Tasa de preñez en vacas

La Transferencia Embrionaria (TE) es una técnica que permite lograr un mayor aprovechamiento de los animales genéticamente superiores, como toda técnica posee muchas ventajas, y algunas desventajas. Algunas de las ventajas que trae aparejada su utilización son: mayor progreso genético, multiplicación de los llamados fenotipos deseables, comercialización de embriones, etc. El desarrollo de tratamientos de sincronización que posibilitan efectuar la transferencia de embriones a tiempo fijo (TETF), ha sido un aporte significativo ya que no sólo mejora el manejo de las receptoras debido a la omisión de la detección de celo, sino que también posibilita un mayor aprovechamiento de las mismas. El resultado de la TE se ve influenciado por distintas variables que las podemos agrupar como, relacionadas con el embrión, con la receptora y con la transferencia propiamente dicha. El objetivo de este trabajo fue analizar la incidencia del estadio de desarrollo embrionario, de la calidad del embrión y de la época de transferencia sobre el porcentaje de preñez en un programa de TETF. Se analizaron los resultados de 137 transferencias de embriones frescos que se realizaron  en dos épocas del año (Otoño-Invierno y Primavera). El porcentaje de preñez que se obtuvo con la transferencia de Mórulas compactas 48,4% (30/62), resultó similar al logrado con Blastocistos 55,0% (22/40). De manera similar, no se observaron diferencias entre distintos grados de calidad embrionaria definidas por la Sociedad Internacional de Transferencia Embrionaria: Grado 1, 52,9% (27/51); Grado 2, 53,1% (26/49) y Grado 3, 43,2% (16/37). En cambio, el porcentaje de preñez obtenido en Otoño-Invierno, 71,4% (30/42) difirió (p<0,01) del logrado en Primavera, 41,1% (39/95). Se concluye que, en un programa de TETF, el porcentaje de preñez que se obtiene con la transferencia de embriones frescos es afectado por la época del año. No obstante, estos resultados preliminares deben ser corroborados sobre un mayor número de animales

 La tecnología de la transferencia de embriones (TE) en bovinos requiere de la selección y el manejo, tanto físico como farmacológico, de las donadoras y las receptoras, y también de la recolección y transferencia de los embriones dentro de un periodo corto y específico después del estro (Mapletoft, 2006).

La TE se realiza desde hace más de treinta años (Merton  et al., 2003, citado por Mollo et al, 2007). Hoy en día es muy utilizada en todo el mundo (Cutini, et al., 2000; Duica, et al., 2007) y tiene como principal objetivo la obtención de crías a partir de donadoras genéticamente superiores, utilizando el útero de receptoras de menor valor económico para llevar la gestación a término (Bó, 2000).

Dentro de las ventajas que presenta la técnica podemos mencionar (Duica et al, 2007):

Uno de los principales inconvenientes que posee la técnica de TE es la detección de celos en las receptoras, sobre todo en animales Bos Indicus (Peres et al., 2006). Esto se debe a la baja eficiencia que existe en la detección del celo hecho que influye en el costo de mantenimiento de una receptora hasta que queda preñada y en consecuencia en el costo de la preñez lograda siendo considerado uno de los puntos críticos de la técnica de TE (Beal y Hinshaw, 2000, citado por Peres et al., 2006). Entre los factores que afectan la detección de celos se puede nombrar a la persona encargada de la misma, en cuanto al tiempo que utiliza en realizar dicha actividad. Otro factor que influye es la cantidad de vacas que conformen el rodeo, debido a que si hay muchas vacas en celo al mismo tiempo ellas se agruparán formando el grupo sexualmente activo y facilita dicha actividad. Con el fin de evitar la detección de celos se desarrollaron métodos de sincronización de la ovulación para facilitar la TE en forma sistemática, o también llamada transferencia de embriones a tiempo fijo (TETF) en donde se mejora no solo el manejo del rodeo debido a la omisión de la detección de celo, sino que también se obtiene un mayor aprovechamiento de las receptoras que inician el programa de sincronización.

