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Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas

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La mastitis se define como una inflamación de la ubre de la vaca, debido a varios factores entre los que se puede mencionar a los siguientes: traumatismos o lesiones, irritaciones químicas y más comúnmente por infecciones causadas por microorganismos patógenos. (Philpot y Nickerson., 2001). El conteo de células somáticas (CCS) es un indicador a nivel de la ubre de cada vaca del status de salud. ( Heeschen.H., 2005). Las células somáticas están compuestas principalmente por leucocitos, cuando existe algún proceso inflamatorio en la ubre, aproximadamente el 99 % de todas las células presentes en la leche del cuarto infectado son leucocitos, mientras que el 1 % restante son células secretadas en la leche, provenientes del tejido mamario. (Philpot y Nickerson., 2001). El conteo directo o indirecto de las células somáticas es la herramienta más común que se utiliza para el diagnóstico temprano de la mastitis subclínica. La prueba de California (conocida por sus siglas en inglés CMT), estima el recuento de células somáticas de la leche, se realiza al pie de la vaca. Tiene la ventaja de ser una prueba rápida y barata para la detección temprana de la mastitis. Los valores de la CMT se relacionan con un tabulador, dando un valor subjetivo del nivel de células somáticas presentes en la leche y por lo tanto se relaciona con el grado de inflamación de la ubre. Por ser una prueba subjetiva requiere cierto grado de habilidad y práctica para poder hacer una lectura correcta de la reacción. Lo que la vuelve una prueba particularmente poco sensitiva o exacta. Portacheck® ofrece una prueba de conteo rápido de células somáticas que se puede realizar también al pie de la vaca y que fue desarrollado para la detección de la mastitis subclínica. (Amaral y Reugg., 2004). El objetivo del presente trabajo es evaluar de manera comparativa en un hato de la cuenca lechera del estado de Aguascalientes la CMT y el Portacheck®.


MATERIALES Y MÉTODOS

El trabajo de campo se realizó en un hato de la cuenca lechera del estado de Aguascalientes localizado en el municipio de Rincón de Romos, al norte de el estado, el hato cuenta con 67 vacas de la raza Holstein en lactación, se ordeñan 2 veces por día en una sala. de ordeña doble 3 en tandem, con salida lateral. Inicialmente se realizó la CMT durante la ordeña vespertina bajo el protocolo ya establecido por el National Mastitis Council (Oliver., et., al 2004).Dando una calificación, según el grado de reacción de la leche con la adición del reactivo para CMT, para cada cuarto de la vaca. (Cuadro 1). Posteriormente se tomo una muestra homogénea de cada cuarto o teta, para realizar el análisis con el Portacheck®, según recomendaciones del fabricante. Se tomo una gota de la muestra colectada de cada vaca, sobre una “ tira” (diseñada para este fin), se adicionó tres gotas de “solución activadora” (incluida en el kit de prueba), la muestra se dejó secar 45 minutos, pasado este tiempo se inserta la tira en el lector Portacheck® del cual se hizo un registro de cada lectura digital del analizador comparándolas con los resultados obtenidos de la CMT (cuadro 2), este procedimiento se realizo para las n = 67 tomadas después de la CMT de la ordeña vespertina. El cuadro agrupa los resultados ya clasificados (grados 0, T, 1, 2, etc), tanto para la CMT como para el Portacheck®.


CALIFICACIÓN DE LA REACCIÓN DE LA CMT (Cuadro 1)


* Para el análisis estadístico a los valores obtenidos como T (trazas) se le asignó un valor numérico de 4.

El principio funcional del Portacheck® se basa en el cambio de color en la fosa de la tira (de blanco a diferentes tonos de azul a morado), el cual esta correlacionado con el nivel de glóbulos blancos en la muestras de leche. El principio de esta reacción se basa en la reacción enzimática de la estereasa contenida en los glóbulos blancos de la leche, los cuales son atrapados en el estrato especial del reactivo que también tiñe dicho sustrato La enzima esterasa de los glóbulos blancos se cataliza generando, un color azul violeta el cual es proporcional al conteo de células somáticas de la muestra. (Figura 1).




