Cómo procesar semen porcino en el plantel

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Preliminares

Asegúrese de que todos los insumos necesarios para la colección, la dilución y la evaluación del semen estén correctamente preparados y plenamente dispuestos, como se describe a continuación:

  • Agua purificada (idealmente bidestilada)
  • Mezcla para diluyente
  • Calentador (3 ltr) o baño de agua (de mayor volumen) para temperar el diluyente
  • Vaso de colección precalentado (Ref. No. 11123/1000)
  • US-bags (Ref. No. 11124/0200) (o bolsas y filtros de colección de semen)
  • Guantes de colección (Ref.No. 11128/0055) y sobre guantes (Ref. No. 11128/0100)
  • Maniquí (Ref. No. 11100/0001) – construcción esencialmente firme e higiénica
  • Balanza (Ref. No. 14273/0440) – de laboratorio, no de uso doméstico
  • Densímetro para semen según Karras (Ref. No. 12290/0000) o Fotómetro
  • SpermaCue (Ref. No. 12300/0500)
  • Microscopio con platina temperada, preferentemente de contraste de fases, portaobjetos y cubreobjetos precalentados
  • Atril de suspensión de bolsas (Ref. No. 13208/0000)
  • Tubos de semen en tolva, unidad selladora o engrapadora, o botellas para semen con tapa
  • Caja de aire condicionado o unidad de almacenamiento con temperatura controlada

(para los item sin número de referencia, sírvase recurrir al catálogo Minitüb)

Preparación del diluyente: Caliente el volumen calculado de agua purificada a +35° C, agregue la cantidad adecuada del diluyente de Minitüb (por ejemplo BTS, M III, ANDROHEP) y mezcle hasta su completa disolución. Permita al diluyente preparado un reposo de al menos 20 minutos antes de diluir el semen.
Mantenga el diluyente a +32° C (la temperatura debe corresponder a la temperatura del semen +/- 1° C al momento de la dilución).

No olvide conectar la platina temperada de su microscopio y colocar sobre ella los portaobjetos y cubreobjetos para calentarlos a +39° C.

Preparación del envase de colección de semen: Utilice una bolsa US-bag con boquilla dispensadora (Minitüb Ref. No. 11124/0200). Reteniendo el extremo superior de la bolsa con una mano, lleve su extremo inferior hacia el fondo del envase de colección, hasta que el borde superior del filtro llegue al menos a 1 cm bajo el borde del envase. Abra entonces el cierre de la bolsa US-bag y pliéguela alrededor del borde superior del envase, hasta que el borde del filtro quede a un mismo nivel con el borde. El filtro se abrirá al quedar en su ubicación correcta. Con ello, el US-bag queda listo para la colección de semen.

(Para mayores detalles, sírvase recurrir al manual del US-bag)

Colección de semen

El método más práctico para la colección de semen es el “método de la mano enguantada”: la colección se realiza agarrando y estimulando manualmente el pene del verraco.

La vagina artificial (Minitüb Ref. No. 11120/0000) representa una alternativa para verracos que no aceptan la colección manual, lo cual sólo ocurre raramente.
Previo a la colección de semen, la vaina prepucial debe exprimirse para limpiarla de contenidos de orina y mucus. Para esta operación utilice el sobre-guante higiénico, para evitar la contaminación del guante de colección con secreciones prepuciales u otro tipo de impurezas. Después de completar los preparativos higiénicos, retire y descarte el sobre-guante.

Tan pronto como el verraco inicie las protrusión del pene, el colector debe agarrarlo dejando libre unos 2 a 3 centímetros de su extremo, a fin de evitar que el eyaculado escurra por sobre el guante. La aprehensión debe ser lo suficientemente fuerte para evitar la rotación del pene. La erección completa del pene debe derivar del adecuado estímulo manual. Nunca traccione el pene.
Al iniciarse la eyaculación, los primeros chorros deben limpiar la uretra, por lo que y no debieran colectarse.

El eyaculado se compone de cuatro fases:
1. Secreciones uretrales: las secreciones uretrales son los primeros chorros, cuya función es la limpieza de la uretra. Son transparentes y no contienen células espermáticas.
2. Fase rica en semen: de aspecto lechoso, contiene aproximadamente 70% de las células espermáticas del volumen eyaculado.
3. Fase pobre en semen: de aspecto entre transparente y lechoso, contiene menor cantidad de espermatozoos y puede ser observada alternando con la fase rica en semen.
4. Secreción gelatinosa: generalmente hacia el final de la eyaculación. El gel debe descartarse.

El tiempo de colección puede variar de 5 a 15 minutos, siendo su término determinado por la retracción espontánea del pene. El colector debe seguir este movimiento, manteniendo agarrado el pene hasta su completa retracción.

Después de la colección, sujete y levante con una mano el extremo superior del US-bag alrededor del borde del envase. Con la otra mano, retenga la parte inferior de la bolsa debajo del filtro. Tire suavemente a lo largo de la demarcación para desprender el extremo superior con el filtro desde la parte inferior de la bolsa, que contiene el eyaculado.

Descarte la porción superior desprendida con el filtro que contiene la secreción gelatinosa.

