────

KATRINA KAU 2025 2 1.25 [-11.1, 13.6] 15% ──●──

MEIZHEN LI 2021 1 22.70 [ 22.7, 22.7] 10% ●

A HUI XU 2023 4 2.45 [ 0.8, 4.1] 8% ──●──

KAI WANG 2019 (riñón) 2 130.00 [ 40.2, 219.8] 12% ●──

KAI WANG 2019 (bolsa) 2 420.00 [ 76.6, 763.4] 8% ●──

CHUNHUA ZHU 2024 1 160.00 [160.0, 160.0] 10% ●

──────────────────────────────────────────────────────────────

EFECTO GLOBAL (RE) 118.14 [-18.7,255.0] 73% ◇─────◇

IL-6 (Inmunidad humoral).

Estudio/Autor n Media [INTERVALO DE CONFIANZA A 95%]

─────────────────────────────────────────────────────────────

YUJUAN NIU 2019 10 10.53 [ 5.1, 15.9] 22% ──●──

KATRINA KAU 2025 2 0.18 [ -0.1, 0.5] 8% ●

A HUI XU 2023 4 3.05 [ 1.2, 4.9] 15% ──●──

YUJUAN NIU 2019 (corazón). 3 12.67 [ 0.3, 25.0] 10% ●──

QINQIN SUN 2025 (hígado) 4 24.25 [ 7.9, 40.6] 12% ●──

XIAOAO FENG 2025 3 11.33 [ 4.1, 1 8.6] 10% ●──

CHUNHUA ZHU 2024 1 24.00 [24.0, 24.0] 5% ●

─────────────────────────────────────────────────────────────

EFECTO GLOBAL (RE) 13.55 [ 8.8, 18.3] 82% ◇──◇

IL-8 (Inflamación severa)

Estudio/Autor n Media [INTERVALO DE CONFIANZA A 95%]

──────────────────────────────────────────────────────────────

YUJUAN NIU 2019 12 380.25 [ 85.4, 675.1] 15% ●──

YUJUAN NIU 2019 (corazón) 3 18.50 [ 0.0, 37.0] 8% ●

QINQIN SUN 2025 (hígado) 4 6.25 [ 0.0, 13.2] 10% ●

QINQIN SUN 2025 (corazón) 4 13.38 [ 0.0, 2 8.9] 8% ●

XIAOAO FENG 2025 3 39.00 [ 0.0, 83.1] 8% ●─

──────────────────────────────────────────────────────────────

EFECTO GLOBAL (RE) 195.97 [-122.1,514.0] 49% ◇─────────

Heterogeneidad extremadamente alta (I² > 95%) en IFN-γ e IL-8. Los intervalos de confianza son muy amplios

Cuadro 9. Resultado Ejecutivode Metanalisis: Potente efecto inmunosupresor de FAdV-4 (Bioestadística)

Metanalisis (FAdV-4)	Hallazgo
Respuesta dominante	IFN-γ e IL-8 (no diferencia entre ellos)
Respuesta más baja	IL-6 (Inmunidad humoral)
Pico máximo infección	Día 3 pos infección para todas
Órgano más afectado	Bazo (IL-8=2200), riñón (IFN-γ=700)
Correlación clave	IFN-γ ↔ IL-8 (ρ=0.89, p=0.04)
Heterogeneidad	Extremadamente alta (justifica efectos aleatorios)

9.0 Discusión

El FAdV-4 (Adenovirus Grupo C serotipo 4) es el agente etiológico causante del Síndrome de Hepatitis Hidropericardio(SHH) [43]. En la ultima década varios trabajos de investigación han demostrado que las cepas de alta virulencia de FAdV-4 causan una fuerte inmunosupresión y alta mortalidad en pollos SPF, que oscila entre el 30-70% [44] , además se ha demostrado una fuerte inmunosupresión entre la coinfección con diferentes virus en casos de SHH como el virus de la anemia infecciosa aviar(CAV), el virus de la enfermedad de Marek [44,45] .

