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Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6).

Publicado: 21 de agosto de 2020
Por: John Jairo Salazar (MVZ, MSc, Master Ciencias Veterinarias. Inmunopatología. Corporate Poultry Manager) y Lui Miguel Mejía (Laboratorio de Bioestadistica, Universidad del Quindío). Colombia
Resumen

(Modelo matemático de predicción con regresión lineal, con base en la dosis (gr/ton) de β-glucanos (1,3)(1,6).


Lo que ya se ha desmostrado, No hace falta consultarlo con Dios.
Pierre-simón Laplace (1742-1827)

Este estudio investigo el efecto que poseen los mananoligosacaridos y los β-glucanos (1,3)(1,6), al estimular la respuesta inmune celular a nivel gastrointestinal en el Ciego de las aves, Disminuyendo la contaminación por Salmonella spp. Al disminuir el crecimiento de la Salmonella spp en el ciego se disminuye la translocación de dichas bacterias  a órganos internos como el hígado, bazo y oviducto (Yema y albumina) de huevos para el consumo humano. Se realizó una revisión sistemática y meta-análisis, donde se incluyeron los trabajos de investigación realizados entre los años de 1980 hasta  junio del 2020, Se seleccionaron 100 trabajos en inglés y español, de los cuales se eliminaron 84 que no cumplieron con los criterios de inclusión, Se escogieron 16 trabajos de investigación con 28 tratamientos, Se usó programa de software  Stat Graphics Stratus (Excell, 2019), Se usaran los comandos que comparan la prueba con MULTIPLES RANGOS, Para prevalencias de Salmonella(%), de grupos intervenidos con β-glucanos (1,3)(1,6), Grupos control sin β-glucanos en el ciego, La prueba de significancia (P<0.05), validándolo con la prueba de Tukey, y se construyó la ecuación de regresión lineal correspondiente, los resultados arrojados fueron  diferencias entre las prevalencias  de aves  contaminadas en el ciego, del grupo tratado con β glucanos (1,3)(1,6) Vs las del grupo control no tratado, El hallazgo fue una media de 29.60 +/- 4.84 DS  del grupo intervenido, Vs 62.52 +/- 47.6 DS para el grupo control, con un valor de P=0.0000, donde se concluye que se presenta una diferencia altamente significativa a favor del grupo donde se utilizaron los β glucanos (1,3)(1,6), Se realizó la prueba estadística CONTRASTE DE LAS DIFERENCIAS, para confirmar la diferencia porcentual entre el grupo tratado y el grupo control, el cual arroja un resultado  a favor de  usar β glucanos (1,3)(1,6) disminuye en un 32.93% +/- la contaminación por Salmonella spp en el ciego de las aves con un límite de variación del 13.3%, Nuestros resultados indican que se pueden usar β-glucanos (1,3)(1,6), para disminuir la colonización por Salmonella spp en el ciego de las aves, que consecuentemente  disminuirán el traspaso vía sistémica a otros órganos y especialmente al el huevo para consumo humano.

Palabras Claves: β glucanos, Mananoligosacaridos, Salmonella spp


1.0 Introducción
La Salmonella spp está clasificada como una bacteria Gram-negativa, Se caracteriza por ser anaeróbica facultativa, La Prevalencia mundial de la Salmonella enteritidis (SE) se ha calculado en aproximadamente 100 millones de casos por año[1], La incidencia anual  se estima  en 5 de cada 100.000 personas en el año 2.000, y el 1.7% está representado por niños positivos a Salmonella spp con sintomatología de una diarrea aguda[2], Actualmente la Salmonella spp es la segunda causa después del Campylobacter spp de causar toxinfecciones alimentarias en Europa (64.1% por Campylobacter spp, y 20.1% por Salmonella spp)[3], Dentro de esa distribución se observó una fuerte evidencia de que los orígenes de esas zoonosis eran causadas  por productos provenientes de la industria avícola, En el ítem huevos y sub productos de los huevos y productos de panadería); Para Salmonella spp 45.6% y por Salmonella enteritidis 47.2%[3], Confirmando lo anterior que de aproximadamente el 50% de esos casos, el causante es el huevo contaminado por Salmonella spp.
El CDC (Centro de Diagnóstico y Control de Enfermedades), En Estados Unidos, Reporto hasta junio de 2020, 1.3 millones de infectados, 26.500 hospitalizaciones y 420 muertes.
Tabla Nº 1 Riesgo Relativo para Salmonella spp en hospitales según la edad.
Factor
Nº Pacientes
Riesgo
Nº Casos
Confirmados
Tasa de
Ataque (%)
Riesgo Relativo
Intervalo de Confianza 95%
Edad (Años)
 
