Implementación del muestreo de aire en granjas porcinas intensivas para detección de virus de influenza a resultados preliminares.

Los virus de influenza A (VIA) afectan a los cerdos produciendo enfermedad respiratoria.1 Dentro de las principales vías de transmisión de este agente se encuentran el contacto directo y los aerosoles.3

Existen dispositivos que permiten recolectar partículas suspendidas en el aire, incluyendo microorganismos como el VIA.4

El objetivo de la presente publicación es reportar la implementación de un muestreo de aire en un criadero de cerdos intensivo para identificación de virus de influenza A (VIA).

 

El estudio se llevó a cabo en una granja intensiva, confinada de 500 madres, ubicada en el sur de la provincia de Córdoba (Argentina) que presentaba manifestaciones clínicas compatibles con infección por VIA. La semana previa a la realización de este estudio se habían recolectado muestras de secreción nasal, fluido oral y pulmón. Las muestras de secreción nasal y fluido oral de animales de 34 (1 muestra positiva/3 muestras totales), 44 (1/2), 51 (1/5) y 61 (4/6) días de vida (ddv) resultaron positivas para VIA mediante estudios de qRT-PCR (Real Time RT- PCR). En tanto que las muestras de pulmón de un animal de 72 y otro de 120 ddv hallados muertos durante esa visita mostraron marcaje positivo para antígenos de VIA mediante inmunohistoquímica.

Para la obtención de muestras de aire se utilizó un colector tipo cyclonic (Mid- west Micro Tek, Brookings, SD, USA), cedido por el el College of Veterinary Medicine, University of Minnesota (CVM/UMN).

El muestreo de aire estuvo dirigido a los ambientes donde se encontraban las categorías clínicamente más afectadas. Se recolectaron muestras de salas de animales de recría (42, 49 y 56 ddv) y corrales de galpones de desarrollo (70, 106 y 122 ddv).

La técnica empleada fue similar a la descripta por Corzo y col. (2014)1. En todos los casos, el aparato se suspendió a 1.5 mts del suelo y se dejó funcionando durante 30 minutos. Se utilizó un medio líquido a base de Medio de Cultivo Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM), suplementado con albúmina sérica bovina (BSA), antibióticos, antimicóticos y tripsina. El medio líquido obtenido en cada muestreo se colocó en tubos de centrífuga, lo cuales fueron rotulados y remitidos refrigerados al Servicio de Biología Molecular de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Rosario (SBM- FCV/UNR). Los especímenes se guardaron congelados a -196°C hasta su procesamiento.

En el SBM- FCV/UNR se realizó la extracción del ARN utilizando un kit comercial (RNeasy® Mini Kit Quiagen). El material obtenido fue impregnado en tarjetas FTA (FTA® Cards, Whatman®) para su transporte. En el CVM/UMN las muestras fueron procesadas mediante qRT-PCR para detección del gen matriz del VIA.

 

Mediante los estudios de qRT-PCR de las muestras analizadas, no logró identificarse virus de influenza A.

 

Los resultados aquí presentados son preliminares.

Si bien grupos de investigación han sido capaces de detectar el VIA en el aire mediante el uso de dispositivos similares, no hay información acerca de la identificación de este agente en el aire en las condiciones de producción nacional Argentina.

Los resultados negativos pueden estar asociados a ausencia o escasa cantidad de virus en el aire. Estudios previos de validación del colector de aire cyclonic han estimado el límite de detección para VIA en 10 TCID50/ml.1 Sin embargo, estos resultados también podrían deberse a falencias en la técnica de muestreo (posiblemente asociada a la altura del dispositivo respecto a los animales) o cuestiones técnicas durante el procesamiento y transporte de las muestras. Esto último podría ser especialmente cierto teniendo en cuenta que, para su transporte, las muestras se impregnaron en tarjetas FTA, lo cual puede disminuir la cantidad de material recuperado.2

A través de proyectos colaborativos entre la FCV/UNR y el CVM/UMN se prevé la realización de nuevos estudios, que intentarán corregir las variables anteriormente mencionadas.

 

1.Corzo, C. y col. Detection of airborne influenza a virus in experimentally infected pigs with maternally derived antibodies. Transbound Emerg Dis. Febrero, 2014. 61(1):28-36.

2. Linhares, D.C. y col. Evaluation of Flinders Technology Associates cards for collection and transport of samples for detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus by reverse transcription polymerase chain reaction. J Vet Diagn Invest. Marzo, 2012 24(2):328-32.

3. Torremorell, M. y col. Transmission of influenza A virus in pigs. Transbound Emerg Dis. Marzo, 2012. 59 (1):68-84

4. Verreault, D. y col. Methods for Sampling of Airborne Viruses. Microbiol. Mol. Biol. Rev. Septiembre, 2008. 72 (3): 413-444