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XIII Congreso Internacional AVEM 2020

Evaluación del uso de una vacuna doble recombinante HVT NDV IBDV en pollos de engorde en condiciones de campo

Publicado el: 18/5/2020
Autor/es: Ramiro De Gasperín Zanatta, Juan Francisco Ríos Cambre, Nadia Prado Ramírez. Avícola Carus-Abella S.A. de C. V., MSD – Merck Animal Health, Surtidora Agropecuaria DIGA. México
Resumen

Se vacunaron pollitos de engorda de un día de edad con un programa de vacunación que incluyó una vacuna vectorizada recombinante con un vector de Herpesvirus del Pavo (HVT), que expresa antígenos de los virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) y de Gumboro (IBDV), es decir, se trata de una vacuna triple. La efectividad del programa de vacunación se evaluó por medio de análisis histopatológico y de secuenciación molecular de nueva generación. Los resultados arrojaron un control efectivo contra la exposición de un virus variante de la IBD, perteneciente al tipo Delaware E.

Palabras Clave: Vacuna recombinante, pollo de engorda, enfermedad de Newcastle, enfermedad de Gumboro, enfermedad de Marek.

Introducción

El control de las enfermedades infecciosas es uno de los aspectos más importantes en la avicultura. Enfermedades como Marek, Infección de la bolsa de Fabricio y enfermedad de Newcastle generan grandes pérdidas económicas, representando un riesgo para la avicultura mundial[2]. Para el control de estas enfermedades la vacunación resulta una herramienta preventiva ampliamente utilizada. El desarrollo de nuevas tecnologías, ha permitido el desarrollo de vacunas utilizando vectores virales como los adenovirus, poxvirus y herpesvirus [4].

El virus Herpes de pavo (HVT) o Meleagrid alphaherpesvirus 1 se ha utilizado comúnmente para la protección de la enfermedad de Marek en gallinas y pollos comerciales, gracias a que su genoma presenta sitios no esenciales, por lo que ha sido posible la inserción y expresión de genes de interés como la proteína F de NDV (virus de la enfermedad de Newcastle), la proteína VP2 de IBDV (virus de la enfermedad de la bolsa de Fabricio), y otros virus importantes en la avicultura para la elaboración de vacunas recombinantes [1]. Con ello se confiere protección no sólo frente a la enfermedad de Marek, sino también contra otros patógenos. Dentro de las ventajas de este tipo de vacunas es que al no presentar el virus completo de IBDV o NDV no existe replicación de los mismos, y por lo tanto no hay daño embrionario, permitiendo que la vacuna sea aplicada in ovo. Además, el HVT, tiene la capacidad de evadir la interferencia viral por anticuerpos maternos y puede ser recuperado durante largos periodos de tiempo produciendo una inmunidad sólida y duradera [1] [2].

El objetivo del presente trabajo fue evaluar la eficacia y protección conferida por la vacuna recombinante conteniendo simultáneamente los antígenos de los virus de enfermedad de Newcastle y Gumboro bajo condiciones de campo en una granja de pollo de engorde ubicada en Córdoba, Veracruz, siendo aplicada por vía subcutánea al día de edad en la planta de incubación. Esta vacuna recombinante tiene como vector al HVT cepa HVP360, con genes insertados que codifican para la proteína F de la enfermedad de Newcastle y VP2 del virus de la enfermedad de la bolsa de Fabricio (Gumboro).

Materiales y Métodos

Se vacunaron 200 000 pollitos de un día de edad con la vacuna recombinante doble, vía subcutánea, según la dosis recomendada por el fabricante con al menos 103.3 UFP por ml. Las aves fueron alojadas en casetas de ambiente controlado y bajo alimentación y manejos establecidos propios de la empresa. Los parámetros productivos fueron monitoreados a lo largo del ciclo de crianza hasta su venta.

Detección de DNA de virus de enfermedad de Marek. A los 14 días de edad se colectaron muestras de folículo de la pluma en tarjetas FTA de 20 aves de dos casetas para ser analizadas por secuenciación de última generación (Viral Flex Seq).

Detección de RNA de virus de enfermedad de la bolsa de Fabricio. A los 21, 28 y 35 días de edad se obtuvieron 10 muestras de improntas de bolsa de Fabricio en tarjeta FTA para ser analizadas mediante secuenciación (Viral Flex Seq) de la región hipervariable de la proteína estructural VP2 (hv VP2). Para los efectos respectivos se utilizó la clasificación de genogrupos establecidos por Jackwood [3].

Histopatología. Se extrajeron muestras de bolsa de Fabricio y se fijaron en formol al 10% para su envío a un laboratorio de Biología. Para la evaluación del daño histopatológico se utilizó el sistema de puntuación propuesto por el Dr. Frederick Hoerr de la Universidad de Auburn Alabama. Para cada una de las bolsas de Fabricio se comparó la relación directa que hay entre el crecimiento del bazo y de la bolsa de Fabricio a los 21, 28 y 35 días de edad.