 
 
 
 
1-4
4
2
50
2.5
0.86-6.99
5-18
25
9
36
1.8
0.94-3.35
19-44
113
23
20.4
1.0
Referencia
45-74
448
130
29
1.4
0.96-2.11
> 75
358
105
29.3
1.4
0.97-2.15
 
 
 
 
 
 
Tipo de ataque
 
 
 
 
 
Agudo
150
38
25.3
1.0
Referencia
Crónico
812
236
29.1
1.2
0.85-1.54
Telzak et al., 1990[4]                                                                                                                  (P< 0.05)
1.1  Entendiendo la Epidemiologia de la Salmonella spp en el huevo
Investigaciones Epidemiológicas implican a el consumo de huevos contaminados provenientes de ponedoras comerciales infectados  con Salmonella enteritidis (SE) como causantes de brotes como el reportado por Telzak et al 1,990 ; Mishu et al., 1,991[4-5].
En la investigación referenciada por Telzak et al., 1990, En la cual utiliza la epidemiologia como herramienta Prospectiva, Usando el Riego Relativo como medida  para informar que por cada adulto entre 19 y 44 años  que consuma huevos crudos contaminados con Salmonella enteritidis, la  posibilidad de  que se infecten   niños menores de 4 años, Es 2.5 veces más factible(Ver Tabla No.1).
1.2  Salmonella enteritidis en los huevos
Se ha observado que tanto en gallinas infectadas de forma natural como experimental, Los huevos de dichas gallinas son positivos tanto en la yema como en la albumina  a Salmonella enteritidis[6].
Gast et al.,1990 [6], Demostraron que luego de infectar aves vía  oral y ponerlas en contacto con aves sanas, Los huevos se contaminaron con Salmonella enteritidis en un periodo de 7-11 días post inoculación[6], Este hecho demuestra la traslocacion de la Salmonella spp, desde el intestino(Ciego) a los ovarios(Yema y albumina). La investigación sobre el argumento de dicha traslocacion está demostrada en que aves infectadas, contaminaron los huevos  en un 15% con SE  dos semanas post-inoculación[7], Y dentro de esa contaminación vale la pena introducir el concepto de ¿ Cuál es la cantidad de bacterias para producir esta translocación de SE a los huevos , que luego irán a el consumo humano?, Humprey et al.,1190 [8], Demostró que una dosis de 104 ucf/ml en aves desafiadas oralmente, Es la cantidad  mínima necesario para producir la contaminación del huevo, Al realizar un contraste introductorio se demuestra que al infectar aves con SE al segundo día  post-infección, la cantidad de bacterias en el  hígado es 4 log 10 (10.000 ucf/g) y en el ciego al segundo día es de 800 mm-2(ver Figura No.1)[9].
Figura No.1  (a) Colonización de Salmonella enteritidis en bazo(),  hígado(Δ), (b) Numero de Salmonella enteritidis en el ciego() de las aves.  Immerssel.,V. F 2002 [9]. 
(a)       Días Post-desafío                                              (b)   Días post-desafío   
1.3  Patogénesis de la Salmonella spp
Las aves usualmente  se contaminan  vía oral al consumir las bacterias provenientes de material contaminado(materia primas o aguas), Además la transmisión vertical es considerada como fuente de infección[10], Se sabe que la SE persiste en los órganos(Bazo, hígado y vesícula biliar), y en el intestino predominantemente coloniza el ciego[11], La patogénesis  está dividida en dos fases, La fase Intestinal y la fase de infección sistémica, Ambas son reguladas por la patogenicidad de los genes  de los serotipos de Salmonella island(SPI-1-SPI-2)[11].

