Dinámica Folicular Ovárica en Vacas Repetidoras: Estudio Ecográfico y Perfil de Progesterona

El objetivo de este trabajo era caracterizar los patrones de desarrollo folicular en 18 vacas repetidoras de celos a lo largo de ciclos sexuales espontáneos. Se llevaron a cabo exámenes ecográficos de los ovarios durante 32 días posteriores a la inseminación, observándose que el patrón de dos ondas era el más frecuente en vacas repetidoras alcanzando un 72,2 p.100, mientras que los de 3 ondas estuvieron presentes en el 16,6 p.100 de los ciclos estudiados. Se registraron ciclos con 1 y 4 ondas, aunque esta condición es muy poco frecuente. El diámetro del folículo ovulatorio fue mayor en ciclos con menos número de ondas (p<0,01); no se detectaron diferencias entre folículos dominantes ovulatorios o anovulatorios. Las concentraciones de progesterona no mostraron diferencias entre los distintos patrones de crecimiento folicular. Se apreció que los ciclos con más ondas foliculares estaban acompañados de intervalos interovulatorios más largos y aparecía en vacas más viejas. El diámetro folicular ovulatorio medio alcanzó 1,78 ± 0,36 cm.. Los resultados permiten afirmar que la dinámica folicular más frecuente en vacas repetidoras es la de dos ondas.

Introducción

La foliculogénesis se define como una serie de procesos recurrentes de reclutamiento, selección, crecimiento, maduración y ovulación durante el ciclo estral de la hembra, regulados por una combinación de interacciones entre hormonas, factores de crecimiento, sistemas de comunicación celular y genes (Roche y Boland, 1991). Hasta que comienza a aplicarse la ultrasonografía a tiempo real, los conocimientos sobre desarrollo folicular eran deducidos indirectamente a través del estudio de patrones cíclicos de gonadotropinas y hormonas esteroides, y/o experimentalmente usando técnicas de medida y recuento de folículos en ovarios de matadero, por laparoscopia después de marcarlos, etc. (Rajakoski, 1960; Dufour et al., 1972; Ireland y Roche, 1983; Fortune, 1993). Gracias al empleo de la ecografía en vacuno se han conseguido establecer los patrones de crecimiento folicular en hembras prepúberes con 2 semanas de edad (Evans et al., 1994), en novillas (Savio et al., 1988; Ginther et al., 1989b; Sunderland et al., 1994); en vacas postparto (Savio et al., 1990), en gestantes (Pierson y Ginther, 1986; Ginther et al., 1989c; Savio et al., 1990; Thatcher et al., 1991; Ginther et al., 1996), en vacas anovulatorias (McDougall et al., 1995), o en vacas que habían recibido tratamientos de sincronización de celos (Sirois y Fortune, 1990; Stock y Fortune, 1993).

Un concepto importante cuando se hace referencia a la dinámica folicular durante el ciclo estral en vacuno es el de ondas foliculares. Algunos investigadores sostenían que el crecimiento folicular era continuo e independiente del ciclo (Donaldson y Hansel, 1968; Dufour et al., 1972; Spicer and Echternkamp, 1986), pero Rajakoski (1960) introdujo este nuevo concepto de onda folicular, afirmando que la población de folículos que emergen en los ovarios durante el ciclo estral se caracterizan por una fase de crecimiento, seguida de una fase estática y final mente ovulan o entran en atresia, con diferentes patrones de desarrollo, sien do los más frecuentes aquellos compuestos por dos (Pierson y Ginther, 1988; Ginther et al., 1989b; Stock y Fortune, 1993; Carriere et al., 1995) y tres ondas foliculares (Ireland y Roche, 1983; Stock y Fortune, 1993; Fortune, 1993; Carriere et al., 1995; Taya et al., 1996). También es posible encontrar ciclos estrales con 1 ó 4 ondas foliculares, aunque no es lo más frecuente (Sirois y Fortune, 1988; Savio et al., 1988; Carriere et al., 1994).

