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Secuencia del Genoma Completo de un Fowl Aviadenovirus serotipo 8b aislado en América del Sur

Publicado el: 21/11/2016
Autor/es: Ray William Izquierdo Lara (FARVET S.A.C y Universidad Nacional Mayor de San Marcos); Katherine Calderón; Ana Luz Chumbe Mendoza; Ricardo Montesinos; Ángela Montalván (FARVET S.A.C); Armando E. González,; Eliana Icochea, (Laboratorio de Patología Aviar, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Facultad de Medicina Veterinaria); Manolo Fernandez Diaz, (FARVET S.A.C). Perú.

Introducción

Los Fowl aviadenovirus (FAdVs) están distribuidos en todo el mundo y son los agentes causales de la hepatitis por cuerpos de inclusión (HCI) en pollos (1). La HCI se caracteriza por causar necrosis hepática con cuerpos de inclusión intranucleares de eosinófilos o de basófilos en hepatocitos y tasas de mortalidad de alrededor de 10% (2). En base a su estructura genómica los FAdVs han sido agrupados en 5 especies (FAdV-A a FAdV-E) y luego subdivididos en 12 serotipos (FAdV-1 a 8a y -8b a 11), basados en pruebas de neutralización cruzada (1). Todos los serotipos han sido asociados con brotes de HCI. A pesar de la presencia de brotes de HCI en América del Sur (3-5), la información sobre las cepas que circulan en este continente es aún limitada.


Metodología:


En enero de 2016, se observó un brote HCI en pollos de engorde en una granja ubicada en Arequipa, Perú. El brote se caracterizó por causar una disminución en la ganancia de peso, tasas de mortalidad entre 5 y 10% en pollos jóvenes (2-4 semanas) y la presencia de hígados necróticos en las aves afectadas. El virus (FV211-16) fue aislado en células LMH a partir de los hígados colectados. El DNA viral fue secuenciado en el secuenciador Genome Sequencer FLX (Roche, Mannheim, Alemania). Se utilizó el programa De Novo Assembler 2.6 para el ensamblaje de novo. El alineamiento de las secuencias y el análisis filogenético se realizaron en los programas PRANK y Mega 6.0, respectivamente. Una inoculación intramuscular de la cepa FV211-16 en pollos libres de patógenos específicos (SPF) de 21 días de edad, seguida durante 3 semanas, se llevó a cabo bajo la aprobación del Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM), Lima, Perú.


Resultados
:

La secuencia completa del genoma de FV211-16 es de 43,976 nucleótidos (nt) de longitud, con un contenido de G + C de 57,9%. El virus codifica 46 marcos de lectura abiertos (ORFs) y tiene una organización genética similar a la de otros FAdV-E (serotipos 6, 7, 8a y 8b). Ambas secuencias repetidas terminales invertidas (ITR) son de 71 nt de longitud y son perfectamente complementarias entre sí. Las comparaciones con los otros seis genomas de FAdV-E disponibles en el GenBank (julio, 2016) mostraron identidades desde 84,9 hasta 97,1% (Tabla 1). Los análisis filogenéticos basados en los genomas completos mostraron que FV211-16 se agrupa junto con cepas del serotipo 8b (números de accesión: KU517714, GU734104 y KT862811) (Figura 1), con identidades entre 95,4 y 97,1%, estando estrechamente relacionado con la cepa de Malasia UPM04217 (6). Alineamientos de amino-ácidos revelaron que la proteína Pentón está altamente conservada a través de todos los FAdV-E, con identidades entre 97,8 y 100%. Comparaciones con otros FAdV-E, mostraron que las proteínas Fibra y Hexón de FV211-16 tienen 9 y 2 mutaciones únicas, respectivamente. Las mutaciones en el Hexón se encuentran principalmente en las regiones del loop-1 y del loop-2, mientras que las mutaciones en la proteína de Fibra se encuentran en las posiciones 198 (tallo) y 396 (cabeza). Bajo condiciones experimentales, FV211-16 (1.3x108 unidades formadoras de placa / ave) mostró 0% de mortalidad (0/20) y signos clínicos mínimos (Figura 2). Del mismo modo, la necropsia reveló lesiones macroscópicas leves típicas de HCI en el hígado y en el tracto intestinal.


