La siguiente publicación técnica esta relacionada al evento:
XXIV Congreso Latinoamericano de Avicultura 2015

Aislamiento y caracterización de variante genética del virus de bronquitis infecciosa en zona de mayor concentración avícola de Argentina

Publicado el: 18/1/2016
Autor/es:

Introducción

La Bronquitis Infecciosa Aviar (BIA) es una enfermedad viral altamente contagiosa que ocasiona cuantiosas pérdidas económicas. Diferentes serotipos y genotipos del virus se identificaron en todo el mundo, la mayoría de los cuales no confiere protección cruzada (Lai & Cavanagh 1997; Lopez et al., 2006) . A fines del año 2012 un incremento de la incidencia de la enfermedad en la región centro-este de la Argentina (zona de mayor concentración avícola del país), con alta mortalidad (hasta 35%) en aves vacunadas con cepas tipo Massachusetts y Connecticut, originó la demanda de identificación del agente causal de los cuadros

 

Objetivos

Realizar el aislamiento y caracterización genotípica de variantes del Virus de la Bronquitis Infecciosa Aviar (VBIA) en parvadas con alta mortalidad.

 

Materiales y Métodos

Historia de los Casos: Región localizada en el centro-este de Argentina donde se encuentra el mayor polo avícola nacional. Cuadros caracterizados por brusco aumento de la mortalidad entre los 38 y 44 días de edad. Muerte sobreaguda entre 0,6-3% diario afectando una nave y tardando 2-4 días en pasar al resto de las naves. Aves de estirpe Cobb vacunadas el primer día de edad con vacuna recombinante Marek-Gumboro, Newcastle y Bronquitis cepa Massachusetts y revacunadas en campo a los 14 días con cepa Connecticut. El signo común entre los cuadros fue una marcada nefritis con depósitos de uratos. Riñones con cambio de coloración, anaranjados y de tipo cerebroide.

Aves Centinelas: Se expusieron 20 aves centinelas en 4 granjas que cursaban la fase aguda de la enfermedad. A los 7 días post exposición se sacrificaron 10 aves centinelas. Por cada granja se realizó 1 pool de órganos (riñones). Aislamiento en Embrión de Pollo y Confirmación Diagnóstica: Cada pool fue inoculado en embriones de pollos de 9 días, cosechando el líquido alantoideo 6 dpi. Para confirmar presencia del virus se corrieron pruebas moleculares siguiendo los protocolos descriptos por Rimondi et. al. 2009.

Secuenciación y Caracterización Filogenética: los amplicones fueron purificados y secuenciados en forma directa. Se realizó el análisis de las secuencias del gen S. Dichas secuencias se alinearon con el programa CLUSTAL W, incluyendo como referencia las secuencias parciales del gen S de IBV publicadas en GenBank. Para la construcción del filograma se utilizó el método de distancia Neighbor Joining y para la confiabilidad de los nodos se realizó la técnica de remuestreo de bootstrap con 1000 réplicas.

 

Resultados Aislamiento EP

Examen Ante y Post-Mortem Aves Centinelas: En el examen ante-mortem (Fig.1) el signo evidente y común a todas las aves expuestas fueron las secreciones naríticas (Fig. 2) y ruidos respiratorios (chasquido). En el examen post-mortem se observó leve congestión de tráquea y una marcada inflamación del riñón con depósito de uratos en el parénquima del órgano y uréteres (Fig. 3). Se confirmó por PCR la presencia del VBIA (Fig.4).

Aislamiento viral en EP y confirmación diagnóstica por PCR: En el pasaje original no se observaron lesiones características del VBIA. En el primer pasaje el líquido alantoideo de los embriones presentó abundantes uratos (Fig. 5). En el examen macroscópico de los embriones se observó congestión generalizada y depósito de uratos en el parénquima de los riñones y uréteres (Fig. 6 y 7). La presencia del VBIA se confirmó por pruebas de PCR (Fig. 8).

En el segundo pasaje se observaron manifestaciones clásicas del VBIA; embriones en ovillo y enanismo de los mismos (Fig. 9), con plumón rizado (Fig.10) y saco extraperitoneal con uratos (Fig. 11). También se corrió prueba de PCR para confirmar la presencia del VBIA (Fig.12).

