INTRODUCCIÓN

En la especie porcina, la inseminación artificial utiliza principalmente semen refrigerado, conservado mediante diluyentes comerciales a temperaturas entre 15 y 18 °C, lo que permite mantener su capacidad fecundante durante un período aproximado de 2 a 3 días. A pesar de su amplia difusión, la inseminación artificial en porcinos presenta limitaciones relacionadas con el tiempo de conservación y la elevada sensibilidad de los espermatozoides al estrés térmico (Castro y col., 2025). La suplementación con antioxidantes, como el αtocoferol, ha demostrado proteger las membranas y mejorar la calidad espermática (Chanapiwat y col., 2020).

La criopreservación por congelamiento se utiliza como modelo experimental para evaluar el daño inducido por estrés térmico. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto del α-tocoferol sobre parámetros de calidad espermáticos y funcionales en semen porcino sometido a estrés térmico inducido por congelamiento.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se recolectaron dos eyaculados de tres verracos mediante la técnica de mano enguantada, bajo condiciones uniformes de manejo, sanidad y alimentación. Los eyaculados que presentaron valores de motilidad y viabilidad superiores al 70 % fueron seleccionados para su criopreservación, siendo congelados en pajuelas de 0,5 mL a una concentración final de 3-5 × 10⁸ espermatozoides/mL (Perez Colman y col, 2019). Cada eyaculado se fraccionó y se criopreservó sin (muestras Control) o con (muestras αT) el agregado de 200 µg/ml de α-Tocoferol al diluyente.

Las pajuelas se descongelaron a 37 °C por 20 segundos y se evaluaron: motilidad (microscopía óptica), integridad de membrana plasmática (eosina/nigrosina), integridad acrosomal (azul tripán + DIC). La capacitación espermática se indujo con bicarbonato (40 mM) y se evaluó por la coloración de clorotetraciclina (CTC, patrón B), así como por los niveles de reacción acrosomal verdadera (RAV) inducida por fluido folicular (30 % v/v).

Los niveles de proteínas fosforiladas en tirosina se analizaron por Western blot. Los datos se analizaron mediante modelo mixto lineal en R, considerando tratamiento como efecto fijo y verraco/eyaculado como efectos aleatorios. Los resultados se expresaron como media ± error estándar de la media. Se consideró un nivel de significación de p < 0,05.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

El tratamiento αT incrementó significativamente la motilidad e integridad acrosomal pos descongelamiento, mientras que no se observaron diferencias significativas para la integridad de la membrana plasmática (Tabla 1).

Tabla 1. Efecto del congelamiento con alfa tocoferol en parámetros espermáticos

MOT: motilidad, IMP: integridad de membrana plasmática, IA: integridad acrosomal, n=6, diferentes letras indican diferencias significativas (p < 0,05)
El α-tocoferol aumentó los niveles de capacitación espermática tras la inducción, evidenciados tanto por el patrón B de CTC como por la inducción de la reacción acrosomal verdadera (Tabla 2), sin modificar el patrón de fosforilación en tirosina asociado a este proceso.

Tabla 2. Efecto del congelamiento con alfa tocoferol en la capacitación espermática

CTC: patrón B CTC, RAV: reacción acrosomal verdadera, n=6, diferentes letras indican diferencias significativas (p < 0,05).

La criopreservación espermática provoca daño celular asociado al estrés oxidativo, evidenciado por alteraciones en la motilidad y la funcionalidad espermática (Chanapiwat y col., 2020). El agregado de α-tocoferol mejoró significativamente la motilidad e integridad acrosomal y favoreció la respuesta a la inducción de la capacitación, sin modificar el patrón global de fosforilación de proteínas en tirosina. Estos resultados sugieren que el uso de alfa tocoferol, y de antioxidantes en general, puede ser una estrategia efectiva para contrarrestar los daños inducidos por la criopreservación.