Cuantificación de Citoquinas Pro-Inflamatorias en Cerdos Inoculados Experimentalmente con Actinobacillus Pleuropneumoniae

Actinobacillus pleuropneumoniae (App) es el agente etiológico de la Pleuroneumonía Contagiosa Porcina (PCP), enfermedad respiratoria de distribución mundial, de gran impacto económico en la producción porcina debido a su alta morbilidad y mortalidad (Gottschalk y Taylor, 2006).

El objetivo de este estudio fue evaluar la respuesta inflamatoria de cerdos inoculados con App a través de la cuantificación de las citoquinas pro-inflamatorias IL-1β, IL-6 y TNF-α en 4 tejidos: tonsila, linfonódulos retrofaríngeo y mediastínico y pulmón, a través de la técnica de RT-qPCR. 

 

Se trabajó con 30 cerdos de 8 semanas de edad susceptibles a App, provenientes de un plantel serológicamente negativos para la enfermedad. Los animales fueron divididos en 2 grupos; G1 o grupo control (n=10), y G2 o grupo inoculado con App. Los cerdos de G1, fueron inoculados con 4 ml, por vía intratraqueal (IT), y 2 ml por vía intranasal (IN) de una suspensión del medio de cultivo sin bacterias. El grupo 2 (G2, n=20) fue inoculado con 4 ml IT y 2 ml IN de un aislado de campo 418/07 (concentración de 109 /ml UFC). Los grupos fueron divididos en 2 y 4 subgrupos de 5 animales cada uno  dependientes de las horas de sacrificio post inoculación (hpi). Los cerdos de G1 se sacrificaron a las 4 y 48 hpi, los cerdos de G2 se sacrificaron a las 4, 8, 24 y 72 hpi. A la necropsia se constató lesiones y se procedió a la toma de muestras de tejidos para la extracción de ARNm, la cuantificación de citoquinas con RT-qPCR y para el estudio de lesiones histopatológicas. 

 

Los cerdos de grupo control o G1 no presentaron lesiones, ni variaciones en los niveles de citoquinas. En el grupo infectado, se observó lesiones y al análisis de qPCR se observó variaciones importantes en los niveles de citoquinas respecto de G1. En las tonsilas, IL-1β fue la citoquina predominante mientras que IL-6 y TNF-α mantuvieron niveles constantes. En los LN retrofaríngeos se observó un aumento  de IL-1β a las 8 hpi y a las 48 hpi; TNF-α se elevó levemente a las 48 hpi. En los LN mediastínicos aumentaron IL-1β y TNF-α considerablemente a las 8 hpi y descendieron a las 24 hpi. En el pulmón, a las  24 hpi se observaron aumentos de IL-1β y TNF-α; a las 48 hpi el nivel TNF-α superó por primera vez la IL-1β. La IL-6 se mantuvo siempre a nivel basal. Todas las variaciones en los niveles de citoquinas fueron concordantes con la patogenia de la PCP en su presentación aguda. Los aumentos de IL-1β y TNF-α concuerdan con la severidad del cuadro clínico y con la gravedad de las lesiones pulmonares según lo descrito por Zhu et al (2004). La IL-6, se mantuvo en niveles basales durante toda la experiencia, similar a lo descrito por Lauritzen et al (2003). Se demostró que la cuantificación de citoquinas por qPCR es un método eficaz y que las citoquinas permanecen en los tejidos afectados al menos 48 hpi, lo que difiere a lo descrito por Llamas et al (2006) quienes afirmaron que éstas son detectables en suero solo hasta 12 hpi. 

 

1. Gottschalk, M., D.J. Taylor. 2006. Actinobacillus pleuropneumoniae. pp: 563- 576. In: B.E. Straw, J.J Zimmerman, S. D’Allaire, D.J.Taylor (Ed) Diseases of Swine (9th. ed). Blackwell Publishing. Iowa, USA.
2. Lauritzen, B., J. Lykkesfeldt, M.T. Skaanild, O. Angen, J.P. Nielsen and C. Friis. 2003. Putative biomarkers for evaluating antibiotic treatment: an experimental model of porcine Actinobacillus pleuropneumoniae infection. Res. Vet. Sci. 74(3): 261-270.
3. Llamas, S., L. Boyle, P.B. Lynch and S. Arkins. 2006. Pro-inflammatory cytokine and acute phase protein response to low-dose lipopolysaccharide (LPS) challenge in pigs. Anim. Sci. 82(Part. 4): 527-534.
4. Zhu, Y., I. Österlundh, F. Hultén and U. Magnusson. 2004. Tumor necrosis factor-α, interluekin-6, serum amyloid A, haptoglobin, and cortisol concentrations in sows following intramammary inoculation of Escherichia coli. Am. J. Vet. Res. 65(10): 1434-1439.