Hasta ahora, no existían trabajos que caracterizaran la dinámica folicular presentada por vacas repetidoras o repeat breeder cows (RBC) a lo largo de sus ciclos estrales espontáneos, posiblemente debido a la dificultad que entraña conseguir un lote de vacas con estas características sin intervenir hormonalmente sobre ellas. Vacas con este síndrome se caracterizan por presentar ciclos estrales repetidos de du ración normal, fracasando la gestación al menos 3 veces seguidas, debido a causas multifactoriales (Lafi y Kaneene, 1988; Bruyas et al., 1993; Pérez, 2001). El conocimiento de la dinámica folicular es particularmente importan te en estos animales, no sólo para comprender mejor los mecanismos ováricos, sino también porque, desde un punto de vista aplicativo, podría ayudar a mejorar los rendimientos de los tratamientos conceptivos. Así mismo, resulta interesante controlar la aparición de más o menos ondas en el ciclo, con objeto de mejorar el manejo reproductivo. Todo ello, lleva a continuar las investigaciones sobre dinámica folicular, y en este trabajo se presentan los resultados obtenidos en RBC de celos, aportando datos acerca de las características de sus ciclos.

Material y Métodos

Se estudiaron un total de 18 vacas Holstein Freisian repetidoras de celos, localizadas en el sur de España (38º 02´ N4º 10´ W), que habían sido seleccionadas en base a su historial reproductivo. Estos animales habían sido inseminados 3 o más veces consecutivas, presentado ciclos de duración normal, tasa media de servicios por concepción de 3,2, su edad oscilaba entre 3 y 10 años, buena condición corporal, al menos un parto y no habían recibido ningún tratamiento hormonal al menos en los 2 ciclos anteriores. La detección del estro se realizó mediante observación diaria de los animales, durante 20 min, 3 veces al día, y fueron inseminadas siguiendo la regla AM/PM.

Cada vaca fue sometida, desde el día en que era inseminada (día 0), a exploraciones manuales y ecográficas de su aparato reproductor cada 4 días, hasta finalizar el día 32. Se empleó un ecógrafo Aloka SSD210 DX, con son da de 5,0 Mhz de barrido lineal, obteniéndose imágenes estáticas mediante una videoimpresora de papel térmico Sony UP850, que se analizaban posteriormente.

Se estudiaron los folículos ovulatorios presentes el día 0 o primer día de estudio (n=18) y los formados en el siguiente ciclo (n=8). Los folículos fueron medidos, indicando su localización (OD/OI), cuantificando su número por ovario, ondas foliculares y valorando las características del folículo ovulatorio. Para el calculo del diámetro medio de las estructuras ováricas se empleó la siguiente fórmula: Ö altura x anchura. Las ondas foliculares y los folículos ovulatorios fueron caracterizados atendiendo al tamaño folicular, día en que se originaban, día en que alcanzaba el máximo tamaño, duración del crecimiento folicular, tasa de crecimiento, duración de la atresia folicular y tasa de atresia.

El CL fue monitorizado por ecografía y se calculó la cantidad de tejido luteal total (½ longitud x ½ anchura x p; si el CL era cavitario, el área de la cavidad no se tenía en cuenta).

Muestras sanguíneas fueron toma das de los vasos coxígeos para determinar los niveles de progesterona plasmática que servirían como indica dores de la funcionalidad de la glándula.

La cantidad de progesterona liberada fue medida los días 0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 y 32, y el área bajo la curva fue obtenida empleando la formula trapezoidal.


Las determinaciones de progesterona en plasma se realizaron mediante RIA en fase líquida con extracción, cuya sensibilidad era 0,016 ng/ml, y los coeficientes de variación intra e interensayo fueron 10,4 p.100 (n=8) y 13,6 p.100 (n=6), respectivamente. Se realizaron análisis de varianza para determinar si el número de ondas foliculares del ciclo estral estaba relacionado con el tamaño folicular máximo, día en que se alcanzó ese tamaño máximo, duración del crecimiento folicular, tasa de crecimiento folicular, duración de la atresia folicular, tasa de atresia y concentración de progesterona. El test de Duncan fue empleado cuando las diferencias entre grupos eran significativas (p<0,05). Se utilizó el programa estadístico SPSS 8.0 for Windows.

