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Proceso angiogénico alterado en placentas de cerdas con fetos momificados

Publicado: 1 de diciembre de 2022
Por: Andrea Cristofolini; Fiorimanti MR; Gómez KP. (Área de Microscopía Electrónica. UNRC y CONICET); Sitto AP: Murialdo CR; Merkis CI. Área de Microscopía Electrónica. Facultad de Agronomía y Veterinaria, Universidad Nacional de Río Cuarto. Córdoba. República Argentina.
INTRODUCCIÓN
En la cerda, la mortalidad fetal que ocurre entre el día 35 y el final de la gestación, causa una pérdida promedio de hasta un lechón por camada. Durante el desarrollo prenatal, el proceso de osificación comienza muy temprano, los fetos que mueren en esta etapa del desarrollo, sufren un proceso de momificación para luego ser expulsados con el resto de la lechigada viva (4). La placenta porcina es un órgano altamente vascularizado, maximiza la adquisición de oxígeno y nutrientes gracias a la formación de una extensa red vascular a través de procesos de angiogénesis placentaria. En placentas de gestación normal, hemos observado cómo la expresión del factor de crecimiento endotelio vascular (VEGF), y el área vascular placentaria dependen del periodo gestacional (1,2). El desarrollo del lecho vascular puede verse afectado durante el proceso de momificación. El objetivo fue determinar la inmunolocalización de VEGF y sus receptores, Flt-1 (VEGF-R1) y Flk-1 (VEGF-R2) y realizar un análisis morfométrico del número de vasos sanguíneos y del área vascular de acuerdo a su clasificación en intervalos, en placentas con fetos momificados.

MATERIAL Y MÉTODOS
El estudio fue realizado en cerdas cruza de criaderos de la provincia de Córdoba, consideradas libres de enfermedades infecciosas. Luego del parto, se recolectaron 3 placentas con fetos momificados (Pl/FM). De acuerdo a su longitud céfalo-caudal, se determinó que el desarrollo fetal se interrumpió a los 60, 73 y 76 días. Las muestras placentarias se fijaron en formol 10 %; parte de los cortes histológicos de 4 μm fueron destinados para la determinación de VEGF, Flt-1 y Flk-1 por imunohistoquímica, y el resto fue destinado al análisis morfométrico vascular. Para la inmunohistoquímica se utilizaron anticuerpos y equipos comerciales (Santa Cruz, INC y Cell Marque, USA). La observación se realizó a través de un microscopio Axiophot (Zeiss, Alemania), las imágenes fueron adquiridas mediante una cámara digital Powershot G6, (Canon INC, Japón). Los resultados fueron expresados de acuerdo a la distribución de la intensidad de marcación, determinada mediante el valor de High Score (HS)= Σ Pi (i+1), donde i representa el valor de intensidad y Pi el porcentaje de células marcadas correspondientes. Para el estudio morfométrico se utilizó el software AxioVision 4.6.3 (Zeiss, Alemania), se determinó, el número de vasos sanguíneos y sus áreas, las que fueron clasificadas de acuerdo a 6 intervalos: Int 1= (0-100) μm2, Int 2 (100-500) μm2, Int 3 (500-2000) μm2, Int 4 (2000-10000) μm2, Int 5 (10000-50000) μm2, Int 6 (50000-300000) μm2. Los datos obtenidos fueron analizados estadísticamente con el software InfoStat.

RESULTADOS
En Pl/FM al día 60, el factor angiogénico VEGF y ambos receptores se encuentran ausentes mientras que, en Pl/FM a los 73 y 76 días, los valores de VEGF disminuyen significativamente (p< 0,05) respecto a las normales, y los del receptor Flk-1 se mantienen constantes. Las variables morfométricas, número de vasos y área vascular, disminuyen de manera significativa (p≤ 0,05) en Pl/FM. La clasificación de las áreas vasculares en intervalos arrojó, en Pl/FM al día 60, un predominio de vasos comprendidos entre 0-100 μm2 (Int 1) y de 100-500 μm2 (Int 2); mientras que en placentaciones normales del mismo estadío de desarrollo fetal se observa, además, un predominio de vasos de mayor calibre, de 500-2000 μm2 (Figura 1). Al analizar el comportamiento del número de vasos respecto a la condición de gestación, se hallaron evidencias estadísticamente significativas que indican una dependencia entre el área vascular de acuerdo a los intervalos estudiados y la condición de momificación de los fetos al día 60 (p< 0,0001).
Proceso angiogénico alterado en placentas de cerdas con fetos momificados - Image 1
Figura 1
- Comportamiento del número de vasos por intervalos de área, respecto a la condición de gestación analizada (placentas normales, Pl/FM).

DISCUSIÓN
Durante el desarrollo placentario en gestaciones porcinas normales, intermedias y avanzadas, el sistema VEGF-Flk-1 es el responsable de la estimulación del proceso angiogénico (3); en el presente estudio determinamos que en Pl/FM al día 60, no existe inmunoexpresión del sistema proangiogénico VEGF/Flt-1/Flk-1 mientras que, en placentas en las que la muerte fetal sucede en un período más avanzado, 73 y 76 días, aún permanece activo el complejo VEGF-Flk-1, sin embargo, el desarrollo vascular también se encuentra alterado, con menor número de vasos con áreas más pequeñas. Asimismo, se destaca una dependencia entre el área vascular de acuerdo a su clasificación en intervalos y la condición de Pl/FM al día 60. El menor desarrollo angiogénico determinado a nivel placentario, permite infierir que, el proceso vascular alterado en la placenta conduciría a la muerte fetal y posterior momificación. Estos datos evidencian un proceso angiogénico defectuoso en Pl/FM, con la consecuente formación de una red vascular incapaz de sostener un óptimo flujo sanguíneo e intercambio materno/fetal.

BIBLIOGRAFÍA
1-Cristofolini A. y col. 2018. Morphometric study of the porcine placental vascularization. Reprod Dom Anim: 53:217-225.
2-Fiorimanti M. y col 2022. Placental vascularization in middle and late gestation in the pig. Repr and Fert, http://dx.doi.org/10.1530/RAF-21-0092.
3- Sanchis EG. y col. 2017. Apoptosis and cell proliferation in porcine placental vascularization. An Rep Sc, 184: 20-28.
4-Van der Lende T. y col. 2003. Critical periods for fetal mortality in gilts identified by analising the length distribution of mummified fetuses and frecuency on non-fresh stillborn piglets. Anim Reprod Sci, 75:141-150.
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Autores:
Andrea Cristofolini
CONICET Argentina
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camila murialdo
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Adrian Sitto
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