Cólera aviar: ensayos para evaluar la eficacia de doxiciclina y colistina administradas simultáneamente a pollos de engorde

Pasteurella multocida es el agente etiológico de Cólera Aviar. La presentación de esta enfermedad es aguda, subaguda o crónica. La presentación aguda o subaguda esta asociada con alta mortandad hasta 100 % de las aves, mientras que los casos crónicos están asociados a infecciones locales en barbillones, senos infraorbitarios, peritoneo, hígados, pulmones u ovarios (Boyce et al., 2004). Esta persistencia en casos crónicos deja las aves como portadores causando reducción de la producción y disminución de la fertilidad de los huevos. La profilaxis mediante vacunación debe ser considerada en las zonas donde Cólera Aviar es prevalente, utilizando vacunas vivas o inactivadas (Glisson et al., 2007). Sin embargo las vacunas no proveen protección completa, y frecuentemente es necesario administrar antibióticos para evitar la septicemia, con la precaución de no generar resistencia, especialmente cuando éstos se administran en forma prolongada (Glisson et al., 2007).

La Doxiciclina es un antibiótico del grupo de las tetraciclinas. Cuando se administra por vía oral experimenta una absorción gastrointestinal muy rápida y casi completa, que varía entre el 93 % y el 98 % de la dosis, debido a su elevada liposolubilidad (Goodman & Gilman, 1982), obteniéndose la concentración sanguínea máxima entre la 2ª y la 4ª hora post-administración. Esta rápida absorción no está afectada por la ingesta simultánea de alimentos. Por otro lado, la Colistina (o Polymixina E) es una mezcla de los polipéptidos cíclicos Colistina A y B. Cuando la Doxiciclina y la Colistina son aplicados simultáneamente, ambos antibióticos, son efectivos contra todas las bacterias Gram negativas, incluyendo P. multocida. Investigaciones anteriores, realizadas in vitro, han demostrado una sensibilidad a la Doxiciclina sobre del 95 % de las cepas de P. multocida de origen aviar estudiadas (Semjen et al., 1998) y también se ha ensayado en pollitos de 5 semanas de edad la eficacia de la administración de Doxiciclina en el agua de bebida frente a infección experimental con la cepa X73 (cepa de referencia internacional del serotipo 1) de P. multocida (Sellyei et al., 2009).

El presente trabajo fue diseñado para evaluar la eficacia del producto Totalbiotic^® (Vetanco S. A., Argentina), compuesto por una combinación de Colistina y Doxiciclina, frente a una infección experimental con dos cepas regionales de P. multocida de aisladas de casos de Cólera Aviar en Argentina y en forma comparativa con la mencionada cepa de referencia internacional X73.
 

Materiales & Métodos

Aves
Pollos parrilleros de 7 días de vida (Cobb 500). Se realizó un muestreo de meconio de todas las aves para asegurar que estaban libres de Salmonella spp.

Alimento y agua
Las aves recibieron agua y alimento balanceado ad libitum. El alimento fue preparado sin el agregado de antibióticos o anticoccidianos, libre de harinas de origen animal o de pescado. Además estaba libre de aflatoxinas B1, B2, G1 y G2, ocratoxina A, toxina T-2 y zearalenona. Se realizaron análisis bacteriológicos para asegurar que no contenía Salmonella spp. tanto en el alimento como en el agua de bebida.

Instalaciones
Las aves fueron alojadas en cubículos especiales para la descarga con patógenos. Cada cubículo está hecho de cemento con puertas de vidrio, con presión positiva de aire para evitar la posibilidad de contaminación cruzada por aire entre los cubículos. El ambiente cuenta con control de temperatura y luz. El agua se suministró mediante bebederos plásticos y el alimento en comederos lineales.

Cepas de Pasteurella multocida
Se utilizaron dos cepas regionales de P. multocida (1019 y 2088), aisladas de casos de Cólera Aviar y una cepa de referencia internacional (X73). Previamente a estos ensayos estas tres cepas sufrieron dos pasajes en pollitos de 1 día de vida mediante inoculación por vía subcutánea y posterior re-aislamiento de las cepas de los hígados de las aves. Luego las cepas re-aisladas fueron conservadas en viales conteniendo medio criogénico y congeladas sumergiéndolas en nitrógeno líquido.

Inóculo
Los viales con las cepas conservadas en nitrógeno líquido se descongelaron y las cepas que se recuperaron se sembraron sobre placas de agar base Columbia con el agregado de un 7 % de sangre bovina desfibrinada (ASC). Las placas se incubaron durante 18 horas a 37ºC y de cada cepa se transfirió una colonia a 10 ml de caldo Cerebro Corazón. Este caldo se incubó durante 18 horas a 37ºC y fue directamente utilizado para inocular las aves a razón de 0,1 ml por vía subcutánea. La enumeración bacteriana del caldo se realizó según la técnica de Miles & Misra (1938).

Administración de los antibióticos
Se utilizó el producto comercial Totalbiotic^®: Doxiciclina (como Hiclato) 25 % y Colistina (como sulfato) 12,5 %. La administración de este producto comercial se realizó disolviéndolo en agua de bebida para suministrar una dosis de Doxiciclina de 10 mg/kg de peso vivo y de Colistina de 5 mg/kg de peso vivo, lo que corresponde a un total de 4 g del producto por cada 10 litros de agua de bebida. La administración de los antibióticos fue inmediatamente posterior a la inoculación.

Diseño Experimental:
Los pollitos se dividieron en 6 grupos de 11 aves cada uno. Para cada cepa se desafiaron 22 pollitos divididos en 2 grupos: un grupo de 11 aves recibió el antibiótico en el agua de bebida, mientras que el otro grupo de 11 aves se mantuvo como control sin la administración del antibiótico. Se registró la mortandad durante 48 horas post inoculación (Tabla 1), y la diferencia entre los grupos fueron evaluadas mediante el test de Fisher.

Tabla 1. Mortandad por Cólera Aviar. Las aves fueron inyectadas por vía subcutánea con 0,1 ml del inóculo. Se registró la mortandad hasta 48 horas post inoculación 

El índice de mortandad disminuyó significativamente en los grupos tratados con antibióticos en comparación con las aves que no recibieron los antibióticos en el agua de bebida. En los grupos tratados, correspondientes a las cepas 1019 y X73, no se registró mortandad mientras que en el grupo tratado de la cepa 2088 se encontraron 2 aves muertas de los cuales no se aislaron P. multocida.

El uso de los antibióticos en aves frente a infecciones bacterianas en la avicultura es una herramienta muy común e importante. Su vía administración en el agua de bebida es preferible para lograr un tratamiento rápido e uniforme del lote infectado (Vermeulen et al., 2002). En casos agudos de Cólera Aviar es muy importante tener un antibiótico de efecto inmediato para evitar la septicemia, que puede generar un índice de mortandad de hasta un 100 % de las aves. Trabajos anteriores han demostrado que la sensibilidad de la mayoría de las cepas de P. multocida a la Doxiciclina y Colistina. (Jonas et al., 2001; Shivachandra et al., 2004; Sellyei et al., 2009). Además, Semjén et al. (1998) encontraron que la Doxicilina bajó el índice de mortandad en pollos de engorde que habían sido infectados (por vía intramuscular) con 2 x 10³ CFU/dosis de la cepa X73. En coincidencia con este autor, en el presente trabajo se demostró la eficacia del antibiótico contra infección causada con la misma cepa X73, aunque con una dosis (por vía subcutánea) mucho más alta (2,6 x 10⁷ CFU) y además de su acción frente a infecciones experimentales con dos cepas regionales patógenas de P. multocida.