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Longitud de las vellosidades intestinales y cantidad de Clostridium perfringens en pollos parrilleros de 6 semanas de edad

Publicado: 5 de enero de 2016
Por: Guillermo García Hernández, Néstor Ledesma Martínez, Odette Urquiza Bravo. Departamento de Medicina y Zootecnia de Aves, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México, UNAM
INTRODUCCION
Los clostridios, al ser parte de la biota intestinal nativa de intestino grueso y sacos ciegos, son relativamente inocuos a menos que existan factores predisponentes como la coccidiosis, la impactación parcial del intestino grueso por ingestión de cama, grano o ambos, o la falta de provisión de piedras insolubles (grid), los cambios en la dieta o también la restricción alimenticia prolongada. Además el tamaño de la partícula del alimento menor a 4 mm puede predisponer al crecimiento de Cp, la formulación alimenticia basada en cereales como el trigo, centeno o cebada, dietas con alto contenido de harina de pescado, proteína con altos niveles de energía y el uso de proteínas de baja digestibilidad favorecen el crecimiento de Cp.
Por otro lado se ha descrito que los agentes inmunodepresores como las micotoxinas y largos periodos de retiro del coccidiostato, también favorecen la disbiosis y por lo tanto la producción de sus toxinas. Clostridium perfringens (Cp) tipo A y C es el agente etiológico de la enteritis necrótica (EN) que es una enfermedad enterotoxémica que afecta principalmente al pollo parrillero de 4 a 8 semanas de edad o mayores, aunque también se ha descrito en pavos, patos y aves silvestres. La vía de transmisión es horizontal. El Cp puede estar en la caseta, suelo, insectos, aves silvestres, roedores y alimento contaminado. La EN comenzó a observarse con mayor frecuencia en Europa debido a la prohibición del uso de antibióticos promotores de crecimiento (APC), ocasionando pérdidas por más de 2 billones de dólares anualmente a la industria avícola mundial, por decomiso de las canales al tener menor tamaño corporal y por las lesiones intestinales y hepáticas (hasta 4% y 12% respectivamente).
La EN tiene 2 presentaciones, la subclínica, en la que las aves mueren sin haber mostrado ningún signo y la clínica en la cual las aves se reúnen en grupos, muestran el plumaje erizado, deshidratación, depresión, anorexia, se encuentran decúbito esternal, con pérdida de peso disminución en la velocidad de crecimiento y aumento de la conversión alimenticia y finalmente sobreviene la muerte. La mortalidad y la morbilidad puede llegar hasta 10% en parvadas sin tratamiento. El tiempo de incubación varía entre 7 a 10 días.
Las lesiones macroscópicas que pueden ser observadas son: La mucosa intestinal presenta necrosis coagulativa lo que da una apariencia aterciopelada también conocida como toalla turca y puede estar completamente reemplazada por membranas diftéricas o pseudomembranas de color gris-café o amarillo- verde y restos celulares. El intestino puede encontrarse friable y distendido con gas. El hígado presenta focos necróticos de 2-3 mm en la superficie, aumento de tamaño y palidez. La vesícula biliar puede estar aumentada de tamaño, delgada y con contenido claro y viscoso, o inclusive puede romperse y causar peritonitis. Por otro lado, las lesiones microscópicas que se han descrito es que inicialmente se encuentran en el ápice de la vellosidad y se caracterizan por pérdida del epitelio, edema, necrosis coagulativa y colonización bacteriana de la lámina propia expuesta, infiltrado heterofilíco y de células mononucleares. Las lesiones secundarias se pueden apreciar en las criptas, capa submucosa y muscular del intestino. La mucosa intestinal presenta abundante fibrina mezclada con restos celulares adheridos a la mucosa necrótica dentro de este material se pueden observar bacterias Gram positivas. 
Aunque la cantidad de Cp detectada en intestinos de los Pollos parrilleros variable, no existen estudios precisos en México que demuestren cual es la cantidad normal de dichos microorganismos así como la relación que guarda con el tamaño de las vellosidades intestinales.
Por lo anterior, el objetivo del presente estudio fue determinar la longitud de las vellosidades intestinales y la cantidad de Clostridium perfringens en pollos parrilleros de 6 semanas de edad aparentemente sanos, alimentados con una dieta comercial mexicana para conocer si existe relación entre estas variables.
 