1.3.1    Patogénesis de la fase intestinal de la Salmonella spp[12]
  1. La SE interactúa con los enterocitos integra dentro de ellos  sus proteínas  SOP en el citoplasma celular  por medio de la vía SPI-1.
  2. Las proteínas SOP inducen la aglutinación de la membrana de los eritrocitos y facilitan la invasión por Salmonella spp.
  3. Los SE intracelulares residen dentro de las VESICULAS que están unidas a la membrana y posiblemente continúan la traslocacion  en un proceso mediado por SPI-2 de extracelular a intracelular, el cual aumenta la replicación de la SE  en esas vesículas.
  4. Las proteínas SOP-B, afecta el efecto de la señalización del inositol fosfato, que bloquea el cierre de los canales de cloruros, el cual influye en el transporte de electrolitos y en la secreción de fluidos.
  5. Los enterocitos infectados con SE secretan quimosinas  y Prostaglandinas, desencadenando una fuerte inflamación.
  6. Las células epiteliales infectadas con SE , liberan un quimioatrayaente inducido por bacterias o PEEC, atreves de la membrana apical del enterocito, esta molécula actúa para estimular la migración de los polimorfo nucleares(Macrofagos) transepiteliales entre los enterocitos , hacia la luz intestinal.
  7. Luego se produce una infiltración inflamatoria de las células que contienen SE.
  8. Los Enterocitos infectados con SE se extruyen o desprenden hacia la luz intestinal, dando como resultado una pérdida de mucosa y daño en las vellosidades intestinales, deteriorando la superficie de absorción.
  9. Algunas de las células infectadas, migran y se drenan vía vasos linfáticos, generando la forma sistémica de la enfermedad, y de esta manera coloniza los diferentes órganos, especialmente bazo, hígado y aparato reproductivo[13].
Los síntomas clínicos incluyen: Aves deprimidas, Anorexia, Somnolencia, Decaimiento, Deshidratación, Respiración dificultosa, Plumas erizadas, Debilidad, Adherencia de heces en la cloaca, Y  diarrea que cursa de color blanco a verdoso[14].
Las lesiones macroscópicas incluyen: Esplenomegalia, con bazos  moteados de color blanco, Hepatomegalia e inflamación  con focos necróticos, En algunas aves pueden presentar nódulos blanquecinos en el pericardio y miocardio, En el ciego se puede presentar tiflitis con contenido caseoso, y se observa una franca perdida de la capa mucosa del intestino[14].
Se puede encontrar Regresión Ovárica, Algunas aves presentan óvulos quísticos, deformes y descoloridos, y se presenta un exudado caseoso en el oviducto[14].
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 3
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 4
Imagen No.1 (a) Peritonitis inflamatoria S.Gallinarum, (b) Hepatomegalia, Inflamación con focos necróticos,(c) Esplenomegalia color moteado, (d) Desprendimiento de mucosa, (e) Esplenomegalia, (f)Ovoperitoninis inflamatoria. John Jairo Salazar MVZ. Msc. Álbum fotográfico Engormix 2019.
 1.4  β-glucanos (1,3)(1,6)(Sacharomices cerevisiae) 
Los β-glucanos son polímeros de glucosa, derivados de las paredes de las levaduras, de las bacterias o algunos hongos, también de los granos de los cereales como la avena y la cebada[15]. Los β-glucanos que provienen de levaduras y de fuentes fúngicas están conformados por residuos del grupo píranosil, unidos por ramificaciones largas 1,3 en mayor cantidad y 1,6 en menor cantidad [15]. Los β-glucanos de las levaduras (YCG), extraídos como polisacáridos de la pared  Sacharomices cerevisiae han sido ampliamente estudiados y demuestran que poseen una actividad inmunomoduladora, relacionada con los receptores   de reconocimiento similares (TLRs), mejorando la respuesta inmune contra los agentes infecciosos [16-17]. En estudios in vitro e in vivo se demostró que los β-glucanos(1,3)(1,6) provenientes de la pared de Sacharomices cerevisiae tienen un efecto benéfico sobre la inmunidad innata y la inmunidad humoral aun en animales desafiados y no desafiados[18-19], El intestino provee un mecanismo de defensa natural contra la mayoría de los patógenos gastrointestinales, está compuesto de criptas revestidas de vellosidades intestinales, mucus, El Epitelio intestinal está compuesto por 5 clases de células, Enterocitos que se encargan de absorción de nutrientes, Células caliciformes que producen el mucus,  Células de Paneth, Células entero endócrinas y Células madres[20], En experimentos de campo se observó que al desafiar aves con Salmonella thyphimurium les causo una  disminución de la altura de las vellosidades, y se presentó un cambio negativo,