RESULTADOS OBTENIDOS


A partir del comparativo de las lecturas obtenidas en la CMT, así como del lacticheck® (Cuadro 2). Se realizó el análisis estadístico de los datos obtenidos, se aplico una prueba paramétrica (t de Student), bajo el supuesto de la distribución normal de los datos. Obteniéndose los siguientes resultados. (Cuadro 3) Como una prueba estadística confirmatoria, se aplicó una segunda prueba ahora no paramétrica (prueba de Wilcoxon para muestras apareadas) con el objeto reafirmar los resultados obtenidos en la t de Student, los cuales se resumen en el Cuadro 4.

Prueba t para medias de dos muestras emparejadas (cuadro 3)

Variable 1

Variable 2

Media

2,04477612

1,68656716

Varianza

2,16463139

2,15784713

Observaciones

67

67

Coeficiente de correlación de Pearson

0,15381415

Diferencia hipotética de las medias

0

Grados de libertad

66

Estadístico t

1,53311414

P(T<=t) una cola

0,06501379

Valor crítico de t (una cola)

1,66827022

P(T<=t) dos colas

0,13002758

Valor crítico de t (dos colas)

1,9965637

Wilcoxon Matched Pairs Test (Cuadro 4)




CUADRO 2
RESUMEN DE RESULTADOS OBTENIDOS EN CMT Y PORTACHECK®

CALIFICACIÓN

CMT

PORTACHECK

0

10

18

T

18

13

1

21

17

2

8

8

3

10

11

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

A partir del análisis estadístico de los resultados, donde no hubo una diferencia hipotética significativa (a una α = 0.05 y una p = 0.5) de las medias, se puede afirmar que no hay diferencias significativas con un nivel de confianza del 95%.

La utilización del portacheck® como herramienta para el conteo de células somáticas para el diagnóstico temprano de la mastitis ofrece las siguientes ventajas:

  • Se utiliza al pie de la vaca
  • Da un resultado numérico del CCS/ ml
  • Es práctico y portátil
  • No requiere de mantenimiento y
  • Los resultados son confiables en un 95%.

BIBLIOGRAFÍA

Amaral. T., Ruegg. P. Association between Results of Porta SCC, the CMT and Isolation of Mastitis Pathogens. 2004.University of Wisconsin. Madison. WI.

Heeschen. H.,W. Somatic Cells as an Indicator of Milk Hygiene : Scientific Basis and The EU Approach. 2005. In NMC 44th Annual Meeting Proceedings. Orlando Florida. USA.. 52 – 72.pp.

Oliver. P., et., al. Microbiological procedures for the Diagnosis of Bovine Udder Infection and Determination of Milk Quality. 2004. National Mastitis Council. Fourth edition.Verona
WI.USA.

Philpot. N.W,.Nickerson.S. C. Ganando la lucha contra la mastitis. Westfalia – Surge. 2001, 192 p.




Trabajo Financiado por el Consejo Nacional de Mastitis A.C y realizado por los dos primeros autores dutrante su maestría en Biotecnología Agropecuaria ITEL, México
 