MATERIAL Y METODOS
Se utilizaron 40 pollos de engorda estirpe Cobb 500 de 6 semanas de edad, con disponibilidad de agua limpia y fresca ad libitum. Las aves fueron alojadas en una caseta de ambiente natural desde el primer día de edad hasta las seis semanas de edad en que fueron sacrificadas. El alimento proporcionado fue con base Sorgo (65 %) Soya (25 %) y bacitracina (0.030%) como antibiótico promotor del crecimiento a libre acceso, hasta el final de la prueba. Diseño experimental.- El estudio se llevó a cabo en una de las casetas del Centro de Enseñanza, Investigación y Extensión en Producción Avícola (CEIPAv), de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia (FMVZ) de la Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), formando dos grupos: 1) PE sacrificados con la toma de muestras y procesado de las mismas directamente en el CEIPAv y 2) PE sacrificados en la sala de necropsias de Departamento de Medicina y Zootecnia de Aves (DMZA) de la FMVZ UNAM, con procesamiento de las muestras en el mismo sitio.
 
Estudio Bacteriológico
Para la obtención de las muestras se amarraron 5 cm de la última porción del yeyuno junto con 5 cm de íleon de ambos grupos por separado en condiciones asépticas y se procesaron de la siguiente manera: Un gramo de cada muestra se maceró por separado y se depositó en 9 ml de Solución Amortiguadora de Fosfatos (PBS) estéril, para realizar diluciones décuples de 10-1 hasta 10-6. Posteriormente se sembraron 3 gotas de 20 μl de cada dilución en agar gelosa sangre y se incubaron durante 24 a 48 hrs a 37oC en condiciones de anaerobiosis.*
Una vez obtenidas las colonias con hemólisis doble se realizó la identificación por medio de pruebas bioquímicas glucosa, maltosa lactosa, sucrosa, indol, evaluación de la motilidad y leche tornasolada, además de observar morfología por tinción de Gram previamente.
 
Estudio Histológico
De los mismos pollos utilizados en el estudio bacteriológico se tomaron 20 muestras de yeyuno y 20 muestras de íleon de ambos grupos, con un tamaño de 1 cm, obteniendo la muestra de la parte caudal del yeyuno, y la parte craneal del íleon de las muestras tomadas para bacteriología, introduciéndose en frascos con formalina amortiguada al 10% para su procesamiento y corte. Se realizó un corte transversal de los segmentos de intestino obtenidos. Una vez obtenidas las laminillas se midieron 30 vellosidades intestinales de cada muestra, a partir de la cripta hasta el ápice de la vellosidad con un microscopio de luz∗∗∗∗∗∗ con el objetivo 4x y con el empleo de una cámara para la proyección de imágenes de microscopia en directo de alta resolución∗∗∗∗∗∗∗∗∗ y un software especializado[1] (Fig. 1).
 
Análisis estadístico
Para la comprobación de la hipótesis se utilizó la prueba de Coeficiente de correlación simple de Pearson. 
Longitud de las vellosidades intestinales y cantidad de Clostridium perfringens en pollos parrilleros de 6 semanas de edad - Image 1

RESULTADOS
Estudio bacteriológico
Los resultados del análisis bacteriológico de las aves a las 6 semanas en los dos grupos no mostraron algún agente patógeno significativo en ninguno de los órganos.
En el estudio del grupo 1 no fue aislado Clostridium perfringens en ninguna de las aves, únicamente fueron encontradas bacterias de biota intestinal (Staphylococccus aureus y Actinomyces sp). En el grupo 2 fue aislado Cp en 6 muestras de intestino en la región de yeyuno e íleon. El promedio de colonias por gramo de heces fue de 215 UFC/g (cuadro I). Así mismo fueron aisladas bacterias de biota intestinal (Staphylococccus aureus, Actinomyces sp, Acinetobacter calcoaceticus, Alcaligenes faecalis).
 
