Explorar
Comunidades en español
Anunciar en Engormix

Diferentes concentraciones de agentes crioprotectores en la preservación de semen porcino congelado. Resultados preliminares.

Publicado: 15 de febrero de 2015
Por: Jonathan Cartelle; Jorge Suhevic; Malcervelli, D.; Fischman, M.L.; Humberto Cisale Cátedra de Física Biológica, INITRA, FCV, UBA. CABA, Argentina. Programa UBACyT. Proyecto 20020100100811.
INTRODUCCIÓN
Los espermatozoides porcinos son sensibles a los cambios que ocurren con la criopreservación. Este inconveniente se contrapone con las grandes ventajas que se obtendrían si se lograra establecer un protocolo de congelación adecuado para la especie. Durante la congelación es inevitable que se alteren las membranas de los espermatozoides así como su ultraestructura y composición química (Gliozzi y col., 2000), para disminuir estas alteraciones es que usan diferentes combinaciones de crioprotectores.
El agregado de yema de huevo al diluyente de congelación aporta lipoproteínas de bajo peso molecular. Se ha demostrado que de esta forma se incrementa el porcentaje de espermatozoides con acrosomas intactos, movilidad espermática e integridad de la membrana plasmática (Jiang y col., 2007).
El glicerol es un crioprotector permeable de bajo peso molecular que actúa reemplazando el agua intracelular, reduciendo la temperatura de congelación, disminuyendo la cantidad de solutos presentes en la fase líquida de la muestra y evitando la formación de hielo dentro del espermatozoide (Said y col., 2010); su toxicidad es dependiente de la concentración empleada. El objetivo de este trabajo fue determinar la combinación óptima de glicerol y yema de huevo a fin de mejorar la calidad espermática post-descongelado.
 
MATERIALES Y MÉTODOS
Se analizaron 10 muestras de semen, provenientes de 4 verracos de la Facultad de Ciencias Veterinarias - UBA, alimentados a base de maíz y soja. Las mismas se diluyeron a 37 ºC, con una formulación comercial (Androstar ® - Minitub) para semen refrigerado. Se tomaron 4 alícuotas iguales y se refrigeraron 2 horas a 17 ºC (rotando los tubos cada 30 minutos), se centrifugaron a 800 g durante 20 minutos, se resuspendieron 2 de ellas en lactosa 11% y yema de huevo al 10% y las otras 2 en lactosa 11% y yema de huevo al 20%, se les agregó Equex® 1,13% (volumen total), se refrigeraron durante 2 horas a 17 ºC (rotando los tubos cada 30 minutos), se estabilizaron a 5 °C durante 2 horas, luego se les agregó diluyente con glicerol en concentraciones variables (Diluyente A: yema de huevo 10% + glicerol 2%, Diluyente B: yema de huevo 10% + glicerol 3 %, Diluyente C: yema de huevo 20% + glicerol 2%, Diluyente D: yema de huevo 20% + glicerol 3 %).
Las dosis, se envasaron en pajuelas de 0,5 ml, se llevaron a -70 ºC durante 40 minutos, finalmente se colocaron en N2 líquido. A los 7 días de almacenamiento, se descongelaron en baño termostático a 37 ºC durante 30 segundos. Se evaluaron los siguientes parámetros: movilidad espermática (platina térmica), integridad de la membrana plasmática (tinción de Eosina/Nigrosina), funcionalidad de membrana plasmática (test hipoosmótico) e integridad acrosómica (contraste de fase) en el semen fresco, refrigerado a 17 ºC, refrigerado a 5 ºC y en el semen descongelado. Para determinar la existencia de diferencias estadísticas entre los distintos tratamientos, se realizó la prueba no paramétrica de Friedman, para ello se utilizó el software Infostat® versión 2011p.
 
RESULTADOS
Las muestras criopreservadas en presencia de 20% de yema de huevo presentaron en todos los puntos de control mayores porcentajes de movilidad espermática, integridad y funcionalidad de la membrana plasmática, e integridad acrosómica (p<0,05). Sin embargo, para las curvas de enfriamiento empleadas, no se encontraron diferencias significativas en los parámetros evaluados al utilizar glicerol al 2% y al utilizar glicerol al 3% en el diluyente de congelado (p>0,05).
 
DISCUSIÓN
En función de las evaluaciones realizadas durante el enfriamiento y al descongelado (movilidad espermática, integridad y funcionalidad de la membrana plasmática e integridad acrosómica) se puede observar que aquellos protocolos en los que se utilizó yema de huevo al 20% en el diluyente de congelación, se obtuvo una mejor calidad espermática que en los que se utilizó yema de huevo al 10%.
A diferencia de lo observado por Okazaki T. y col. (2009) quien obtuvo mejor calidad seminal utilizando un diluyente con glicerol al 2% y por Kim S. y col. (2011) quien obtuvo mejor calidad seminal utilizando un diluyente con glicerol al 3%; bajo nuestras condiciones de laboratorio y en función de las velocidades de enfriamiento utilizadas; no se obtuvieron diferencias significativas entre el diluyente con glicerol al 2% y el diluyente con glicerol al 3%.
 
BIBLIOGRAFÍA
- Gliozzi, T. M., Pizzi F., Maldjian A. and Cerolini S. (2000). "Enzymatic Antioxidant Activities of Semen and Sperm Lipid Composition in the Boar." 14 Int. Congress on Animal Reproduction, Estocolmo, Suecia 2: 17.
- Jiang, Z. L., Li Q. W., Hu J. H., Li W. Y., Zhao H. W. and Zhang S. S. (2007). "Improvement of the quality of boar cryopreservation semen by supplementing with low density lipoprotein in diluents." Cryobiology 54(3): 301304.
- Said, T.M., Gaglani, A., Agarwal, A. (2010). “Implication of apoptosis in sperm cryoinjury.” Reproductive biomedicine online 21, 456-462.
- Okazaki T., Abe S. and Shimada M. (2009). “Improved conception rates in sows inseminated with cryopreserved boar spermatozoa prepared with a more optimal combination of osmolality and glycerol in the freezing extender.” Animal Science Journal 80, 121-129.
- Kim S., Lee Y.J., Ji D.B., Kim Y.J. (2011). “Evaluation of different cryoprotectants (CPAs) in boar semen cryopreservation.” Journal of Veterinary Medical Science 73(7): 961-963.
Temas relacionados
Autores:
Humberto Cisale
Universidad de Buenos Aires
Seguir
Jorge Suhevic
Universidad de Buenos Aires
Seguir
Únete para poder comentar.
Una vez que te unas a Engormix, podrás participar en todos los contenidos y foros.
* Dato obligatorio
¿Quieres comentar sobre otro tema? Crea una nueva publicación para dialogar con expertos de la comunidad.
Crear una publicación
Súmate a Engormix y forma parte de la red social agropecuaria más grande del mundo.
Iniciar sesiónRegistrate