En la relación entre la profundidad de la criptas y las vellosidades[21], En aves desafiadascon Salmonella thyphimurium y suplementadas con ß-glucanos(1,3)(1,6), Se observó que el número de células globet aumento en el yeyuno e igualmente aumento la longitud de las vellosidades intestinales[21], El punto sobre la justificación de usar los β-glucanos(1,3)(1,6) provenientes de la pare de levadura Sacharomices cerevisiae radica en la capacidad que tiene de estimular la fagocitosis por los Macrófagos. Los Macrófagos producen una enzima denominada, iNOS (Óxido Nítrico Sintetasa),esta enzima resulta de la reacción del óxido nítrico con aniones de super óxidos que generan derivados tóxicos (superoxidos) los cuales permiten a los macrófagos eliminar varios tipos de patógenos incluidos la Salmonella spp, Cox et al., (2010)[22],Reporta que un aumento del iNOs responde al aumento en la suplementación con ß-glucanos(1,3)(1,6) que aumenta la capacidad destructiva de los macrófagos.
Este argumento fue corroborado en 2005 al medir El Índice Fagocitico (IP: Numero de Salmonellas Spp / Numero de bacteria fagocitadas), se demostró que al alimentar aves desde 1 día de nacidas por 4 días comparadas con el grupo control, arrojo que el índice de capacidad fagocitado por M? en aves alimentadas con ß-glucanos(1,3)(1,6), fue 644.1+/- 57 vs. 174.54+/-44, del grupo control, La proporción representa un 27% más de capacidad para  eliminar salmonellas spp. La otra característica  de los ß-glucanos(1,3)(1,6)  es la capacidad que generar anticuerpos locales tipo IgA, El Tracto gastrointestinal de las aves, es una importante interface entre el medio ambiente externo y la parte interna de su cuerpo, la inmunidad gastrointestinal es la primera línea de defensa contra varios patógenos, en las aves el (GAL), o sistema inmune asociado a el intestino, que incluye Tonsilas Cecales y Placas de Peyer,  son conocidos como lugares de agregados linfocitarios, Las estructuras del GAL inducen una respuesta inmune, incluyendo la producción de Inmunoglobulina A (IgA), desde los linfocitos B. La IgA se encuentra en la bilis, en las mucosas (Intestino), y su función es neutralizar virus y toxinas bacterianas que evitan la colonización en las mucosas[17],
En lotes de ponedoras comerciales  desafiadas con Salmonella Thyphimurium  se incrementó el nivel de IgA, estos niveles de inmunoglobulina siempre fueron más altos en aves que recibieron dietas suplementadas  con β-glucanos, Lo preponderante de esta investigación es que  se redujeron los niveles de infiltración por Salmonella Thyphimurium en el Ciego y el hígado [17-18-21].
La Gran mayoría de los estudios se centran en la capacidad que poseen los ß-glucanos(1,3)(1,6) de generar una actividad inmunomoduladora de la repuesta inmune celular, Especialmente al darle potencia  a la capacidad fagocitica a los macrófagos, Y además de aumentar la capacidad de producción  de anticuerpos tipo IgA, que disminuyen la población de Salmonellas spp en la luz intestinal, Por lo tanto el objetivo de esta investigación de acuerdo a los dos conceptos anteriores, Es la de determinar la capacidad que tienen los  ß-glucanos   de disminuir la población de Salmonellas spp en el Ciego que eviten la traslocacion al oviducto vía transmisión vertical y contaminen los huevos que van para el consumo humano.
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 5

Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 6

Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 7
Imagen No. 2 (a)Levadura activa seca (b)Pared de levadura (c-e) B-glucanos(1,3)(1,6) Sacharomices cerevisiae 50mg (d)B-glucanos(1,3)(1,6). (f) HPLC cromatografía Liquida de alta resolución Mano(mananos) GlcN( Glucanos). Fotografías propiedad Grupo Levapan-Colombia-NANOTEC Sena  2019.
2.0 Materiales y métodos 
2.1 Revisión de literatura
Se realizó la búsqueda electrónica de literatura entre el periodo comprendido 1980-2020, para el trabajo de investigación: Revisión sistemática y meta-análisis respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp  en el ciego de las aves, impacto del uso de  MOS(mananoligosacaridos), ß-glucanos(1,3)(1,6), Se incluyeron todos los trabajos escrito en español e inglés, en las bases de datos NBCI(PMC),Us library of medicine national institute, PubMed, Science Direct, Poultry Science, los estudios seleccionados se le aplico el modelo de extracción de datos Quality Consort[24], Se usaron los siguientes términos y palabras: [(salmonella*)AND(Layer* OR Laying Hens*OR Hens* OR Chikens* OR Broiler Chikens*)AND(ß-glucanos(1,3)(1,6)* OR Glucans* OR Manaoligosacarides*)].
Los criterios de eligilibilidad de la búsqueda primaria para ser incluidos estaban restringidos obligatoriamente a cumplir con las siguientes características: Autor y fecha de publicación, Serotipo de salmonella, Dosis de desafío expresada en cfu/g o cfu/ml, Numero de aves tratadas con ß-glucanos, Numero de aves del grupo control, Dosis en % del producto usado, y Duración del tratamiento.
2.2 Análisis estadístico
Se medirá el análisis de varianza  de 16 estudios(ANOVA) para  28 tratamientos seleccionados con la pregunta para la hipótesis nula (H0): El uso de β-glucanos (1,3)(1,6), Disminuye la colonización en el ciego en aves desafiadas con Salmonella spp.
2.3 Modelo Estadístico 
Se realiza la construcción de una tabla de análisis de varianza para prevalencias, Con el diseño de un solo factor completamente al azar, El programa de software utilizado es Stat Graphics Stratus (Excell, 2019), Se usaran los comandos que comparan la prueba con MULTIPLES RANGOS, Para prevalencias de Salmonella(%), de grupos intervenidos con β-glucanos (1,3)(1,6), Grupos control sin β-glucanos en el ciego, La peueba de significancia (P< 0.05), validándolo con la prueba de Tukey.
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 8

3.0 Resultados
 
La búsqueda realizada arrojo un total de 101 trabajos de investigación, discriminados de la siguiente manera: 15 de Revision científica, 23 investigaciones que tienen grupo de intervención y grupo control, 4 correspondieron a libros, 15 a capítulos delibro, 17 a publicaciones en Poultry Science, 10 a publicaciones en Animal feed Science.
Se eliminaron 85 trabajos por que no tenían grupo de intervención o grupo control o carecían de desviación estándar o error estándar para hacer la validación estadística, Seleccionado 16 trabajos de investigación que arrojaron 28 tratamientos diferentes(ver tabla No. 2)(ver anexo tabla para cálculos
Tabla Nº 2.
Tabla Nº 2.  Prevalencia de Salmonella spp. En grupos tarados con β-glucanos (1,3)(1,6) Vs el grupo control. Tukey
 