Estudio histopatológico
En el grupo1 la longitud promedio de las vellosidades de yeyuno fue de 1284.452 μm con un rango entre 905.7333 μm y 1488.153 μm. La desviación estándar fue 38.418, mientras que la longitud promedio de las vellosidades de íleon fue de 1299.388 μm con un rango entre 805.933 μm y 1563.8 μm. La desviación estándar fue 1299.388 (Fig. 2)
En el grupo 2 la longitud promedio de las vellosidades de yeyuno fue 1478.434 μm con un rango entre 1311.36 μm y 1631.41 μm. La desviación estándar fue 103.193 y la longitud promedio de las vellosidades de íleon fue de 1384.295 μm con un rango entre 1190.076 μm y 1486.316 μm. La desviación estándar fue 111.952 (Fig. 3).
Estudio estadístico No se encontró relación estadísticamente significativa entre la longitud de las vellosidades intestinales y la cantidad de Clostridium perfringens en ambos grupos del experimento (cuadro II).
Longitud de las vellosidades intestinales y cantidad de Clostridium perfringens en pollos parrilleros de 6 semanas de edad - Image 2
Discusión y Conclusión
Con la propuesta de regulación del uso de antibióticos promotores de crecimiento en México y el crecimiento de la demanda del consumidor por adquirir productos libres de APC es de vital importancia para los Médicos Veterinarios especialistas en aves conocer los valores esperados de UFC de Clostridium perfringens así como el tamaño de las vellosidades intestinales en Pollos parrilleros sanos para poder tener una herramienta diagnostica para prevenir la Enteritis necrótica.
Los resultados obtenidos en la grupo 1 del estudio fueron negativos a Cp, lo anterior es compatible con lo encontrado por Long JR et al., (1974) en un estudio realizado con pollos sanos, aves con signos de EN y aves muertas, en este estudio también se separó en 2 grupos, 1) aves enviadas al laboratorio y 2) casos de campo.
En el presente estudio en el grupo 2 se encontraron 215UFC/g de muestra, pero durante la obtención de las muestras no se observó ninguna lesión en intestino delgado o grueso. Batalle M et al., (2009) mostraron que sólo los Pollos parrilleros que presentaban valores por arriba de 107UFC/g presentaban lesiones, así mismo, encontraron en el 82% de las muestras obtenidas un recuento de Cp menor o igual a 106 encontraron que no había relación significativa entre las edades de las aves y el contenido intestinal de Cp.
Por otro lado, Long JR et al., (1974) encontraron que los valores normales en Pollos parrilleros sanos es de 0 a 105 UFC /g y Svobodovà I et al., (2007) en un estudio en la república Checa donde muestrearon Pollos parrilleros sanos Cobb 500, alimentados con pellet comercial con coccidiostato los resultados encontrados fueron de 0 a 105UFC/g.
Con relación en los resultados del estudio bacteriológico en ambas fases de este estudio, se observó que son compatibles con la literatura anteriormente citada, ya que no hubo factores predisponentes para favorecer un crecimiento excesivo de Cp como lo podría haber sido con coccidiosis u otros factores. En cuanto a los resultados del estudio histológico, el tamaño en las vellosidades intestinales es considerado como un primer estudio que refleja el tamaño de las vellosidades intestinales en México, en pollos parrilleros de 6 semanas de edad sanos alimentados con una dieta comercial y antibiótico promotor de crecimiento, ya que la información disponible sólo cita el efecto de los estimuladores del crecimiento de vellosidades intestinales, además, actualmente no existe información precisa que relacione el tamaño de las vellosidades intestinales y la presencia de Cp bajo las condiciones anteriormente citadas. Se debe de tomar en cuenta que la longitud de las vellosidades intestinales puede variar según la región del intestino y la forma del corte. Es necesario siempre debe haber un lugar preciso de corte para evitar resultados erróneos.
 
Referencias
1. Francesch M. Disbiosis intestinal. Memorias del XLIV Symposium científico de AECA; 2007 octubre 24-26; Valencia España: Asociación Española de Ciencia Avícola. 2007: Memorias en CD-R.
2. Kerry K, Cooper J, Glenn S. Necrotic enteritis in chickens: A paradigm of enteric infection by Clostridium perfringens type A. Anaerobic. 2009;15:55-60.
3. Richardson K. Clostridia en el pienso: impacto en el rendimiento animal y control. Memorias del XXI Congreso Latinoamericano de Avicultura; 2009; La Habana, Cuba. Asociación Latinoamericana de Avicultura. 2009: Memorias en CD-R.
4. Cervantes H. El uso de antibióticos y su futuro en la producción animal. Memorias de la XXXIV Convención Anual ANECA; 2009 agosto 12-15; Acapulco (Guerrero) México. Asociación Nacional de Especialistas en Ciencias Avícolas de México. A.C. 2009: Memorias en CD-R.
5. Instituto Nacional de Salud Pública. Regulación y promoción para el uso adecuado de antibióticos en México. Propuesta de lineamientos para la acción. Dreser MAC, Peredo VA. México 2010.
6. Skinner TJ, Bauer S, Young V, Pauling G, Wilson J. An economic Analysis of the impact of subclinical (mild) Necrotic Enteritis in broiler chickens. Avian Diseases 54:1237-1240. 2010.
Temas relacionados
Autores:
Nestor Ledesma
Asociacion Nacional de Especialistas en Ciencias Avícolas de Mexico (ANECA)
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Guillermo García Hernández
UNAM - Universidad Nacional Autónoma de México
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Odette Urquiza Bravo
UNAM - Universidad Nacional Autónoma de México
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