Resultados

Detección de DNA de virus de enfermedad de Marek. De las 20 aves, la detección del virus vacunal recombinante fue la siguiente: 6 presentaron buena cantidad de virus vacunal (30%), 12 aves moderada cantidad (60%) y 2 aves (10%) pobre cantidad; estos resultados se observan en la Figura 1.

Evaluación del uso de una vacuna doble recombinante  HVT NDV IBDV en pollos de engorde en condiciones de campo - Image 1
Figura 1. Detección del virus recombinante Marek-IBD-ND en aves de 14 días de edad. Cada uno de los puntos blancos representa una muestra y se observa que la mayoría de ellas muestra la presencia del virus recombinante, demostrando una correcta aplicación de la vacuna.

Evaluación del uso de una vacuna doble recombinante  HVT NDV IBDV en pollos de engorde en condiciones de campo - Image 2
En la Figura 2 se observa que las 20 muestras de folículo de la pluma de aves de 14 días no amplificaron a otros virus vacunales HVT o HVT recombinantes, demostrando que no existió contaminación con otras vacunas.
 

Detección de RNA de virus de Gumboro (Caseta-2)

  • 21 y 28 días de edad. No se amplificó virus de la enfermedad de la Bolsa de Fabricio.
  • 35 días de edad. Se amplificó virus de la enfermedad de la Bolsa de Fabricio, perteneciente al genogrupo 2 de los virus variantes Delaware E como se observa en la Figura 3.
Evaluación del uso de una vacuna doble recombinante  HVT NDV IBDV en pollos de engorde en condiciones de campo - Image 3
Figura 3. Detección de virus vacunal HVT o recombinante HVT distinto al utilizado en el presente trabajo, en aves de 14 días. Cada uno de los puntos blancos representa una muestra y se observa que las 20 fueron negativas.


Detección de RNA de virus de Gumboro (Caseta-3)

  • 21 días de edad. No se amplificó virus de la enfermedad de la bolsa de Fabricio.
  • 28 y 35 días de edad. En ambas edades se detectó la presencia de virus de la enfermedad de la bolsa de Fabricio perteneciente al genogrupo 2 y cercano a los virus variantes Delawere E como se observa en la Figura 4.

Evaluación del uso de una vacuna doble recombinante  HVT NDV IBDV en pollos de engorde en condiciones de campo - Image 4
Figura 4. Análisis filogenético de la muestra de impronta de bolsa de Fabricio de aves de 28 días de edad de la caseta 3. Se observa que el virus detectado pertenece al genogrupo 2 de la familia de virus variantes Delawere E (rombo rojo).


Cambios histológicos en bolsa de Fabricio.

Caseta 2.

  • 21 y 28 días de edad. Sin cambios significativos (5/5).
  • 35 días de edad. Se observó disminución moderada de la población linfoide abarcando un 80%, acompañado de numerosos quistes en los folículos, lesiones compatibles con infección de la bolsa de Fabricio fase subaguda.

Caseta 3.

  • 21 días de edad. Sin cambios significativos.
  • 28 días de edad. Se observaron extensas áreas de necrosis acompañadas por heterófilos abarcando el 30% (1/5) y 90% (3/5) en los folículos. En el intersticio se apreciaron espacios claros correspondientes a edema e infiltrado de heterófilos.
  • 35 días de edad. Se observaron extensas áreas de necrosis acompañadas por heterófilos abarcando el 30% (2/5) y 90% (4/5) en los folículos. En el intersticio se apreciaron espacios claros correspondientes a edema e infiltrado de heterófilos.

En el cuadro uno y dos, se observa la puntuación asignada para la evaluación de daño histopatológico de acuerdo a Frederic Hoerr.

Evaluación del uso de una vacuna doble recombinante  HVT NDV IBDV en pollos de engorde en condiciones de campo - Image 5
Caseta 3.
Puntuación asignada para la evaluación de daño histopatológico de acuerdo a Frederic Hoerr de las bolsas de Fabricio de aves de la caseta 3. Se observa que desde los 28 días de edad la puntuación es de 3 y 4 (moderada a severa deplesión linfoide y necrosis) en la mayoría de las bolsas de Fabricio.

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Caseta 2.
Puntuación asignada para la evaluación de daño histopatológico de acuerdo a Frederic Hoerr de las bolsas de Fabricio de aves de la caseta 2. Se observa que desde los 35 días de edad la puntuación es de 4 (severa deplesión linfoide y necrosis) en las 5 bolsas de Fabricio.
 

Relación directa entre bazo y bolsa de Fabricio.

Caseta 2 y 3.