Dichos métodos corresponden a tratamientos mediante el uso de GnRH, administrada al día 0, un agente luteolítico (PGF) en el día 7 y una segunda dosis de GnRH en el día 9 (Protocolo Ovsynch) que ha dado resultados aceptables. Un método alternativo al mencionado es el uso dispositivos con P4 combinado con estradiol, permitiendo este una efectiva sincronización de la nueva onda folicular. En el momento de retirar el dispositivo se administra PGF. Luego de retirado el dispositivo se aplica estradiol o hCG resultando en una efectiva sincronización de la ovulación y en aceptables tasas de preñez. Además, adelantando el momento de la aplicación de la PGF y administrando una dosis de eCG se ha logrado incrementar las tasas de preñez en receptoras de embriones tratadas con dispositivos con P4 y estradiol (Bó et al., 2006).

En conclusión, se puede optar según costos y posibilidades propias de cada establecimiento, por un tratamiento (con detección de celos) u otro (TETF). Un protocolo que resulta en una tasa de receptoras transferidas del 80 al 85% y una tasa de preñez final del 50% es económicamente eficiente, sobre todo teniendo en cuenta que elimina la necesidad de la detección de celos y disminuye el intervalo desde el tratamiento a la preñez (Bó et al., 2006).

El éxito de un programa de TE se mide por el número de terneros que nacen vivos por hembra donante en un determinado lapso de tiempo (Peres et al., 2006). Los resultados se ven afectados  por una serie de factores inherentes a la donante, al embrión, a la aplicación de la técnica y a las receptoras, quienes reciben un embrión extraño a nivel uterino, permitiendo su desarrollo gestacional (Duica  et al., 2007; Peres et al., 2006).

Factores como la raza de los animales a utilizar, selección de la donante así como la receptora, manejo de las hembras, respuesta de los animales a los tratamientos de sincronización, técnica para realizar la TE, día en que se efectúa la transferencia del embrión, calidad del embrión, respuesta de la receptora al embrión transferido, interacción embrión-hembra han sido estudiados tratando de estandarizarlos para obtener mejores resultados; pero sin duda uno de los factores más importantes en la obtención de resultados positivos, representados en preñeces y nacimientos, es la óptima selección de la hembra que va  a recibir un embrión en su útero, de manera tal que pueda brindarle unas condiciones adecuadas que permitan la supervivencia, nidación y desarrollo de este. Esta gran cantidad de factores que afectan el éxito de la TE, explican la variabilidad de los resultados obtenidos.

Dentro de los factores embrionarios, la calidad influye claramente en el resultado de la transferencia, independientemente de que los embriones sean frescos, criopreservados, micromanipulados y/o producidos in vitro (Cutini et al., 2000). La congelación afecta la viabilidad de los embriones producidos in vivo, no obstante, como las diferencias no son sustanciales se compensan con las ventajas que la técnica trae aparejada. La viabilidad post transferencia de los embriones producidos in vitro y/o micromanipulados es marcadamente inferior a la de los embriones producidos in vivo, tales diferencias se acrecientan cuando dichos embriones son criopreservados (Cutini et al., 2000).

I.     Estadio del desarrollo: El efecto que causa el estadio del desarrollo del embrión no está del todo claro debido a que hay diferentes trabajos con resultados variables. En un trabajo realizado por Bó (2008), no observó diferencias en el porcentaje de preñez obtenido de embriones congelados en diferentes estadios de desarrollo (Tabla 1). Por otro lado, blastocistos tempranos y blastocitos resultaron en mayores porcentajes de preñez que mórulas, blastocistos expandidos y blastocitos protruidos (Hasler, citado por Cutini et al., 2000).

Otros autores, obtuvieron mejores resultados con blastocistos que con mórulas; así,  Dochi, et al. (Citado por Cutini et al., 2000) observaron que mórulas y blastocistos tempranos resultaron en porcentajes de preñez más elevados que blastocistos o blastocitos expandidos. Contrariamente, Cutini et al, 2000 no han hallado efecto del estadio de desarrollo.