En el tercer pasaje los signos clásicos del virus fueron más evidentes, con una notable diferencia en el tamaño de los embriones (enanismo), enroscamiento y rizado del plumón (Fig. 13). La membrana corioalantoidea estaba engrosada y con presencia de abundantes uratos (Fig.14).

 

Resultados Caracterización

El análisis filogenético(Fig.15) muestra que los 4 aislamientos virales (AV1308; AV1309; AV1310 y AV1311) agrupan en el cluster A según la clasificación de Rimondi et al., 2009 y soportado por un bootstrap de 100. Dicho cluster tiene como cepa de referencia el aislamiento chino Q1

 

Discusión

Es poco el conocimiento de la protección que confieren las vacunas con cepas clásicas frente a variantes del tipo Q1 (Yu et.al., 2001; Toffan et al., 2013). En el presente trabajo se puede observar que las aves centinelas manifestaron signos respiratorios que no se observó en aves de producción afectadas por el VBIA por lo que se infiriere que las vacunas clásicas confieren una protección parcial a nivel respiratorio. Además, se pudo confirmar el fuerte tropismo renal de la variante por las lesiones de nefritis y nefrosis evidenciadas en las aves centinelas y en los embriones. La variante Q1 en Argentina presentó una buena adaptación al embrión de pollo evidenciadas por las lesiones ocasionadas a partir del primer pasaje.

Este trabajo, también, sirvó como antecedente para realizar un estudio epidemiológico regional que confirmó la presencia y diseminación de la variante en establecimientos con alta mortalidad (Vera et al., 2015)y contar con cepas de campo variantes tipo Q1 para realizar pruebas de protectotipo llevadas a cabo en el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA)

 

Conclusión

Se aislaron 4 cepas variantes del genotipo Q1 de BIA fueron aisladas de establecimientos con alta mortalidad en Argentina.

 

Bibliografía

• Lai, M.M.C. & Cavanagh, D. (1997). The molecular biology of coronaviruses. Advances in Virus Research, 48, 1100.

• Lopez, J. C., Mcfarlane, R. y Ulloa J. (2006). Detección y caracterización del virus de bronquitis infecciosa aviaria en Chile mediante RT-PCR y análisis secuencial. Arch. Med. Vet. 38, 2.

• Rimondi, A., Craig, M.I., Vagnozzi, A., Konig, G., Delamer, M. & Pereda, A. (2009). Molecular characterization of avian infectious bronchitis virus strains from outbreaks in Argentina (2001-2008). Avian Pathology, 38, 149153.

• Yu, L., Jiang, Y., Low, S., Wang, Z., Nam, S.J., Liu, W. & Kwangac, J. (2001). Characterization of three infectious bronchitis virus isolates from China associated with proventriculus in vaccinated chickens. Avian Diseases, 45, 416424.

• Toffan, A., Bonci, M., Bano, L., Valastro, V.,Vascellari, M., Capua, I. & Terregino, C.(2013).Diagnostic and clinical observation on the infectious bronchitis virus strain Q1 in Italy.Veterinaria Italiana, 49 (4), 347-355.

• Vera, F.S., Gamero, H.A., Plano M., Terrera, M.V., Balette, C.I., Fabeiro, M., Rojas, M.F. (2015). Presencia de variante genética del virus de bronquitis infecciosa en cuadros de alta mortalidad de aves comerciales en el centro-este de Entre Rios. II Congreso Latinoamericano de Virologia Libro de resúmenes pag.115.

 
Autor/es
Médico Veterinario, Máster en Negocios y egresado como PWO en bienestar de las aves de la U. de Bristol Inglaterra. Prof. Posgrado de la Carrera de Especialistas en Avicultura de la Universidad N. de Lujan. Gte. de Producción en Cargill durante 20 años y de Granja Tres Arroyos 23 años. Ex presidente del Grupo GTA. Disertante en congresos, Universidades y Asoc. Profesionales. Autor de trabajos científicos. Investigador del CONICET y Jurado en concurso de profesores de la UBA. Fundador del portal educativo POULTRYEDU e-learning. Actualmente, asesor de empresas avícolas.
 
remove_red_eye 190 forum 0 bar_chart Estadísticas share print
Compartir:
close
Ver todos los comentarios
 
   | 
Copyright © 1999-2020 Engormix - All Rights Reserved