Autor/es
Aguascalientes, México
Ingeniero Agronomo Zootecnista M en C
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Alfonso Morales
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Maracaibo, Zulia, Venezuela
Médico Veterinario
Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
22/11/2007 | Si el estudio comparativo se realizó para analizar todas las ventajas y desventajas cualitativas y cuantitativas, a fin de determinar eficiencia y eficacia, costos, acceso a la tecnología, facilidad de empleo, etc. deben presentarse todas esos conclusiones para tener base para el momento de la elección más pertinente. Sin embargo, el uso de la CMT es muy confiable y eficaz, con bajos costos, y que permite cumplir con el trabajo de campo, diagnosticar las mastitis subclínicas y tomar los correctivos pertinentes.
Hasta ahora esta prueba ha sido efectiva y eficaz en campo.
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David Berroa  Pinzón
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Ciudad de Panama, Chiriqui, Panamá
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
25/11/2007 | Hola amigos, los felicito por el estudio y me hubiera gustado compararlo también con el método de conductividad eléctrica para el control de mastitis... Es muy bueno, práctico, rápido y muy confiable. Saludos.
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Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
26/11/2007 | Esta prueba es una nueva alternativa, siempre y cuando se revisen unas cuantas vacas, pero en una explotación donde existe un número importante de vacas, esta prueba no es opción ya que la Prueba de California te da una respuesta inmediata al pie de la vaca, y te puede dar un estimado de células somáticas.
Esta prueba que nos presentan es buena a nivel experimental, pero no es opción para fines prácticos.
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Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
27/11/2007 | Estimados:
Desde hace tiempo en establecimientos lecheros he aplicado dos métodos de control de mastitis: CMT y CE; y en dos establecimientos los aplico alternadamente cada siete días. La respuesta que tengo es que depende de la lectura subjetiva entre O y T del CMT mientras que CE que significa 5.5 para mi entender y tomar decisiones, ante estas situaciones lo que supera 1 en CMT y 6.2 en CE los cuartos son identificados y espero su evolución, lo que me permite limitarme al uso preventivo de medidas terapéuticas.
El CMT y CE para mí son complementarios y lo corroboro quincenalmente con el RCS que me envía la usina láctea. Hasta Ahora me siento seguro.
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Lohover Duque Sandoval
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Tulua, Valle del Cauca, Colombia
Productor Lechero
Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
13/12/2007 | Hace aproximadamente un mes, en el pequeño hato que poseo en Barragán (Tuluá), departamento del Valle del Cauca, Colombia, el transportador receptor del producto para llevarlo a la planta de almacenamiento rechazó varios días seguidos la leche por presentar coagulamiento al ser sometido a la prueba de alcohol. Como medida se tomo muestra de cada pezón en igual cantidad al reactivo de California sin encontrarse anormalidad en la muestra. Se procedió a reconocer el sistema de alcohol utilizado por el transportador-receptor y se comprobó que la cantidad de alcohol utilizada no correspondía en cantidad 1=1 de leche, donde efectivamente se encontraba el inconveniente ante manejo inadecuado de la prueba. Es valedero y recomendado que los productores tengan la precaución de someter las vacas en producción a test periódicos para evitar complicaciones que degeneren en incapacidad productiva a largo plazo.
Gracias por permitir aprender conceptos, técnicas de manejo para mejorar nuestros pequeños hatos.
Un abrazo
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Alvaro Arias
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Bogota, Cundinamarca, Colombia
Zootecnista
Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
15/12/2007 | Según lo expuesto, el título del trabajo es muy claro, estudio comparativo del diagnóstico de mastitis entre dos pruebas diferentes CMT y el CCS portacheck.

Los resultados también son claros: No hay diferencias significativas con un margen de error de 0.05, para quienes no entienden estadísticas quiere decir que no hay diferencia entre utilizar uno u otro, teniendo 95% de confiabilidad de obtener iguales resultados.

Las varianzas son casi idénticas (según lo expuesto).
Entonces ¿qué ventaja tendría utilizar un método en una sala de ordeño donde hay que esperar 45 minutos por prueba y donde las vacas tienen que fluir a una velocidad de 70 vacas por hora?.

El uso del CMT (California Mastitis Test) no es complicado, es rápido y aunque es un poco subjetivo no se necesita una gran experiencia, yo diría que es demasiado fácil al alcance de cualquier persona, a esto falta agregar costo.
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Victor Hernandez Rendon
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Ciudad de Aguascalientes, Aguascalientes, México
Ing. Agrónomo Zootecnista
Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
26/01/2008 | Estimado Alvaro Arias:

En referencia a sus cuestionamientos sobre la utilidad práctica del PORTACHECK en una sala de ordeño, estoy de acuerdo en el punto referente al tiempo (45 minutos) de espera realmente parece mucho tiempo. Sin embargo, el estudio comparativo se realizó con el objetivo de validar el uso del PORTACHECK como una herramienta más, que fortalece a una prueba rápida, económica, pero subjetiva como la CMT. En este rubro, la aplicación práctica es que en un hato grande al realizar CMT de rutina, te puedes apoyar con el PORTACHECK A NIVEL de CORRALES O DE TANQUE para así tener un diagnóstico más certero.