II.   Calidad Embrionaria: La clasificación que se utiliza para los embriones en la mayoría de los casos sigue la escala propuesta por la Sociedad Internacional de Transferencia Embrionaria que agrupa los embriones según su calidad en 4 grados: I (excelentes y buenos), II (regulares), III (pobres) o IV (degenerados). Existen diferentes trabajos que indican que embriones Grado I tienen más altas probabilidades de alcanzar la preñez que aquellos clasificados como de Grado II, tanto en TE en fresco, sin criopreservar (Tabla 2), como congelados (Tabla 3). Embriones clasificados como excelentes o buenos tienen una alta probabilidad de alcanzar la preñez. No obstante, debe considerarse que embriones calificados excelentes luego de ser transferidos normalmente, no terminan en preñez, mientras que embriones de buena calidad y transferidos con algún tipo de problema, resultan en preñeces y nacimientos normales (Cutini et al., 2000).

Además los embriones de baja calidad tienen una mayor probabilidad de sufrir muerte embrionaria cuando se transfieren que aquellos que son morfológicamente normales (Cutini et al, 2000).

La incapacidad de lograr la preñez por parte de algunos embriones clasificados como de buena calidad puede ser explicado en parte por el estudio realizado por Aguilar y Gallina (2002), en el cual encontraron que el 30% de los embriones clasificados como de buena calidad al ser evaluados por microscopia de luz y electrónica presentaron características de embriones en estado de degeneración, de esta forma demostraron que si bien hoy en día la clasificación es muy subjetiva y se realiza por microscopia estereoscópica tiene sus errores y hacen que embriones sean transferidos o más grave aun congelados disminuyendo la posibilidad de una gestación.

Si bien la calidad embrionaria puede determinar los resultados obtenidos, otros factores relacionados con la receptora o con la transferencia podrían modificar dichos resultados.

Con respecto a los factores relacionados con la receptora, además de una variedad de parámetros que deben ser evaluados, como el  factor racial, edad, estado fisiológico, sanidad, peso, integridad del tracto reproductivo y manejo, es de gran importancia hacer un seguimiento de las estructuras ováricas presentes durante la sincronización del estro, así, como de las etapas previa y posterior a transferir el embrión. De este modo, un óptimo desarrollo folicular será determinante para la formación de un cuerpo lúteo (CL) que genere concentraciones plasmáticas de progesterona (P4) suficientes para ofrecer un medio ambiente uterino adecuado y favorecer el óptimo desarrollo embrionario (Duica et al., 2007).

Al momento de la transferencia, la receptora ideal es aquella con sincronismo o con un asincronismo de +/- 24 h, en la que se ha comprobado la presencia del CL; además se debe relacionar el estadio de desarrollo embrionario con el día del ciclo de la receptora (Cutini et al., 2000).

Las receptoras deben ser reproductivamente sanas para recibir un embrión y llevar la gestación a término, poseer un tamaño que les permita parir sin dificultades y deben ser de buena capacidad lechera para alimentar al ternero de manera que le permita expresar su potencial genético.

 

I.     Raza: Generalmente se prefiere a las razas cruzas antes que a las puras, posiblemente porque las primeras sean más fértiles. Según algunos autores, las cruzas entre las razas británicas y la Holstein son preferibles a las cruzas continentales porque ellas son mas baratas, de tamaño medio y de buen potencial lechero (Cutini et al., 2000).

En un estudio realizado con embriones congelados y vitrificados, no se hallaron diferencias de preñez entre receptoras de razas lecheras (46,0%), carniceras (43,2%) y doble propósito (43,9%) (Van Wagtendonk-de Leeuw et al., 1997, citado por Cutini et al., 2000)

 

II.   Categoría: Hay criterios desencontrados respecto a si es mejor utilizar vaquillonas o vacas. Los que proponen el uso de vacas lo hacen argumentando que las mismas ya han parido alguna vez. Por otro lado, las vaquillonas son seleccionadas principalmente como receptoras por razones económicas, logísticas y técnicas, entre ellas podemos mencionar que es menos probable que se encuentren bajo estrés nutricional o que tengan una historia con problemas sanitarios, además el útero virgen es más apropiado para recibir un embrión transferido. Se considera que, así como en la inseminación artificial, en la transferencia embrionaria se obtiene mayor porcentaje de preñez en vaquillonas que en vacas.