  • 21 días de edad. La bolsa de Fabricio en relación directa con el bazo, fue de 2.5 a 1 en ambas casetas.
  • 28 días de edad. En el caso de las aves de la caseta 2, la bolsa de Fabricio tuvo una relación directa con el bazo de 3 a 1, sin embargo, en la caseta 3 esta relación fue de 1 a 1(bolsa de Fabricio-bazo) en 4 de 5 aves.
  • 35 días de edad. Tanto en caseta 2, como en caseta 3 la relación directa de bolsa de Fabricio con el bazo fue de 1 a 1.5 respectivamente.


Discusión

El uso de vacunas recombinantes en México se ha introducido desde mediados de la década de los años 00. Desde hace tiempo se ha sospechado la presencia de virus variantes cercanos al tipo Delaware E. Es sabido que estos virus no pueden ser controlados efectivamente por vacunas convencionales pertenecientes a grupos del tipo estándar.

La vacuna contra la enfermedad de Marek desde su introducción en la década de los 70´s significó un paso fundamental en la reducción de la mortalidad y decomisos en rastro, el desarrollo de vacunas recombinantes con HVT como virus vector ha permitido una amplia variedad de biológicos disponibles comercialmente, en este caso, la detección de virus vacunal a los 14 días de edad a partir de muestras de folículo de la pluma demostró que la replicación de HVT recombinante (HVTr) fue bueno como se observa en la Figura 1; el 90% de las aves muestreadas presentó de moderada a buena cantidad de virus HVTr, sin embargo, el 10% presentó poca cantidad. Esto se puede deber a diferentes factores que repercuten en la replicación del virus. En este trabajo no se detectó ningún otro virus HVT recombinante o solo como se muestra en la Figura 2. Dentro de los resultados obtenidos con la secuenciación de última generación (Viral Flex Seq) se evalúa la calidad de la muestra y en el caso de las 20 muestras obtenidas a partir del folículo de la pluma, todas presentan excelente calidad descartando errores asociados a un muestreo mal realizado.

Evaluación del uso de una vacuna doble recombinante  HVT NDV IBDV en pollos de engorde en condiciones de campo - Image 7
Figura 5. Calidad de las muestras obtenidas a partir de folículo de la pluma de 20 aves de 14 días de edad. Se observa que todas las muestras colectadas son válidas y de excelente calidad (cada punto blanco corresponde a una muestra).

La enfermedad de la Bolsa de Fabricio se caracteriza por ser inmunosupresiva y altamente contagiosa, ya que el virus (IBDV) se replica en a los linfocitos B inmaduros y al ser un virus de RNA de doble cadena y segmentado presenta frecuentes mutaciones genéticas y reordenamientos. Estas características le dan potencial de recombinación que puede modificar su virulencia y alterar su antigenicidad, siendo una de las enfermedades de difícil erradicación, con una continua demanda de generación de vacunas efectivas frente a los diferentes tipos de virus que van surgiendo [3].

En el presente trabajo se utilizó una vacuna doble recombinante con virus vector HVT que demostró proteger frente a un desafío con virus variante tipo Delaware E de campo, perteneciente al genogrupo 2 de acuerdo a Jackwood. El genogrupo 2 está conformado principalmente por virus variantes y estos se distribuyen predominantemente en América [3]. En ambas casetas el desafío con IBDV tipo Delawere E se detectó a los 35 días (caseta 2) y 28 días y 35 días de edad (caseta 3) como se observa en la Figura 3 y Figura 4, todas las muestras fueron sometidas a una evaluación de calidad de la muestra que validaron los resultados obtenidos (datos no anexados al presente trabajo).

Estos resultados concuerdan con lo observado en la histopatología, en donde a partir de los 35 días de edad (caseta 2) se observan lesiones en bolsa de Fabricio compatibles con una infección viral aguda (Cuadro 1). En el caso de la caseta 3, la presentación de lesiones histopatológicas sugerentes a infección por IBDV se observa desde el día 28 de edad (Caseta 2), y que concuerda con la comparación de la relación directa entre el bazo y la bolsa de Fabricio (1 a 1).

Como conclusión, el uso de una vacuna doble recombinante con vector HVT no solamente protege frente a la enfermedad de Marek, presenta los beneficios previamente citados de un virus HVT y genera inmunidad frente a la enfermedad de Newcastle y Gumboro. En el caso de esta última, permite la protección frente a un desafío de campo con virus perteneciente al genogrupo 2 cercano a virus variantes tipo Delaware E, sin afectar los parámetros productivos. Y gracias a una sola aplicación de vacuna recombinante contra tres patógenos de importancia, existe un control más eficiente de las enfermedades, facilita el control del proceso de vacunación en la incubadora, reduciendo la mano de obra para la vacunación en campo generando mayor protección de por vida en el ave.

Referencias bibliográficas

 
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