Inmunopatogenia de Neospora caninum: estudios en el calostro de vacas naturalmente infectadas y en sus neonatos

La neosporosis bovina es una enfermedad parasitaria causada por el protozoo Neospora caninum y caracterizada por provocar abortos y elevadas pérdidas económicas. Actualmente, es considerada la principal causa de abortos de origen infeccioso en vacunos en Argentina (Morrell et al., 2019). El objetivo de este estudio fue caracterizar la inmunopatogenia de N. caninum en calostro de vacas naturalmente infectadas y en sus neonatos congénitamente infectados.

El trabajo se llevó a cabo en la Reserva Ganadera 5 de INTA EEA Balcarce. Se utilizaron 2 grupos experimentales: grupo infectado naturalmente (+) (7 vacas multíparas) y grupo control negativo (-) (4 vacas multíparas). Luego del parto se tomaron muestras de calostro de las 11 vacas y sangre precalostral con y sin anticoagulante de los 11 neonatos. De la sangre entera se aislaron 5x10⁶ células mononucleares de sangre periférica (CMSP) para la posterior extracción de ADN mediante kit comercial (Wizard Genomic DNA Purification Kit, Promega) y detección molecular de N. caninum mediante PCR (Müller et al., 1996) y qPCR (Collantes-Fernández et al., 2002). A partir de los sueros de los neonatos se evaluó la concentración enzimática de GGT (indicadora de ingestión de calostro), de los títulos de anticuerpos de IgG total anti-N. caninum y de la avidez de estos anticuerpos, mediante kits comerciales (Wiener lab, Rosario, Argentina; ELISA indirecto CIVTEST® BOVIS Neospora, HIPRA y ELISA indirecto CIVTEST® BOVIS Neospora Suplemento de Avidez, HIPRA; respectivamente) y de los títulos de IgG1 e IgG2 mediante ELISA indirecto in-house (Moore et al., 2011). En calostro se cuantificaron los títulos de IgG total, IgG1 e IgG2 y se realizó la detección molecular de N. caninum mediante PCR y qPCR.

Los 11 terneros nacieron sanos; los 7 terneros del grupo (+) resultaron seropositivos mientras que los 4 del grupo (-) fueron seronegativos. La Tabla 1 resume los principales hallazgos serológicos en los neonatos del grupo (+). La actividad GGT fue < 50 UI/l, indicando la ausencia de ingestión de calostro. Todas las muestras de calostro del grupo (+) resultaron positivas al ELISAi para IgG total con un promedio de IRPC (índice relativo por cien) de 63,85 (valores extremos: 24,04 y 85,86); la subclase predominante fue la IgG1 con una densidad óptica (DO) promedio de 1,26 (valores extremos: 0,49 y 1,70), mientras que la DO promedio de la IgG2 fue de 0,11 (valores extremos: 0,05 y 0,17). Las muestras de calostro del grupo (-) resultaron negativas con un promedio de IRPC de 1,90 (valores extremos: 0,59 y 3,07).

Se detectó ADN de N. caninum en 2/7 muestras de CMSP (25,32 y 4,12 taquizoítos/10⁶ CMSP) de los neonatos y en 1/7 muestras de calostro (1.48 taquizoítos/mg de sedimento de 50 ml calostro).

La tasa de transmisión vertical hallada (100%) refleja la eficiencia de N. caninum para mantenerse endémicamente en rodeos. Además, la detección de N. caninum en CMSP de los terneros confirma en forma directa la infección en el neonato; este es el primer reporte de detección de N. caninum en CMSP de terneros precalostrales. Los valores variables de avidez detectados podrían relacionarse con distintos momentos de infección en los fetos. De este modo, una baja avidez indicaría infecciones posteriores al día 220 de gestación, intermedia para infecciones entre los días 100 a 220 y alta para infecciones previas al día 100 de gestación. El hallazgo de una muestra de calostro positiva a N. caninum resulta insuficiente para realizar conclusiones sobre la posibilidad de transmisión lactogénica dado que el número de muestras evaluadas fue reducido y además, no es posible determinar la viabilidad de N. caninum porque no se intentó su aislamiento.

La subclase predominante en calostro y suero de neonatos congénitamente infectados es la IgG1. La seropositividad de los neonatos y la detección molecular de ADN parasitario en CMSP confirman la infección transplacentaria. La avidez de la IgG en neonatos precalostrales sería variable según el momento de infección en su vida fetal.