En un trabajo en el cual se determinó la influencia de la categoría sobre el porcentaje de preñez concluyeron que las receptoras con mayores porcentajes de preñez fueron las vacas con cría, seguidas por  aquellas vacas que destetaron sus crías (P≤ 0,05, Villarreal et al., 2009). Posteriormente se ubicaron las vaquillonas y por último, las vacas secas. Estas, fueron vientres que no se habían preñado en el último servicio y quizás esa haya sido la causa de su baja fertilidad (Tabla 4).

Valores con distintos superíndices difieren significativamente (p≤0,05) (Villarreal, et al., 2009)

III.Estado Nutricional: La alimentación y el estado nutricional en una receptora es un factor muy importante, como ya se sabe cuando un animal entra en déficit alimenticio los primeros que se ven perjudicados son los parámetros reproductivos. Por este motivo este aspecto es de suma importancia más aun considerando que el embrión que se deposita en el útero de una receptora corresponde a un animal de alto valor genético.

La condición corporal (CC) de las receptoras y el contenido energético de la alimentación que estas reciben son los factores más importantes. El cambio que se produce en la CC entre el parto y la transferencia, guarda estrecha relación con el contenido energético de la alimentación que la receptora recibe en dicho periodo. Si se produce una disminución marcada de la CC se afectan el intervalo parto-celo y los porcentajes de preñez y parición (Cutini et al., 2000).

Mapletoft et al, 1986, citado por Cutini et al, 2000, obtuvieron mayor porcentaje de preñez con receptoras de CC 2 y 3, que con aquellas de condición ≤ 1 o ≥ 4 (Tabla 5).

 Valores con superíndices diferentes difieren: P<0,05)

IV.     Sincronismo donante/receptora y embrión/receptora: El grado de sincronización que se establece entre la donante y la receptora es otro de los factores importantes que influyen en el resultado final de una TE. Cuando el intervalo entre la ovulación y el lavaje de la donante es igual al comprendido entre la ovulación y la transferencia de la receptora, se habla de una transferencia sincrónica. Este se mide en términos positivos (+) o negativos (-). Si el intervalo  entre la ovulación-transferencia en la receptora es un día mayor que el intervalo ovulación-lavaje de la donante, se habla de un asincronismo de + 24 h. Por el contrario -24 h significa que el intervalo de la receptora es un día más corto que el de la donante.

El sincronismo entre el momento del ciclo de la receptora y el estadio en que se encuentra el embrión parece constituir un índice más válido de las posibilidades de éxito de la transferencia, razón por la cual deberá ser tenido en cuenta al hacer transferencia. En la Tabla 6 se describe el código de desarrollo, estimado en día, según el estadio embrionario y en la Tabla 7 el efecto de la sincronicidad donante/receptora y embrión/receptora sobre la tasa de preñez (Lindner y Wrigth, 1983).

 

Como ya se ha mencionado, para que el embrión transferido logre una preñez, en el útero de la receptora deben darse ciertas condiciones, las mismas están dadas entre otros factores por la existencia de agentes luteotrópicos y la inhibición de los factores luteolíticos.