En Primer lugar: este Metanalisis analizo los cambios en los órganos linfoides (Timo, Bazo, Bolsa de Fabricio) que son centros germinativos de plasmocitos y linfocitos T, específicamente en la bolsa de Fabricio y el timo [46]. Se investigaron más a fondo los mecanismos subyacentes al daño de los órganos linfoides mediado por el FAdV-4 mediante análisis TUNEL y de transcripción de genes apoptóticos. Niu. Y. et al., (2019)[10] demostró que la apoptosis en los órganos linfoides fue evidente a los 4 días posteriores a la infección con FAdV-4, se evidenciaron cambios estructurales en los genes que activaron la apoptosis en la bolsa de Fabricio desencadenado la activación de dichos genes (Bax, Bcl2, P53 y Caspasa-3), la activación de la Caspas -3 genero una apoptosis en bolsa de Fabricio de 30.000 genes apoptoticos (Expresión relativa de mRNA/log 10) comparados con los genes apoptoticos del timo que aroojaron un valor de 10 [10] En la mayoría de los procesos inductores de apoptosis, los niveles transcripciones de caspasas-3 aumentan significativamente. La caspasa-3 es una molécula efectora importante en la activación de la cascada de caspasas que, una vez activada, desencadena cambios apoptóticos característicos en las células [47] Estos datos sugieren que el FAdV-4 induce la apoptosis de los linfocitos , lo que conduce a un daño y atrofia de los órganos linfoides especialmente la bolsa de Fabricio en el 4 dia post infección. Niu. Y. et al., (2019)[10] demostró además que los pollos infectados con FAdV-4 experimentaron una mayor inhibición de las respuestas de anticuerpos a las vacunas inactivadas contra la enfermedad de Newcastle y el virus de la influenza aviar H9, en comparación con los pollos del grupo de vacunación, lo anterior se puede ser causado por deficiencias en la respuesta de la inmunidad humoral generada por una apoptosis aguada de la bolsa de Fabricio que produce pocos plasmocitos (Figura 9)

_{^{Figura 9.Respuesta de la infección por Adenovirus Aviar Serotipo 4 (FAdV-4)En aves vacunadas contra Newcastle(NDV) e Influenza Aviar (AIV-H9) Por la Prueba de Inhibición de la Hemaglutinación.Adaptado de :Niu. Y. et al., (2019)[10]. Los títulos de anticuerpos de NDV y AIV-H9 en el grupo desafiado con FAdV-4 más vacunación fueron significativamente más bajos comparados con el grupo de vacunación solamente a los 14 días PI. Los datos se expresan como media ± DE (n = 10 pollos por grupo). Los asteriscos indican diferencias significativas en comparación con los controles (P < 0,05, por ANOVA de una vía).}}

En segundo lugar: El mecanismo de acción por el cual el FAdV-4 evade la respuesta del sistema inmune, al bloquear la actividad del MCI-I por la proteína no estructural Nsp-V ORF1B del FAdV-4 la cual suprime la producción de interferón tipo I al inhibir la translocación de IRF7 al núcleo para activar el factor (NF-κB) es posiblemente la razón de que este serotipo sea el causante de una fuerte Inmunosupresión; especialmente en órganos como la bolsa de Fabricio [11]. Gao.S., et al (2025) [11] observo que el ADN genómico de FAdV-4, pero no el virión infeccioso, indujo fuertemente la producción de IFN-β, lo que sugiere que algunas proteínas virales bloquearon la respuesta inmune innata antiviral, por lo anterior lo lógico era determinar que proteína del ADN genómico era la que bloqueaba la respuesta inmune , por lo tanto Gao.S., et al (2025) [11] identificó la proteína ORF1B como un inhibidor eficaz de la inducción de IFN-β mediante un análisis de los ORF de FAdV-4, El ORF1B interactuó con IRF7 para dificultar su translocación nuclear, lo que en consecuencia, restringió la respuesta de IFN-β para eliminar el virus. Dado que todas las señales convergen en el activador de la transcripción IRF7 fue un modulador crucial para regular la producción de IFN-β en aves. Estructuralmente, IRF7 contiene un dominio de unión al ADN N-terminal (DBD, aa 1–143) y un dominio C-terminal (CTD, aa 144–491). Funcionalmente, el DBD fue fundamental para la unión a la región promotora de IFN-β, y el CTD fue esencial para la dimerización y fosforilación de IRF7[48-49]. Lo anterior fue fuertemente sustentado por Dong. S.J ., et al (2022) [50] que concluyo que La infección viral generalmente degradó IRF7 a través de la vía de la ubiquitina-proteasoma de forma que al degradarse el IRF7 a través de la vía del proteasoma se antagoniza la activación de IFN-β mediada por cGAS-STING.

En tercer lugar: Para determinar los mecanismos subyacentes a la respuesta inflamatoria que estimulan la respuesta de la inmunidad celular (IFN-γ e IL-8) e Inmunidad humoral(IL-6) de los órganos inmunitarios tras la infección por FAdV-4, Para nuestros hallazgos se evaluó la expresión de los genes de ARNm/Log 10 de esas tres citoquinas. Por lo tanto, la medición de ARNm/Log 10 representa una buena alternativa para detectar los niveles transcripciones en ausencia de anticuerpos aviares disponibles. Estas citosinas se consideran las moléculas de señalización más importantes en la inducción y regulación de la respuesta inflamatoria como lo demostró Sánchez. et al., (2011)[51] al evaluar una vacuna vectorizada en pollos de engorde. Se evaluaron 40 datos de 11 trabajos seleccionados , el análisis de cada variable reportos lo siguientes resultados de la comparación entre la medias de las tres citoquinas IFN-γ (118.14) (P< 0.001), IL-8 (195.97) (P< 0.001), IL-6 (13.55) (P< 0.07).