Resultados

El folículo ovulatorio fue descrito ecográficamente como una estructura redondeada anecogénica, con bordes muy bien delimitados por una capa hiperecogénica, correspondiente a la pared folicular. El diámetro medio observado en los 26 folículos ovulatorios estudiados fue de 1,78 ± 0,36 cm., oscilando entre 1,2 y 2,5 cm.

Tras la ovulación, comenzaron a crecer nuevos folículos dominantes (FD), apreciándose 2 ondas foliculares en el 72,2 p.100 (13/18) y 3 ondas en el 16.6 p.100 (3/18) de los animales. Res pecto a los ciclos de 1 y 4 ondas foliculares, mostraron una frecuencia de 5,6 p.100 y 5,6 p.100, respectivamente.




Marcadas diferencias (p<0,01) aparecieron en el tamaño medio del folículo ovulatorio (día 0) dependiendo del número de ondas foliculares desarrolladas durante el ciclo estral. Se observó que cuando el tamaño del folículo ovulatorio era mayor, se sucedían menos ondas foliculares en el ciclo: aquellos ciclos con dos ondas tuvieron un diámetro medio igual a 1,88 ± 0,2 cm.; en ciclos de tres ondas, el tamaño fue inferior (1,45 ± 0,2 cm.); la diferencia fue muy marcada en los 2 únicos ciclos sexuales observados con una (2,5 cm.) y cuatro ondas (1,3 cm.).

Las características observadas en los ciclos estrales con diferentes patrones de crecimiento folicular se muestran en las tablas I, II, III y IV.


Según el número de ondas (considerando los ciclos de 1, 2, 3 y 4 ondas), se notaron diferencias significativas con respecto al día de máximo tamaño del 1er y 2º folículo dominante (p<0,01). También fueron patentes las diferencias en la tasa de atresia (p<0,05), experimentadas por el 2º folículo dominante. Se observó que existía significación respecto al día en que se alcanzaba el tamaño máximo en cada una de la ondas (p<0,001). En los ciclos con 3 ondas foliculares, el 1er FD (no ovulatorio) adquiría un tamaño significativamente superior al del siguiente ciclo, mientras que cuando había 2 ondas dicho folículo se mostraba inferior al siguiente (en cuyo caso, ya era ovulatorio).

Cuando se compararon los ciclos con 2 o 3 ondas foliculares, apreciamos que el 1er FD alcanzaba un tamaño similar en ambos casos (1,69 ± 0,35 vs 1,70 ± 0,13 cm.), pero en menos tiempo en aquellas vacas con más ondas (8,0 vs 11,0 días).

Al estudiar el folículo ovulatorio formado al final del ciclo estral, se detectó que emergía más tarde en vacas con ciclos de 3 ondas foliculares (día 15,0 vs día 11,62) y el tamaño ovulatorio era menor, al compararlo con ciclos de 2 ondas foliculares (1,25 ± 0,48 vs 1,71 ± 0,19 cm.).

La edad media en las vacas que presentaban ciclos estrales con 2 ondas foliculares fue inferior (4,38 ± 1,66 años) a las que tuvieron 3 ondas (7,0 ± 2,64 años) (p<0,05).

El ciclo estral fue mucho más corto en la vaca con una sola onda folicular (19 ± 0 días) que en las que presentaba 2, 3 o 4 (22,3 ± 1,89, 23,0 ± 2,0 y 27 ± 0 días, respectivamente), pero no se apreció significación positiva.

Figura 1. Concentraciones plasmáticas medias de progesterona en vacas con una (n=1), dos (n=16), tres (n=3) y cuatro (n=1) ondas foliculares.

 
No se encontraron diferencias significativas entre vacas con 2 o 3 ondas foliculares con respecto a los niveles de progesterona plasmática diaria (figura 1), ni en cuanto al tejido luteal total (figura 2); sin embargo, desde el día 8 del ciclo hubo diferencias significativas (p<0,05) entre ambos patrones en cuanto al área bajo la curva de progesterona (figura 3).

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