Rodríguez, et al. (2007) citan en su trabajo que para que exista el reconocimiento materno, el embrión debe encontrar un medio uterino apropiado, influido por la P4 lútea, ya que ésta estimula la producción de una variedad de secreciones endometriales tales como el MUC-1 (mucin glycoprotein-1), lactógeno placentario, osteopontinas, necesarias para el adecuado desarrollo de los embriones (Spencer et al., 2004, citado por Rodríguez et al., 2007). Por lo tanto, debe detenerse el proceso luteolítico mediante la expresión de interferon-tau por parte del embrión, evitando la muerte embrionaria temprana (Demmers, 2001 citado por Rodríguez et al., 2007), o favoreciendo la acción de la P4 sobre el endometrio que conlleva a la inactivación de la producción de prostaglandina F2α (PGF2α) de forma prematura evitando la formación de cuerpos lúteos de corta duración (Spencer et al., 2004 citado por Rodríguez et al., 2007).

El efecto de la cantidad de cuerpos lúteos o del área total de CL todavía está en discusión y diversos autores indican que es uno de los factores que debería seguir investigándose debido a la variabilidad que existen en los diferentes trabajos.

Según Duica et al. (2007), un folículo preovulatorio de 1,3 cm de diámetro  genera luego de la ovulación un cuerpo lúteo que el día siete mide 5 mm y produce niveles de P4 plasmática de 1,22 ng/ml y al día 14, el CL mide 6 mm y genera concentraciones plasmáticas de P4 de 2,48 ng/ml. Asimismo, un folículo preovulatorio de mayor tamaño (1,6 cm) da paso a un CL que al día 7 mide 6 mm y produce niveles de P4 plasmática de 1,61 ng/ml y el día 14 el mismo cuerpo lúteo mide 9 mm, generando concentraciones plasmáticas de 3,05 ng/ml (P<0,05); así, al haber una mayor producción de P4 plasmática se esperaría generar unas condiciones uterinas más favorables para el desarrollo embrionario temprano. Por eso es importante determinar el tamaño de las estructuras ováricas antes de realizar la transferencia del embrión a la receptora.

Baruselli et al. 2001, citado por Duica et al., 2007 relacionaron el tamaño del CL, la concentración de P4 y el porcentaje de preñez (Tabla 8).

En concordancia con este trabajo Spell (2001, citado por Duica et al., 2007), al encontrar un CL de 2,36 cm de diámetro en receptoras a las que se les fue transferido el embrión el día 7 postcelo, detectó una concentración plasmática de P4 de 4,2 ng/ml y una tasa de preñez del 70%.

Cutini et al., (2000) mostraron la gran variabilidad que existe en los diferentes trabajos realizados por distintos autores, indicando que no es posible establecer una relación entre la calidad del CL y la preñez.

La Tabla 9 muestra el efecto de la calidad del cuerpo lúteo, estimada en función de su tamaño y consistencia a la palpación, sobre la tasa de preñez después de la transferencia embrionaria.

Referencia  - (no consignado), * Embriones producidos in vitro, ** Embriones frescos, *** Embriones congelados. Fuente: Cutini et al,2000.

 

VI.Historia reproductiva de la receptora: En un trabajo realizo por Peres et al., (2006) en el cual se analizaron las diferentes variables que influyen en el resultado de preñez de las TETF, observaron que había un efecto significativo (P<0,05) de la variable historia reproductiva, en donde se consideraba que las receptoras podían tener dos historias reproductivas, una opción era haber quedado vacía en una TE previa y la otra opción era la de ser receptora por primera vez. Los resultados obtenidos (Tabla 10), concordaban con lo informado por Looney et al., (2006), citado por Peres, et al., 2006, quienes encontraron una reducción del 10% en la tasa de preñez en las receptoras previamente utilizadas.

 

VII.            Empleo reiterado: Según se mencionó está claro que hay una diferencia significativa a favor de animales utilizados por primera vez por sobre aquellas receptoras que hayan quedado vacías en una TE previa. Con respecto a este factor surge la duda de cuanto influye el uso reiterado de las mismas. Se ha observado que la tasa de preñez no es afectada hasta la tercera transferencia y que luego tiende a disminuir progresivamente (Cutini et al., 2000). Esto ocurre tanto en vaquillonas como en vacas y con embriones producidos in vivo e in vitro. En base a esta información se ha establecido un criterio donde se señala que cada receptora podrá tener tres oportunidades de quedar preñada, luego de haber sido transferida correctamente con un embrión de buena calidad (Alberio, 1993).

