Identificación de virus de influenza A en muestras de fluido oral resultados preliminares.

Los virus de Influenza A pueden infectar a cerdos produciendo enfermedad respiratoria y fiebre, además de predisponer a infecciones bacterianas secundarias.¹

El fluido oral (FO) está compuesto por saliva y diversos elementos, entre los que pueden encontrarse virus y bacterias.4 En cerdos, este tipo de muestra ha sido empleada para la detección de anticuerpos y agentes infecciosos, entre los cuales se encuentra el virus de influenza A.^2,3

La obtención de muestras de fluido oral constituye un método seguro, eficiente y de bajo costo.3 El objetivo de la presente publicación es reportar la identificación de virus de influenza A (VIA) H1N1 a partir de muestras de fluido oral de cerdos.

 

El estudio se llevó a cabo a finales del mes de abril de 2015 en una granja intensiva, confinada de 500 madres, ubicada en el sur de la provincia de Córdoba. El establecimiento tenía antecedentes de infecciones por VIA y, desde enero de ese año y al momento del muestreo, presentaba incremento en los porcentajes de tos, con clínica compatible con infección por VIA a los 40-45 días de vida (ddv) y 100-120 ddv. A su vez, asociado al cuadro respiratorio se presentaba un aumento de la mortandad de los animales de 40-45 ddv, generalmente asociado a lesiones de poliserositis.

Se tomaron muestras de FO en corrales de animales con clínica compatible con infección por VIA.

Para la obtención del fluido oral se emplearon sogas trenzadas de algodón neutro de 1,5 cm de espesor. La longitud de las cuerdas varió entre 50 a 90 cm, de acuerdo a las características de los corrales y la edad de los cerdos. Básicamente, se buscó que una vez atadas las sogas, sus cabos quedaran a la altura del hombro de los cerdos del corral.

Para ayudar a que los cerdos masticaran la soga, antes de fijarlas, los investigadores mostraban y “tentaban” a los animales con el material.

Con la intención de obtener muestras limpias, las cuerdas se colocaron lejos de comederos y bebederos. Se permitió que los cerdos accedieran a las mismas durante 30 minutos. A intervalos aproximados de 10 minutos, los animales eran movidos para facilitar la rotación de animales en contacto con la cuerda.

Para obtener el fluido oral, las sogas se escurrieron en bolsas de plástico y el fluido obtenido fue colocado en tubos de centrífuga, rotulados y remitidos refrigerados al laboratorio donde fueron centrifugados. El sobrenadante fue almacenado a -196ºC hasta su procesamiento.

En el Servicio de Biología Molecular de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario (SBM-FCV/UNR) se realizó la extracción del ARN utilizando un kit comercial. El material obtenido fue impregnado en tarjetas FTA para su transporte. En el College of Veterinary Medicine, University of Minnesota (CVM/UMN) las muestras fueron procesadas mediante Real Time RT- PCR (qRT-PCR) para detección del gen matriz del VIA. Posteriormente se realizó la subtipificación de las muestras positivas mediante qRT-PCR para H1, H3, N1 y N2.

 

A partir de muestras de fluido oral pudo identificarse VIA. Las muestras positivas correspondieron al subtipo de VIA H1N1.

 

Hasta nuestro conocimiento este es el primer reporte de identificación de agentes infecciosos a partir de muestras de fluido oral en porcinos de Argentina.

Como describen otros autores, la recolección de las muestras fue simple, rápida y no estresante para los animales, investigadores ni personal de la granja.^1-4

Se ha reportado que la probabilidad de detectar VIA por qRT-PCR en fluido oral es equivalente, e incluso superior a la de hisopos nasales.¹

Estudios previos han demostrado una sensibilidad general para detección de VIA por qRT-PCR de muestras de FO de corrales del 80%, variando entre 99% (prevalencia del corral mayor a 18%) y 69% (prevalencia dentro del corral de 9%).⁴

Los resultados del presente estudio demuestran que hemos sido capaces de implementar adecuadamente la recolección y procesamiento inicial de las muestras de fluido oral obtenidas. Actualmente, en el Servicio de Biología Molecular de la Facultad de Ciencias Veterinarias (Universidad Nacional de Rosario), se están realizando las actividades de validación de las técnicas de biología molecular para detección de VIA a partir de muestras de FO.

 

1. Decorte, I. y col. Detection and isolation of Swine Influenza A Virus in spiked oral fluid and samples from individually housed, experimentally infected pigs: potential role of porcine oral fluid in active Influenza A Virus surveillance in swine. PlosOne. Octubre, 2015 10(10).
2. Detmer, S. y col. Detection of Influenza A virus in porcine oral fluid samples. J Vet Diagn Invest. (2011) 23:241–247.
3. Ramirez, A. y col. Efficient surveillance of pig populations using oral fluids. Prev Vet Med. Mayo, 2012, 104(3-4):292-300.
4. Romagosa, A. y col. Sensitivity of oral fluids for detecting influenza A virus in populations of vaccinated and non-vaccinated pigs. Influenza Other Respir Viruses. Marzo, 2012, 6(2):110-8.