% Prevalencia Salmonella
Valor P
β-glucanos (1,3) (1,6)
29.60 +/- 4.85
P=0.0000
Grupo Control
62.52 +/- 4.77
 
Contraste-Diferencias
32.93
 
 (P < 0.05)
Tabla Nº 3. Análisis de Varianza para Salmonella (%) - Suma de Cuadrados Tipo III
Fuente
Suma de Cuadrados
Gl
Cuadrado Medio
Razón-F
Valor-P
EFECTOS PRINCIPALES
 
 
 
 
 
A: Dosis Glu-Tto(%/Ton)
14899,7
1
14899,7
23,46
0,0000
RESIDUOS
33655,1
53
635,002
 
 
TOTAL (CORREGIDO)
48554,8
54
 
 
 
Todas las razones-F se basan en el cuadrado medio del error residual
 Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 11
Grafica Nº 1 Prevalencia de Salmonella spp en el ciego de las aves tratadas con β glucanos (1,3) (1,6).Presente (β glucanos), Control (grupo no tratado), Salmonella (%), Prevalencia de Salmonella en el ciego de las aves.
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 12
Grafico Nº 1.1 Prevalencia de Salmonella spp  en ciego de las aves tratadas con β glucanos(1,3)(1,6) Vs Control *. (P=0.000)
La prueba de MULTIPLES RANGOS, para analizar las diferencias entre las prevalencias de aves contaminadas en el ciego, del grupo tratado con β glucanos (1,3)(1,6) Vs las del grupo control no tratado, arroja una media de 29.60 +/- 4.84 DS  del grupo intervenido, Vs 62.52 +/- 47.6 DS para el grupo control, con un valor de P=0.0000 (Ver Grafica No. 1) (Ver tabla No.2 y No. 3), donde se concluye que se presenta una diferencia altamente significativa a favor del grupo donde se utilizaron los β glucanos, Se realizó la prueba estadística CONTRASTE DE LAS DIFERENCIAS, para confirmar la diferencia porcentual entre el grupo tratado y el grupo control, el cual arroja un resultado  a favor de  usar β glucanos (1,3)(1,6) disminuye en un 32.93% +/- (ver tabla No. 2)la contaminación por Salmonella spp en el ciego de las aves con un límite de variación del 13.3%. 
Regresión lineal (Prevalencias  de Salmonella spp en %)
Variable dependiente: Salmonella (%)
Variable independiente: Dosis Glu-Tto (%/Ton)*
Raíz Cuadrada de X: Y = a + b*sqrt(X)
Tabla Nº 4 Coeficientes
 
Mínimos Cuadrados
Estándar
Estadístico
 
Parámetro
Estimado
Error
T
Valor-P
Intercepto
51,1482
4,29891
11,8979
0,0000
Pendiente
-26,5925
10,5591
-2,51845
0,0148

Tabla Nº 5 Análisis de Varianza
Fuente
Suma de Cuadrados
Gl
Cuadrado Medio
Razón-F
Valor-P
Modelo
5189,58
1
5189,58
6,34
0,0148
Residuo
43365,2
53
818,211
  