En la Tabla 11 se pueden apreciar los porcentajes obtenidos por distintos autores luego de efectuar transferencias sucesivas (Cutini, et al., 2000)

Dentro de los factores relacionados con la aplicación de la técnica de transferencia de embriones hay que tener en cuenta que hay diferencias numéricas y en algunos casos significativas según el técnico que realice la transferencia. Tal es el caso del trabajo realizado por Bó et al., 2003, citado por Duica et al., 2007 en donde se evidenciaron diferencias significativas (P< 0,05) en los resultados, representados en tasa de preñez, después de realizar TE, cuatro diferentes operarios que aplicaron la técnica, evaluando también la calificación de la transferencia (Buena, regular, mala) en un grupo experimental, conformado por 867 receptoras. De esta manera, la aplicación de la técnica afectó directamente la eficiencia del programa de TE (Duica et al., 2007).

La obtención de los embriones debe ser realizada por un profesional con experiencia en este tipo de actividades ya que se realiza una gran manipulación del útero y cualquier imprecisión en el manejo de este órgano causaría disminuciones en la obtención de buenos resultados debido a la liberación de prostaglandinas a nivel uterino (Bó et al., 2003, citado por Duica et al., 2007).

 

I.     Estación del año en que se realiza la transferencia de los embriones bovinos: El estrés calórico producido en ciertas estaciones del año reduce la fertilidad tanto en vacas productoras de leche (Wolfenson et al., 1988; Sartori et al., 2002 citado por Barati et al., 2006) como en vacas productoras de carne (Dunlap y Vincent, 1971, citado por Barati et al., 2006).

Al igual que como se ve afecta la fertilidad en las vacas, el estrés calórico tiene un efecto perjudicial sobre los embriones sobre todo en las etapas tempranas del desarrollo (en el día 1 después de la inseminación, Ealy et al., 1993; Edwars y Hansen, 1997 citado por Barati et al., 2006). Se produce un aumento de la concentración de radicales libres (Ealy et al., 1993 citado por Barati et al., 2006) y una disminución en las proteínas de shock térmico (Edwars y Hansen, 1997 citado por Barati et al., 2006)

Además, se ha reportado que los animales Bos Indicus son más resistentes al estrés térmico comparados con los Bos Taurus (Paula-Lopes et al., 2003, citado por Barati et al., 2006).

Investigaciones que han tratado de determinar la influencia de la estación del año sobre la reproducción de la hembra bovina demostraron su efecto sobre la edad a la cual llegan a la pubertad y sobre la fertilidad. Estos efectos están asociados con el fotoperiodo, la nutrición y el estrés térmico (Tucker, 1982, citado por Weaver et al. 1986).

El estado nutricional y sanitario de las receptoras han sido reconocidos como factores que afectan significativamente el resultado de preñez en receptoras (Scidel, et al., 1980, citado por Weaver et al. 1986).

Jared McNaughtan, (2004) en su trabajo señala tres causas de cómo el estrés térmico afecta el resultado de preñez en TE en vaquillonas:

a)      Es más dificultoso de detectar el estro en animales que están sujetos a estrés térmico, debido a que lo expresan alrededor de 4,5 h menos que aquellos que no están estresados. Además la frecuencia de las montas decrece durante los meses más calurosos del año. Una probable razón para la baja expresión del celo es el cansancio físico sufrido por el animal en estrés. Otra posible razón puede tener origen hormonal ya que los animales estresados tienen bajos niveles circulantes de 17β-estradiol, y en algunos casos tienen niveles altos de adrenocorticotropinas, que pueden inhibir el comportamiento causado por el estradiol.

b)      El estrés calórico puede afectar la reproducción, reduciendo los porcentajes de concepción. La disminución en los porcentajes de concepción puede ser el resultado de las variaciones de temperatura y/o una reducción en el flujo sanguíneo al tracto reproductivo. Como resultado del aumento de temperatura y de la variación en el volumen de sangre que llega al útero, la probabilidad de que se produzca muerte embrionaria temprana aumenta.

c)      El estrés calórico eleva los niveles de PGF2α. Animales productores de carne y leche han tenido un incremento de la concentración en plasma de PGF2α durante el padecimiento de estrés calórico. Niveles elevados de PGF2α tuvieron un efecto perjudicial en el desarrollo del embrión.