AGRADEZCO SUS COMENTARIOS

ATENTAMENTE
IAZ MC VÍCTOR HERNÁNDEZ RENDÓN
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Alvaro Arias
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Bogota, Cundinamarca, Colombia
Zootecnista
Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
26/01/2008 | No lo mencioné anteriormente, pero ya que se debate nuevamente el tema, además de Varianzas casi idénticas de 2.15 y 2.16 con diferencias no significativas ( 0.05), si utilizó el Diseño Experimental adecuado y si se efectuaron correctamente todos los cálculos estadísticos, lo más lógico desde el punto de vista matemático es obtener Coeficientes de Correlación cercanos a !.0 (uno) y no a 0 (cero) que en éste caso fue de 0.153..
Tal parece que estas inconsistencias tampoco las vieron los Directores del proyecto
De todos modos ya no importa, ya el trabajo está hecho y los autores ya obtuvieron su Master en Biotecnología Agropecuaria
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Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
27/01/2008 | El trabajo en su concepción tiene validez y presenta una situación de campo específica para la cual se diseñó el mismo. Desafortunadamente el trabajo no dimensiona la realidad de cualquier prueba, como CMT, que pretende conocer la realidad de la sanidad de la ubre de una explotación lechera y que se puede ajustar en su baja especificidad con una prueba de mejor rigor de especificidad en sus resultados como los recuentos de células somáticas, efectuados con métodos rápidos de campo como el enzimático aquí descrito o los atomatizados.
CMT no dejará de ser la mejor prueba de campo, al lado de la vaca, disponible desde el primer día de parto en los protocolos de diagnóstico precoz y para las evaluaciones de actividades buenas prácticas. Su valor inmediato necesita soporte durante el curso de la lactancia de los métodos automatizados o enzimáticos, para un apropiado análisis de la epidemiología de la Mastitis.
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Carlos Santiago Valencia
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Acayucan, Veracruz-Llave, México
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Estudio comparativo del diagnóstico de mastitis mediante la prueba de california y el contador de células somáticas
28/01/2008 | Hola buen Día, es interesante leer y hablar de la mastitis (principalmente la subclínica), mi opinión coincide con la Dra. María Cotes, en que la mastitis es un problema de higiene, limpieza, manejo y desinfección de las instalaciones, equipos y materiales de ordeño. Se considera que al menos el 70 % de los casos de mastitis son de origen ambiental, el resto es por infecciones sistémicas (por metástasis o diseminación). Por otro lado, no olvidemos, como dice el Dr Ortega Arias de Velasco, que los métodos de diagnóstico son solo una herramienta que hay que interpretar y posteriormente dar las recomendaciones pertinentes a cada caso en particular. Definitivamente mientras mas rápido tengamos los resultados, mejor y mas rápido serán las recomendaciones. En ese tenor, los métodos desde la prueba del paño negro, hasta las pruebas mas sensibles actuales son herramientas útiles en el caso de la mastitis (subclínica). Lo importante es que hacemos después de tener estos resultados? Una observación personal, lo que recomendamos en las lecherías en donde asesorados, es hacer cultivos bacteriológicos y antibiogramas de Leche, pezones, pezoneras, perolas, tanque de almacenamiento, manos del personal que ordeña, etc. para conocer si las bacterias ambientales son las que están causando el problema de mastitis y como entran al parénquima de la glándula mamaria por otro lado también sabremos si hay resistencia a algunos antibióticos y podremos seleccionar el producto adecuado. Esto se recomienda por lo menos cuando se cambia el personal de ordeña o cuando se introduce un nuevo animal al pie de cría (vaca o semental), ya que en estas circunstancias puede cambiar el microbismo ambiental. En definitiva si establecemos un buen manejo se limpieza, higiene y desinfección, reducimos el riesgo de contaminación de la glándula mamaria y si a esto lo aunamos el tratamiento de la vaca al secado con un buen producto (antibiograma), reduciremos drásticamente los problemas de mastitis subclínica y se obtendrá una leche de mayor calidad y con menos contaminantes (inocuidad alimentaria).

MVZ MC Carlos Santiago Valencia
Av. México 32o
Col La Chichihua
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