Total (Corr.)
48554,8
54
   
Coeficiente de Correlación =                       - 0,326927
R-cuadrada =                                               1 0,6881 porciento
R-cuadrado (ajustado para g.l.) =                 9,00297 porciento
Error estándar del est. =                                28,6044
Error absoluto medio =                                 23,6461
Estadístico Durbin-Watson =                       1,19372 (P=0,0006)
Autocorrelación de residuos en retraso 1 =  0,397193
La salida muestra los resultados de ajustar un modelo raíz cuadrada-X para describir la relación entre Salmonella (%) y Dosis Glucanos-Tto (%/Ton).  La Ecuación del modelo ajustado es:Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 13
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 14
Grafica Nº 2 Grafica de regresión lineal (Correlación dosis de betaglucanos Vs Presentación de salmonella spp  % en el ciego de las aves.
La ecuación de predicción es válida, ya que el valor de P=0.0148 que define que existe una diferencia altamente significativa al disminuir la salmonella cuando se usan β glucanos (1,3)(1,6) en el alimento para disminuir la colonización de esta bacteria en el ciego de las aves (0,0148< 0.05).
Aplicando la Ecuación de Predicción, la presencia de Salmonella dependiendo de la dosis para 5 escenarios es: 
Tabla  6 Escenarios de contaminación con salmonella en el ciego dependiendo de la dosis de β glucanos (1,3)(1,6).
Dosis en (%)
Gramos de β glucanos
Salmonella(%)-Ciego
0.05
500
45.20
0.1
1000
42.73
0.2
2000
39.25
0.5
5000
32.00
1.5
10500
18.5

4.0 Conclusiones
Se ha demostrado por muchos autores que se produce una translocación de Salmonellas enteritidis desde el ciego , hacia el hígado, El bazo, Los ovarios, Causando una fuerte ovoperitonitis[21],Y una de las consecuencias más relevantes es la contaminación vertical del huevo que va dirigido  al consumo humano[25], Usar β glucanos (1,3)(1,6) ha demostrado que disminuye esa capacidad de translocación de esas Salmonellas hacia otros órganos, especialmente el hígado y el oviducto, debido a su fuerte capacidad de aumentar la POTENCIA en la fagocitosis realizada por los macrófagos que impiden la colonización [17-18-19]; Esta investigación presenta una diferencia altamente significativa(P=0.0000) a favor de usar  β glucanos, los cuales  disminuye la colonización en el ciego de las Salmonellas spp en un 32.93%.
 Es imperativo tener en cuenta que dentro del análisis del modelo estadístico se presenta una variación alta entre los rangos de inhibición de la colonización bacteriana que está dada para el grupo intervenido con β glucanos donde la media es 29.05(%) +/- 9.3 DS con un rango (19.62 (%) – 38.46 (%)), y para el grupo control la media fue de 62.52(%) +/- DS 10.21 con unos rangos (52,5(%)  - 72,6(%)), Lo anterior tiene una posible explicación debido a la alta heterogeneidad entre los trabajos seleccionados, El posible origen de dicha variación puede estar en la dosis usada de β glucanos (1,3)(1,6), en este trabajo podemos observar que se usan dosis tan bajas como la refenciada por Rebolledoet al., 2009, de 100 gramos por tonelada(6,1mg/kg) por ave, a dosis de 500 gramos por tonelada (25 mg/k) por ave, como la referenciada por Mounthmatzouris et al., 2015, Esta conclusión confirma que para que se produzca un efecto inmunomodulador en el intestino y en la inmunidad celular del ave que cause un efecto negativo a las bacterias gramnegativas , debemos usar una dosis de 25mg/kg por ave por 21 días, como se demostró por Salazar.J.J et al., 2019[17].
El avance en las tecnologías de la nutrición aviar, Justifica cada día mas desarrollar las nuevas tendencias para hacer más eficientes dichos proceso, por eso urge  a la INMUNONUTRICION entender muy bien el concepto de que sustancias si cumplen el precepto de Inmunomoduladores, Por las dos razones anteriores hemos decido dentro de la estadística construir un modelo de Regresión Lineal, que correlacione fuertemente la disminución de la invasión de la Salmonella spp con la dosis usada, esta ecuación sugiere que usar 1.500 gr de betaglucanos disminuye hasta el 18% la presencia de salmonella spp. En el ciego de las aves.