En conclusión, existen numerosos factores que afectan el éxito de la transferencia embrionaria por lo cual es lógico de encontrarse variabilidad en los resultados obtenidos.

Analizar la incidencia del estadio del desarrollo embrionario, la calidad del embrión y la época de transferencia sobre el porcentaje de preñez en un programa de transferencia de embriones frescos a tiempo fijo.

 

El trabajo se realizó en el establecimiento "Quequen Grande", perteneciente a la firma "Quequen Grande S.A." situada en el partido de Necochea, Buenos Aires.

 

Se utilizaron como receptoras 137 vacas Aberdeen Angus o cruza por Hereford, con una condición corporal promedio de 5,7 (escala 1-9), los animales se encontraban en una pradera cultivada (pastura consociada con base de alfalfa).

Las vacas eran animales adultos pluríparas, con actividad sexual cíclica, siendo negativas a brucelosis, y en perfecto estado sanitario.

 

Los embriones fueron obtenidos mediante el método no quirúrgico de recolección de embriones, con circuito cerrado de flujo discontinuo. Se emplearon filtros estériles con malla de acero inoxidable de 60-90 µm de diámetro de poro para el filtrado del medio (medio de flushing Sintex^®) recuperado directamente del catéter (durante el lavaje) y vaciándose por su parte inferior, quedando los embriones en el medio filtrado.

El volumen de la solución conteniendo los embriones (40-50ml) se colocó en placas de petri cuadriculadas. Los embriones encontrados fueron transportados a una placa más chica con medio Bovi Pro Holding (Minitube) a fin de lavar los embriones antes de la transferencia. Una vez que los embriones fueron lavados se realizó la evaluación morfológica de los mismos mediante el uso de lupa estereoscópica (40x).

Los embriones transferidos frescos fueron clasificados teniendo en cuenta el estadio de desarrollo en: Mórula, Blastocisto temprano y Blastocisto, y en grados según las normas de la IETS en: G I (excelentes y buenos), G II (regulares) y G III (malos).

La Transferencia de Embriones frescos fue llevada a cabo mediante el método de transferencia no quirúrgica.

El tratamiento de sincronización de celos utilizado para implementar la TETF en las receptoras fue el siguiente:

 

El diagnóstico de gestación se realizó mediante ultrasonografía, a los 30 días de realizada la TETF, utilizando un transductor transrectal de 5 MHz (ecógrafo CHISON VET 500).

 

Se evaluó el efecto del estadio de desarrollo, de la calidad embrionaria y de la época en la que se efectuó la transferencia sobre el porcentaje de preñez; a tal efecto, se utilizó el Proc CATMOD del SAS (1989) y se fijó un nivel de confianza del 95% (α=0,05).

No se observaron diferencias entre los diferentes estadios de embriones transferidos (Tabla 13) y de la calidad embrionaria sobre el porcentaje de preñez (Tabla 14)

A diferencia de lo ocurrido con el estadio de desarrollo y la calidad embrionaria, el porcentaje de preñez fue afectado por la época del año en el que se efectuaron las transferencias. Así, en Otoño-Invierno se obtuvo mayor porcentaje de preñez que en primavera, 71,4% (30/42) vs 41,1% (39/95), respectivamente; P<0,05)

Estadio: Cuando se analizaron los resultados obtenidos según el estadio de desarrollo se observó que hay variedad de resultados citados en la bibliografía, así en algunos casos, blastocistos tempranos y blastocistos resultaron en mayores porcentajes de preñez que mórulas, blastocistos expandidos y blastocistos protruidos (Hasler, 1987, citado por Cutini et al, 2000). Otros autores, obtuvieron mejores resultados con blastocistos que con mórulas; Dochi et al.1998, citado por Cutini et al., 2000 observaron que mórulas y blastocistos tempranos resultaron en porcentajes de preñez más elevados que blastocistos o blastocistos expandidos. Contrariamente, otros autores no han hallado efecto del estadio de desarrollo (Cutini et al, 2000).