_{^{Figura 10. Expresión de las medias geométricas de 40 muestras de la 3 citosinas, IFN-γ (118.14) (P< 0.001), IL-8 (195.97) (P< 0.001), IL-6 (13.55) (P< 0.07). medición de ARNm/Log 10 *** diferencia altamente significativa, * diferencia significativa .Intervalo de confianza al 95%.}}

Tomando como base el trabajo de investigación de Liao.J. et al., 2025 [41] que reporta la mayor carga de expresión viral entre el 3-6 dia luego de una infección oral en todos los órganos, nuestro datos reportan que al día3 Post Infección se observa una concentración máxima de IFN-γ (218.98) e IL-8 (503.7) (Cuadro 2) lo que indica que la inmunidad de tipo celular se expresa máximo en este dia, acompañada de una fuerte respuesta inflamatoria que puede ser la causa de la alta mortalidad. La IL-6 tiene su pico también el día 3 (17.4), Es relevante proponer que si las aves son infectadas alrededor de los 10 días de nacidas y el pico máximo de infección e inflamación es por lo tanto al dia 13 la consecuencia va a ser una fuerte daño sobre la inmunidad humoral de la bolsa de Fabricio antes de la expresión máxima en este órgano que es alrededor del dia 21-28 de edad del pollo, lo que puede causar una confección letal con Enfermedad Infecciosa de la Bolsa (IBD), Salmonella spp, E Coli(de alta patogenicidad), que puede causar una mortalidad del 100% entre el dia 8-10 post infección [27].

Al realizar la comparación entre la dos variables que miden la inmunidad celular e inmunidad humoral el resultado que arroja la prueba fue IFN-γ vs IL-6 (134.5) (p< 0.004)(Diferencia altamente significativa),lo que indica que el virus lo que activa es una fuerte inmunidad de tipo celular. y al comparar el efecto de IFN-γ vs IL-8 (139.0) (P< 0.39)Sin diferencia significativa; indicando que IFN-γ y IL-8 están conectadas con el estimulo de la respuesta inmune de tipo celular; desencadenado una fuerte tormenta inflamatoria que lleva al colapso a la mayoría de los órganos afectados, lo anterior fue corroborado al aplicar la prueba de Correlación de Spearman (ρ) (IFN-γ vs IL-8 (todos los datos)) (Correlación 0.89) (P< 0.04) esto sugiere que el estimu de el IFN-γ desencadena una fuerte inflamación por IL-8.

El Metanalisis reporto Heterogeneidad extremadamente alta (I² > 95%) en IFN-γ e IL-8 Los intervalos de confianza son muy amplios. IFN-γ (Inmunidad celular) 118.14 [-18.7,255.0] (73%), IL-6 (Inmunidad humoral) 13.55 [ 8.8, 18.3] (82%), lo que posiblemente puede tener una explicación en que los serotipos pueden variar en patogenicidad.

10. Conclusiones

Los datos de nuestro revisión sistemática y matanalisis de la potencia inmunosupresora del FAdV-4 sobre la en la función de los órganos inmunitarios de una estructura de un dataset de n (IFN-γ) = 12 mediciones, n (IL-6) = 17 mediciones, n (IL-8) = 11 mediciones , y 40 observaciones, arrojaron un resultado indicando que el virus desencadenó ua fuerte apoptosis en la bolsa de Fabricio y una respuesta inflamatoria grave, al evaluar la expresión de las citosinas IFN-γ vs IL-8 vs IL-6 arrojando una correlación sinérgica clave de IFN-γ ↔ IL-8 (ρ=0.89, p=0.04) conduciendo a una fuerte respuesta inmune de tipo celular IFN-γ vs IL-6 (134.5) (p< 0.004) comparada con la inmunidad humoral(MCI-I)resultando la mas afectada demostrando la capacidad del virus para evadir la respuesta inmune y donde el órgano mas alterado es el bazo lo que genera a nivel patológico una fuerte esplenomegalia. Es necesario realizar una mayor exploración de las bases de respuesta moleculares de la apoptosis y las respuestas inflamatorias mediadas por FAdV-4, es esencial para aclarar los mecanismos patológicos generales de la enfermedad inducida por Adenovirus Grupo C, Serotipo 4 (FAdV-4).

Potente efecto inmunosupresor del Adenovirus grupo C, serotipo-4. Correlación entre la respuesta inmune Th1 Th2. Causante del Síndrome de Hepatitis Hidropericardio: Meta análisis

Efecto de un adsorbente de micotoxinas en la respuesta inmune de aves, Manuel Contreras

Salud intestinal y reducción de costos en monogástricos