5.0 Discusión 
El termino “Translocación” se usa para definir el paso de bacterias patógenas desde el tubo gastrointestinal hacia los órganos internos[27], Se han identificado tres mecanismos para que esto suceda (1) Crecimiento excesivo de las bacteria patógenas en el tubo gastrointestinal, especialmente en el ciego (Salmonella spp) (2), Deficiencias en la respuesta del sistema inmune del hospedador, (3), Daño en el tejido intestinal que disminuye la capa de mucosa y aumenta la permeabilidad intestinal[18-27], Remus et al., 2014[28] demostró  la contaminación intestinal bacteriana  que deteriora el crecimiento de las aves está distribuido de la siguiente manera Clostridium spp 40%,  Escherichia coli 10% y salmonella Spp 29.9%, con base en este argumento demostramos que es viable usar inmunomoduladores como los β glucanos (1,3)(1,6 ), que disminuyeron la población de Salmonellas en un 32.93% y  que activen la respuesta inmune celular  disminuyendo el efecto de translocación bacteriana hacia el hígado e oviducto que contaminen con Salmonella spp los huevos destinados al consumo humano.
Dentro de los cambios patológicos que impactan el tejido gastrointestinal, es el daño causado a las células que producen el “Mucus intestinal”, que además contiene inmunoglobulina A (IgA) que ejercen un papel de protección local frente a desafíos bacterianos,  Salazar et al., 2019 [17], Demostró  que al usar β glucanos (1,3)(1,6) a una dosis de 25mg/k , por un periodo continuo de 21 días la secreción de IgA pasaba de 300 ng/ml a 2200ng/ml, Se justifica entonces disminuir la presencia de Salmonellas spp en el ciego que causen ese daño en el tubo gastrointestinal, inferimos en esta investigación por la prueba de múltiples rangos   que el usar los β glucanos,  se disminuye la población de Salmonellas spp de 62.5% a 29.6 % (P=0.0000), que contribuye a disminuir la translocación bacteriana de Salmonella spp.
La Ciencia debe usarse como herramienta para mejorar el futuro de la salud humana y animal, es por eso que integramos en este trabajo LA ECUACION DE PREDICCION (Regresión Lineal), que determino cual es la dosis en % por tonelada de alimento, para ir disminuyendo la población Salmonella en el ciego de las aves(Ver grafica No.2)
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 15
Por lo tanto : En referencia a los trabajos realizados por el grupo de investigación podemos concluir que  “Al usar β glucanos (1,3)(1,6) a una dosis de 25mg/k , por un periodo continuo de 21 días  disminuye la población de Salmonellas spp , La secreción de IgA se estimula a un aumento de 300 ng/ml a 2200ng/ml, y se disminuye  de 62.5% a 29.6 % (P=0.0000),  La translocación bacteriana de Salmonella spp.” Queda como herramienta la Ecuación de Predicción. 

Epilogo: Modelo de investigación de translocación de Salmonella spp desde el ciego hasta el huevo de mesa.
Después de haber revisado, los aspectos más importantes de la inmunología gastrointestinal frente a los β glucanos (1,3)(1,6), Y los efectos beneficiosos que ellos dan , y si bien sabemos los cambios inmunológicos de las aves modernas es necesario realizar un trabajo de investigación que se conduzca desde que el ave se contamina con Salmonella spp en el ciego y seguir la patogenia de invasión sistémica en hígado y bazo, que desencadena luego por transmisión vertical a la yema y la albumina y poder dar claridad de cómo solucionar estas vías  de contaminación, como lo demostramos en este trabajo.
Respuesta dinámica de la disminución de Salmonella spp en el ciego de las aves, impacto del uso de mananoligosacaridos (MOS) ß-glucanos(1,3)(1,6). - Image 16 
Huevos que posiblemente estén contaminados con bacterias.
Base de datos que contienen los 28 estudios y el simulador de la ecuación de predicción con la que se corrió el software para el Meta análisis.(Interés general)

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Autores:
John Jairo Salazar. MVZ. MSc
Biotecno
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