Comparación de métodos de recuperación del residuo no digerido en ensayos de producción de gas in vitro. Comunicación

La técnica de producción de gas in vitro es un método sencillo que permite evaluar simultáneamente el efecto de un gran número de tratamientos o alimentos en la fermentación ruminal. Para calcular y evaluar los cambios en la digestibilidad del sustrato, el residuo no digerido se debe recuperar al finalizar la incubación. El objetivo de este trabajo fue comparar métodos de recuperación del residuo no digerido en ensayos de producción de gas y digestibilidad in vitro.

Se evaluaron cinco métodos de recuperación del residuo no digerido para la técnica de producción de gas y digestibilidad in vitro: filtrado en crisoles (FC) (método tradicionalmente utilizado en el laboratorio de Forrajes y Nutrición Animal de la EEA Manfredi, INTA); centrifugado (Cf); filtrado en bolsas Ankom F57 (FB); incubación en bolsas Ankom F57 (InF57); incubación en bolsas 1020 (In1020). La fermentación por 48 h se realizó en botellas de 100 mL, con 10 mL de inóculo ruminal (IR), 40 mL de buffer y 0,5 g de sustrato (80:20 heno de alfalfa y maíz). En los métodos InF57 e In1020, el sustrato se colocó dentro de las bolsas respectivas y las botellas se sellaron con ellas dentro (Bizzuti et al., 2023). El IR se extrajo de dos novillos fistulados en rumen, alimentados con 80% heno de alfalfa y 20% maíz molido. Durante la incubación se midió la presión (psi) del espacio libre de las botellas a tiempos regulares y se calculó la producción de gas por regresión presión y volumen. Se contó con blancos (IR y buffer sin sustrato) que se utilizaron para corregir los datos obtenidos. Los residuos fueron recuperados de la siguiente manera: FC: se filtró el contenido en crisoles de peso conocido; Cf: se transfirió el contenido a tubos de centrífuga de peso conocido, se centrifugó (11000 g x 15 min) y descartó el sobrenadante (Ungerfeld et al., 2019); FB: se filtró el contenido en bolsas Ankom F57 de peso conocido (Wawrzkiewicz, 2010); InF57 e In1020 se extrajeron las bolsas completamente con el residuo contenido en ellas (Bizzuti et al., 2023). Sobre el residuo se realizaron análisis de materia seca (MS) y se calculó la digestibilidad de la MS. Se estableció una escala cualitativa para evaluar la complejidad de los métodos (1=alta; 2=media; 3=baja) según: tiempo requerido, número de personas necesario, equipamiento y materiales que demanda y costo. Se realizó un diseño completamente aleatorizado con 10 unidades experimentales (botellas) por método. Los resultados se analizaron mediante ANOVA y las medias se contrastaron por test LSD Fisher (α= 0,05).

La producción de gas (mL /g MS incubada) con el FC presentó valores acordes a los obtenidos históricamente en el laboratorio y los métodos Cf y FB no presentaron diferencias con el FC (P> 0,05; Tabla 1). Mientras que con los métodos InF57 e In1020, donde el sustrato estaba dentro de la bolsa, la producción de gas fue significativamente menor (P< 0,05; Tabla 1). La mayor digestibilidad de la MS se observó con el método In1020, lo que puede indicar que parte del sustrato se haya perdido en el medio de incubación en lugar de recuperarse. Mientras que no se detectaron diferencias entre los métodos FC, FB e InF57 (P> 0,05; Tabla 1), pero el error de FC fue mayor que los otros dos métodos. La producción de gas en relación con la digestibilidad en FC resultó significativamente diferente a todos los demás que, a su vez, no difirieron entre ellos (Tabla 1). Los métodos FC y Cf resultaron de mayor complejidad que los demás (Tabla 1). Si bien el método FB tiene una complejidad intermedia (por costo y tiempo requerido), el proceso es más ágil, con valores de producción de gas y digestibilidad de menor variabilidad con el tipo de sustrato utilizado en el estudio.

La recuperación del residuo no digerido es un paso esencial para determinar la digestibilidad. Los métodos evaluados mostraron ventajas y desventajas respecto a la confiabilidad del resultado y la complejidad de su determinación. Ninguno resultó satisfactorio en todos los parámetros considerados, pero en cuanto al sustrato utilizado y el procedimiento de incubación evaluado con un solo inóculo, el método de mejor desempeño fue el FB que recupera el residuo a través del filtrado con bolsas Ankom F57.