Actividad bacteriostática de la Mezcla de Extractos de Castaño/Quebracho (MCQ) frente a una infección con Salmonella enteriditis en condiciones experimentales

INTRODUCCIÓN
Salmonella enteriditis constituye una de las principales causas de contaminación en alimento. La producción de carne y sus derivados, especialmente pollos o huevos poco cocidos, representan unas de las principales causas de las infecciones en humanos. La expansión de la Salmonella enteriditis puede emerger mediante infección vía vertical (proviene de reproductores infectados) o infección horizontal.

Dentro de la zona de crianza, la profilaxis se basa en la bioseguridad (profilaxis directa) y la vacunación (profilaxis indirecta). El uso de antibióticos como herramientas terapéuticas está sujeto a un número pequeño de drogas permitidas en la etapa de incubación hasta un relativo período de suspensión y prohibido en grupos reproductivos (a menos que se haya obtenido un permiso especial). Como ayuda complementaria al control de Salmonella spp. un número de moléculas con efecto probióticos y/o prebiótico están siendo investigadas. Los Taninos obtenidos de extractos naturales ya han demostrado in Vitro acción antibacteriana contra Salmonella spp. incluyendo el serotipo Salmonella entediritis.

El objetivo de este estudio es evaluar la eficiencia de ciertos taninos obtenidos por extracción de maderas (Silvafeed ENC, QS-SOL, MICREN) para controlar la multiplicación intestinal post-infección con Salmonella enteriditis, bajo condiciones de aislamiento en laboratorio.

MATERIALES Y METODOS
Animales: El ensayo fue realizado utilizando pollos broiler comerciales de 34 días de edad.
Estos no han sido vacunados contra Salmonella spp. ni tratados con antibióticos ni coccidiostatos. Desde el arribo, los individuos son separados en 5 jaulas aisladas con 15 animales cada una. Los individuos fueron testeados serológicamente para verificar la ausencia de anticuerpos contra Salmonella enteriditis, y microbiologicamente para verificar la ausencia de infecciones por parte de otros patógenos.

Protocolo Experimental: La Tabla 1 muestra Protocolo Experimental utilizado.
 

Infección con Salmonella enteriditis: La infección se realizó utilizando un stock del patógeno Salmonella enteriditis preservada en IZLER. La dosis infecciosa fue de 100.000 ufc/individuo. La infección esofágica se realizó durante dos días consecutivos.
Alimento y tratamiento: Desde su llegada y hasta el décimo día post-infección todos los grupos recibieron alimento sin tratamiento alguno (Alimento A), sin contar el grupo 3 que recibió alimento con un 0,15% de Silvafeed ENC desde un principio (Alimento C).

Desde el décimo día post-infección los siguientes tratamientos fueron asignados:
• Grupo 2: Alimento B (contiene 0,3% de SILVAFEED ENC)
• Grupo 3: Alimento C (contiene 0,15% de SILVAFEED ENC)
• Grupo 4: Alimento D (contiene 0,3% de Extracto de Quebracho)
• Grupo 5: Alimento E (contiene 0,3% de MICREN (Extracto de Castaño Micro encapsulado))

El Grupo 1 mantiene una dieta sin tratamiento a lo largo de todo el ensayo, sirviendo de control.

Examen Bacteriológico: Fueron examinadas muestras de cloaca en busca de Salmonella spp., realizado de la siguiente manera:
1. Pre-enriquecimiento con agua básica peptónica (incubación a 37°C durante 18hs.)
2. Caldo Rappaport-Vassiliadis enriquecido (incubación a 42°C durante 24hs.)
3. Incubación en Agar específico Heckton entérico (incubación a 37°C durante 24hs.).
Transfiriendo colonias sospechosas a Agar Kligler Iron (incubación a 37°C durante 24hs.).
4. Identificación final usando test Bioquímicos y Serológicos.
Examen Serológico: Anticuerpos contra Salmonella spp. fueron identificados mediante el test de ELISA
(IDEXX).