Según Cutini et al (2000) los porcentajes de preñez para embriones frescos producidos in vivo y transferidos en estadio de mórula han sido muy variados oscilando entre 48 y 70%. Cuando los que se transfirieron fueron blastocistos, los porcentajes de preñez fueron del 65-70%.

Se debe tener en cuenta que al ser una técnica en la cual es multifactorial una sola variable por separado tampoco nos brinda mucha información.

Calidad: En los trabajos publicados, se registran mayores porcentajes de preñez con embriones con Grados 1 y 2 en comparación con aquellos embriones considerados como de Grado 3.

Según Mollo et al. (2007), en su trabajo en donde analizaron diferentes variables para determinar cuáles eran las que afectaban significativamente al resultado de preñez observaron que la calidad era una de esas variables, ya que el resultado para los embriones de Grado 1 fue de 54,5% mientras que el porcentaje para aquellos embriones de Grado 3 fue de 31,9% (P<0,0001).

En otro estudio realizado por Ake López et al. (1994), obtuvieron los siguientes resultados: con embriones de calidad excelente (63,4%), comparados con los embriones de calidad buena, regular (44,6% y 44,4 %, respectivamente: P>0,05) y mala (22,2 %: P<0,05).

La variación que existe en los diferentes trabajos publicados puede deberse en parte a que la evaluación que se realiza sobre los embriones es subjetiva y en muchas ocasiones cuesta definir de qué calidad son dichos embriones. De hecho el manual de la Sociedad Internacional de Embriones (1998) dice: "Se debe reconocer que la evaluación visual de embriones es una evaluación subjetiva de un sistema biológico y no es una ciencia exacta. Existen además otros factores, como las condiciones medioambientales, la calidad de las receptoras y la habilidad de los técnicos, que juegan un papel muy importante en la obtención de gestaciones a partir de los embriones transferidos. Se ha reconocido también que existen diferentes sistemas usados para "clasificar" embriones, siendo unos mas sofisticados que otros. El criterio para asignar un "código de calidad" en los formatos estandarizados, fueron simplificados para ser "amigables con el usuario".

En el presente trabajo no se observaron diferencias significativas según la calidad del embrión transferido, siendo el bajo número de animales utilizado una de las posibles explicaciones.

Estación del año: Con respecto a la estación del año en que se produjo la transferencia se observó una diferencia significativa que se obtuvo entre Otoño-Invierno y Primavera. Mas allá del estrés térmico de los animales al momento de la transferencia, se ha observado que el estrés térmico afecta mas al momento de la recolección de los embriones que a la transferencia, como en este caso fueron embriones frescos la calidad puede haberse visto afectada y de esta forma influir sobre el resultado final.

Además cabe mencionar que puede haber existido una influencia del balance energético en el cual se encontraban los animales, ya que el año en el cual se realizó el trabajo se produjo una importante sequía hídrica que afectó el establecimiento y la producción de forraje.

En un estudio realizado por Bó et al., 2006, en el cual analizaron las diferentes variables que afectan o no un programa de TE encontraron que los mejores resultados se producían en Verano (165/321) seguidos por Otoño-Invierno (42/86) y por ultimo los producidos en Primavera (194/450) con unos porcentajes de preñez de 51,4%, 48,9% y 43,1% respectivamente. En consecuencia, posiblemente el factor nutricional haya sido una de las causa que expliquen el menor porcentaje de preñez obtenido en el presente trabajo cuando la transferencia se realizó en primavera; no obstante, futuros trabajos deberán clarificar este aspecto.