Conclusión

Este es el primer reporte de una secuencia completa del genoma de un FAdV que circula en América del Sur. Por otro lado, la presencia de FAdV-8b sugiere que otras cepas pueden estar circulando en nuestro país. La vigilancia epidemiológica debe ser incrementada para ayudar en la prevención de HCI. Número de accesión de la secuencia de nucleótidos. La secuencia completa del genoma de FV211-16 ha sido depositada en el GenBank bajo el Nº de accesión KX258422.

Figura 1. Análisis filogenético basado en el genoma completo de los aviadenovirus. El árbol fue construido con el método de Maximum Likelihood, utilizando un bootstrap de 1000 réplicas. La cepa FV211-16 está señalada en rojo. FAdV = Fowl Aviadenovirus; TAdV = Aviadenovirus de pavo; DAdV = Aviadenovirus de pato; GoAdV = Aviadenovirus de ganso; PiAdV = Aviadenovirus de paloma.

Tabla 1. Distancias genéticas entre la cepa FV211-16 y otras cepas del FAdV-E en base a la secuencia completa del genoma.

 

Figura 2. Lesiones macroscópicas en órganos de pollos no infectados (control) y de pollos infectados con la cepa FV211-16 (imágenes de la derecha). Los pollos fueron inoculados de manera intramuscular con 0.5 ml de PBS (control) o de FV211-16 (pollos 1 y 2). Las necropsias fueron realizadas a los 6 días post inoculación. Se puede observar necrosis y palidez en los hígados de los pollos 1 y 2, mientras que en el pollo control se observa un hígado sano de color oscuro. En ninguno de los casos se observò síndrome de hidropericardio en el corazón.


REFERENCIAS

1. Hess M. Detection and differentiation of avian adenoviruses: a review. Avian Pathol J WVPA. 2000 Jun;29(3):195–206.

2. Mase M, Nakamura K, Minami F. Fowl adenoviruses isolated from chickens with inclusion body hepatitis in Japan, 2009-2010. J Vet Med Sci Jpn Soc Vet Sci. 2012 Aug;74(8):1087–9.

3. Marek A, Günes A, Schulz E, Hess M. Classification of fowl adenoviruses by use of phylogenetic analysis and high-resolution melting-curve analysis of the hexon L1 gene region. J Virol Methods. 2010 Dec;170(1–2):147–54.

4. Mazaheri A, Prusas C, Voß M, Hess M. Some strains of serotype 4 fowl adenoviruses cause inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in chickens. Avian Pathol. 1998 Jun 1;27(3):269–76.

5. Mettifogo E, Nuñez LFN, Parra S, H S, Astolfi-Ferreira CS, Ferreira AJP. Fowl adenovirus Group I as a causal agent of inclusion body hepatitis/ hydropericardium syndrome (IBH/HPS) outbreak in brazilian broiler flocks. Pesqui Veterinária Bras. 2014 Aug;34(8):733–7.

6. Alemnesh W, Hair-Bejo M, Aini I, Omar AR. Pathogenicity of fowl adenovirus in specific pathogen free chicken embryos. J Comp Pathol. 2012 Apr;146(2–3):223–9.

• AVISO

Este documento es una traducción no oficial hecha por FARVET S.A.C. con el objetivo de facilitar la información a personas de habla hispana. La traducción está basada en el documento original “Complete Genome Sequence of Fowl Aviadenovirus
Serotype 8b Isolated in South America” de la revista Genome Announcements 4(5). pii: e01174-16. doi: 10.1128/ genomeA.01174-16. El artículo original se encuentra en el siguiente link: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27795284

 
Autor/es
Medico veterinario y Magíster en Salud Animal en la Facultad de medicina veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Actualmente es profesora principal - Jefa del Laboratorio de Patología Aviar y responsable del programa de Segunda Especialidad de Avicultura. Se dedica a la formación de estudiantes de Pre y Post grado, así como al diagnostico e investigación en el área de la Patología Aviar. Es también responsable técnico del Laboratorio de Patología y Diagnostico de la empresa Certificaciones del Perú.
 
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