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Evaluación de la Seroreactividad de la forma recombinante de la proteína transportador dependiente de TonB de Avibacterium paragallinarum

Publicado el: 1/11/2019
Autor/es:

INTRODUCCIÓN

El transportador dependiente de TonB (TDTB), es una proteína de la membrana externa que tiene alta afinidad por el hierro, que es importante para Avibacterium paragallinarum (Av. paragallinarum). El hierro es el principal sustrato de la proteína TDTB, y ello participa en muchos procesos metabólicos de la bacteria (1).

Vesículas de membranas extracelulares de Av. paragallinarum contienen proteínas inmunogénicas (2), entre estas proteínas encontramos factores de virulencia (3) y la proteína TDTB que ayuda al consumo de hierro (2), lo que indica que estas estructuras pueden ser blancos efectivos para el desarrollo de vacunas para la formación de anticuerpos que puedan prevenir la formación de estas estructuras.

En el presente estudio reportamos los resultados de los ensayos de la seroreactividad de la forma recombinante de la proteína TDTB de Av. paragallinarum en pollos libres de patógenos específicos (SPF) infectados experimentalmente con la cepa FARPER-107 de Av. paragallinarum, serovariedad B-1.

OBJETIVO

Evaluar la seroreactividad de la forma recombinante de la proteína TDTB de Av. paragallinarum en pollos libres de patógenos específicos (SPF).

MATERIAL Y MÉTODO

Figura 1. Flujograma de trabajo para la producción de la proteína recombinante TDTB y evaluación de la seroreactividad en: pollos SPF. Pt7: Promotor de la ARN polimerasa del bacteriófago T7; 6x-his: péptido de hexahistidina; E. coli: Escherichia coli; LB: Medio de cultivo Luria Bertani; AMP: Ampicilina. 

RESULTADOS

1. Seroreactividad de la proteína recombinante TDTB

A los 6 días post-infección se detectó que el 63,6% (14/22) de sueros de pollos desafiados con Av. paragallinarum reaccionaron con la proteína recombinante TDTB mediante western blot incluyendo el anticuerpo monoclonal 1G7G8 (2). Se identificó una banda reactiva de aproximadamente 120 kDa, la cual no se observó frente al suero de pollo SPF no desafiado (Figura 02).

Figura 02. Western blot para evaluar la reactividad de la proteína recombinante TDTB frente a sueros de pollos SPF desafiados experimentalmente con la cepa FARPER-107 de Av. paragallinarum, serovariedad B-1 (Panel A), y frente a suero de pollo SPF no desafiado (Panel B). Carril M: patrón de peso molecular. Carril 1: pellet de la cepa BL21 de E. coli recombinante post-inducción con IPTG (isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido). La flecha roja indica la reactividad de la banda.

2. Detección de la proteína recombinante TDTB mediante el anticuerpo monoclonal 1G7G8

Figura 03. Western blot para evaluar la reactividad de la proteína recombinante TDTB frente al anticuerpo monoclonal 1G7G8 (2). Carril M: patrón de peso molecular. Carril 1: pellet de la cepa BL21 de E. coli recombinante post-inducción con IPTG. La flecha roja indica la reactividad de la banda.

CONCLUSIONES

Los resultados indican que la proteína TDTB obtenida de forma recombinante presentó seroreactividad ante los sueros de pollos desafiados experimentalmente con la cepa FARPER-107 de Av. paragallinarum, serovariedad B-1. Esto indica que la proteína TDTB podría ser considerada en investigaciones futuras de desarrollo de vacunas para Av.paragallinarum.

Referencias bibliográficas

 
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