Detección y caracterización de una nueva cepa del virus de la enfermedad de Aujeszky aislada a partir de un canino doméstico.

El virus de la Pseudorrabia (PRV) es el agente causal de la Enfermedad de Aujeszky (EA). Afecta primariamente a los cerdos y se manifiesta con una gran variedad de signos clínicos relacionados con el daño que produce en el sistema nervioso central, respiratorio y reproductivo. Ocasionalmente la EA puede manifestarse en bovinos, ovinos, caprinos, equinos, caninos y felinos. En estas especies el virus produce la muerte de los animales tras signos nerviosos característicos acompañados de prurito localizado. El PRV produce grandes pérdidas económicas en la industria porcina. La presencia de la enfermedad en Argentina fue notificada en 1979. Si bien la campaña de erradicación continúa vigente siguen observándose casos clínicos típicos esporádicos que hacen que la enfermedad se mantenga en el país. Varios años atrás se reportó un cuadro clínico en caninos en la provincia de La Pampa donde se logró definir el caso con el aislamiento de PRV a partir de uno de los caninos analizados. Desde entonces no se han conocido notificaciones de una situación similar ni se ha avanzado en algún tipo de análisis molecular.

 

Este trabajo reporta el aislamiento y caracterización molecular de PRV a partir de un canino muerto con signos nerviosos en la provincia de Santa Fe.

 

En el mes de abril de 2015, se recibió en el Laboratorio de Virología, FCV-UNLP, la cabeza de un canino muerto tras un cuadro nervioso de presuntivo origen viral. El animal vivía en un campo agrícola distante unos 1500 m aproximadamente de una granja porcina de ciclo completo en confinamiento positiva a EA, ubicada en Chañar Ladeado, provincia de Santa Fe. Se realizó la apertura y toma de muestras de tejido nervioso en forma estéril. Se obtuvieron muestras de cerebro y ganglio trigémino las que se procesaron para el aislamiento viral. Brevemente, se cultivaron células RK13 que se infectaron con las muestras extraídas y procesadas. Posteriormente, se procedió a la extracción del genoma viral a partir de las células infectadas y se evaluaron la concentración y calidad del ADN midiendo la relación OD260/OD280 en espectrofotómetro. Se realizó un corte con enzima de restricción BamH1 para determinar el tipo genómico de la nueva cepa. Al mismo tiempo, para la caracterización molecular, se utilizó la técnica de PCR con dos juegos de cebadores, un par que amplifica el fragmento que codifica para la gD y otro par para el fragmento que codifica la gC. Los productos de PCR se visualizaron en geles de agarosa teñidos con bromuro de etidio. En el caso del producto gC, se procedió a su purificación utilizando el kit comercial Wizard SV Gel (Promega) para su posterior secuenciación en el Instituto de Biotecnología-INTA-Castelar. El fragmento fue analizado con las cepas de PRV disponibles en el GenBank. Asimismo, 5 sueros de lechones de la granja porcina cercana se analizaron mediante la técnica de virusneutralización (VN) para la determinación de anticuerpos contra EA. En el Laboratorio de Patología Especial Veterinaria, FCV-UNLP, se obtuvieron 5 muestras de tejido nervioso para su evaluación histopatológica partiendo de una muestra parcial de encéfalo (área lateral de un hemisferio cerebral), e incluyendo zonas craneal, media y caudal.

 

Se observó efecto citopatógenico (ECP) compatible con PRV en las células RK13 infectadas tanto con muestras de cerebro como de ganglio trigémino, luego de 72hs de incubación a 37°C. El co rte del ADN viral con la enzima de restricción BamHI evidenció que el nuevo aislamiento pertenece al tipo genómico I, el mismo tipo genómico que predomina en nuestro país. Luego de realizar la PCR con los cebadores para gD, el producto de 217pb se visualizó como una banda única del peso esperado en un gel de agarosa al 2% teñido con bromuro de etidio. Para el caso del fragmento gC se observó una única banda de 785pb. La secuencia correspondiente al gen gC reveló un 100% de identidad comparada con el mismo fragmento de otras cepas de PRV aisladas a partir de cerdos. El estudio histopatológico reveló escaso infiltrado de células mononucleares en meninges, leve a moderada gliosis difusa y satelitosis neuronal, y escasa necrosis neuronal individual compatibles con una leve encefalitis inespecífica. Los sueros de cerdos analizados por la técnica de VN resultaron positivos con títulos de anticuerpos que oscilaron entre 1:8 y 1:32.

 

El presente trabajo describe, a partir de la situación epidemiológica y los signos nerviosos compatibles, la sospecha y posterior confirmación de contagio con el virus de la EA de un canino de la provincia de Santa Fe. La infección fue confirmada por aislamiento viral, PCR y análisis de secuenciación. Si bien la histopatología del cerebro no evidenció lesiones compatibles con una encefalitis manifiesta, debe tenerse en cuenta que el estudio se realizó sobre una muestra parcial de cerebro. En este sentido, la bibliografía describe que en los casos de infección por PRV en los caninos las lesiones se localizan casi exclusivamente en el tronco del encéfalo e involucran principalmente los núcleos de los nervios craneales, zonas que no estuvieron disponibles para su evaluación.

 

La EA puede trasmitirse de cerdos domésticos a cerdos salvajes y viceversa, como así también afectar a otras especies animales que estén en contacto con los cerdos o que consuman carne de cerdos infectados. Santa Fe es una de las provincias con gran producción porcina y que aún tiene alta prevalencia de EA. En este contexto es importante poder identificar la presencia del PRV en otras especies animales que no sea el cerdo y de esta manera tomar medidas sanitarias que favorezcan la erradicación de la enfermedad.

 

En nuestro país es la primera vez que se realiza un estudio de caracterización molecular y posterior análisis de una cepa de PRV aislada a partir de un canino.

 

1. Cramer S y col.(2015). Pseudorabies virus infections in Oklahoma hunting dogs. J Vet. Diag. Inv. 23(5):915-923. -Moras E y col.(1986). Segundo aislamiento de herpes suis en un brote de Enfermedad de Aujeszky en caninos de la provincia de La Pampa. II Congreso Argentino de Virología, 20-24 Octubre/86, Córdoba, Argentina.

2. Moreno A y col.(2015). Detection and molecular analysis of Pseudorabies virus strains isolated from dogs and wild boar in Italy. Vet. Microbiol., 177:359-365.