RESULTADOS
Todos los individuos fueron, al ingreso, identificados tanto Bacteriológica como Serologicamente, siendo negativos para Salmonella spp. Los resultados obtenidos de las muestras de las cloacas siguiendo la infección experimental, fueron los siguientes:

Tabla 2: Número de positivos con Salmonella spp. luego de la infección experimental. * números de positivos sobre el total.

Los resultados obtenidos a partir del test Serológico al final del ensayo (38 días post-infección) se muestran en la tabla 3.

Tabla 3: Control Serológico contra Salmonella enteriditis realizados al final de la prueba sobre 8 individuos de cada grupo. * El resultado Serológico es expresado como proporción s/n. Consorme a las instrucciones de uso, los resultados son interpretados de la siguiente manera:
Proporción s/n
0,750: NEGATIVO para Salmonella enteriditis.
Proporción s/n entre 0,740 y 0,600: INCIERTO
Proporción s/n  a 0,590: POSITIVO para Salmonella enteriditis.

DISCUSIÓN
En este estudio se analizaron los efectos bacteriostáticos de 3 taninos comerciales. El patógeno elegido fue Salmonella enteriditis debido a que éste es un causante común de enfermedades y mortandad en la industria avícola. El ensayo fue realizado bajo condiciones experimentales que no pueden ser totalmente transpoladas a las condiciones comerciales en las que normalmente se crían estas aves. Sin embargo el ensayo dió una idea de los efectos de los productos testeados frente a Salmonella enteriditis.

La infección experimental no manifestó ningún signo clínico ni mortandad en ninguno de los grupos, a pesar de la alta dosis elegida. (100.000 ufc/individuo durante dos días consecutivos). Esto se puede explicar debido a las condiciones especiales de aislamiento en los que se dio la cría. Los individuos se encontraron bajo óptimas condiciones ambientales, careciendo de factores de estrés que favorecen a el carácter infectivo de Salmonella enteriditis. Sin embargo, Salmonella enteriditis a logrado colonizar en intestino en los individuos positivos, alcanzando un pico de colonización el día 18 post-infección. A partir de ese momento se pudo ver una reducción en el número de individuos positivos al día 25 post-infección.

Al día 32 post-infección todos los individuos de los grupos 2, 4 y 5 resultaron negativos para el patógeno, mientras que el grupo 3 tuvo un solo individuo positivo. El Grupo 1 (control, infectado pero no tratado) presentó dos individuos positivos al día 32 de infección (Tabla 2). A este punto del ensayo la diferencia entre Grupos no resultó demasiado evidente. Sin embargo, para una mejor interpretación de la información fue necesario considerar una titulación Serológica contra Salmonella enteriditis al final del ensayo. En el Grupo 1 una clara y más alta respuesta serológica fue observada (Tabla 3). El kit Elisa utilizado para la investigación fue “competitivo” lo que significa que los resultados obtenidos, deben ser leídos como inversamente proporcionales a los títulos serológicos producidos por el animal.

Con todas estas consideraciones tomadas, se puede llegar a las siguientes conclusiones: Grupo 1 (control) la respuesta fuertemente inmune y las óptimas condiciones dadas para el animal permitieron una casi total eliminación de la infección. En los otros grupos la eliminación de la infección puede atribuirse, parte a la respuesta inmune y parte a las condiciones ambientales. En este proceso la presencia de los taninos han tenido un rol significativo en la inhibición del patógeno a niveles intestinales.

Los resultados indican que los extractos vegetales empleados en este estudio han inhibido la multiplicación de Salmonella enteriditis en el intestino. Esta acción representa un instrumento complementario valido para las mediciones que actualmente se usan en la producción avícola. La necesidad de encontrar nuevos sistemas que contribuyan no sólo a la eliminación del patógeno sino también a la erradicación en los desechos de alimentos, indican que más investigación en esta dirección debe ser realizada. Último pero no menor, es el fenómeno de resistencia a antibióticos, que puede representar un riesgo, en salubridad pública, muy serio.