Terminada la colección, el eyaculado debe ser llevado inmediatamente al laboratorio para su evaluación y dilución.

Durante la evaluación y hasta la dilución el eyaculado debe mantenerse a una temperatura constante, entre +30° C y 34° C.

Evaluación del semen

Medición del volumen: La forma más práctica es mediante la utilización de una balanza. Un verraco usualmente produce eyaculados de entre 120 ml y 500 ml (= gramos). El volumen varía de acuerdo con la edad, genética y frecuencia de colecciones. La frecuencia de colecciones no debiera ser mayor a 3 colecciones en el transcurso de 2 semanas.



Concentración seminal (densidad): Hay dos métodos sencillos para cuantificar la cantidad de espermatozoos presentes en un eyaculado.

1. Espermiodensímetro de Karras (Ref. No. 12290/0000)
2. Fotómetro SpermaCue (Ref. No. 12300/0500)

Uso del espermiodensímetro KARRAS:
La medición con el densímetro se basa en la turbidez de una suspensión de diferentes concentraciones de espermios, vistas en la escala del densímetro. Coloque exactamente 9,0 ml de agua dentro del densímetro mediante una pipeta o una jeringa.

Tome entonces exactamente 1,0 ml del semen puro y agréguelo a los 9,0 ml de agua en el densímetro. Tape el densímetro con el pulgar e inviértalo suavemente 2 a 3 veces, a fin de suspender las células espermáticas. Lea en la escala .
Para la correcta lectura e interpretación de los valores, sírvase recurrir a las instrucciones de operación de Minitüb para el espermiodensímetro de Karras.

Uso del fotómetro SpermaCue:
El SpermaCue es un fotómetro especialmente diseñado para la concentración y trabaja con micro-cubetas. Es muy exacto y sencillo de manejar, por cuanto no requiere de dilución alguna, apareciendo la concentración espermática a los pocos segundos en el display. Multiplique, entonces, este número por el volumen del eyaculado para obtener el número de espermatozoides totales contenidos en el eyaculado.

Evaluación microscópica de la motilidad: El porcentaje de espermatozoides mótiles debe ser evaluado en un rango de escala de 0 a 100%. 0% corresponde a ausencia de motilidad y 100% a todos los espermatozoides en movimiento.

El examen de motilidad se efectúa colocando una pequeña gotita de semen sobre un portaobjeto, cubriéndola con un cubreobjeto. Muchas personas tienden a preparar gotitas demasiado grandes para una buena evaluación. La capa de semen entre porta y cubreobjeto debe ser lo más delgada posible, y el semen debe extenderse fácil y espon- táneamente hasta los bordes del cubreobjeto. Si esto no sucede, generalmente se debe a que los portaobjetos están sucios o grasientos.

La muestra debe ser evaluada inmediatamente en un microscopio con platina temperada a +39° C. Los portaobjetos deben ser precalentados sobre una platina o cubierta temperada.

Debieran evaluarse al menos 10 campos visuales. Seleccione campos con buena motili- dad, que no se encuentren cercanos al borde del cubreobjetos. El porcentaje de movi- miento espermático progresivo debe ser estimado en cada uno de los campos, preferentemente mediante una apreciación de al menos 20 células espermáticas, asignando a cada una de ellas una de las categorías “inmóviles”, “con movimiento local”, “con movimiento progresivo”.
En ciertos casos, particularmente en semen diluido con Androhep, las células deben mantenerse a unos 37º C por un mínimo de 10 minutos, antes de que ellas muestren su total motilidad.

Durante la evaluación de motilidad, observe también alteraciones morfológicas, como gotas citoplasmáticas y flagelos flectados. El contenido de anormalidades espermáticas no debiera superar 10%. Eyaculados con una motilidad menor a 70%, con más de 10% de anormalidades morfológicas y una proporción mayor de células aglutinadas, no debieran diluirse sino descartarse. Las aglutinaciones ocurren particularmente en pre- sencia de contaminación bacteriana. Si Usted se encuentra con una proporción aumen- tada de aglutinaciones, revise los aspectos higiénicos en el manejo de sus verracos y de la técnica de colección.

Cálculo y dilucion

Cantidad de espermatozoides y volumen de la dosis de inseminación:
La cantidad de espermatozoides por dosis de inseminación depende del manejo in- dividual y de la cantidad de marranas a inseminar con un eyaculado. Generalmente se inseminan entre 2 y 5 billones. El volumen de la dosis de inseminación debiera ser de 85 ml a 100 ml.

Por ejemplo:
Volumen del eyaculado: 300 ml (gramos)
Cantidad total de espermatozoides: 60 billones (concentración por ml x volumen) Cantidad de espermatozoides por dosis: 3 billones (número a definir personalmente)
60 dividido por 3 → este eyaculado permite la preparación de 20 dosis.

Volumen de cada dosis: 900 ml (a definir)
Volumen total del eyaculado diluido: 20 x 90 ml = 1800 ml
Cantidad necesaria de diluyente, descontando el volumen del eyaculado→ 1,5 l

Dilución del semen:

Después de la colección, el eyaculado debe diluirse dentro de aproximadamente 10 minutos, debido a que posteriormente su viabilidad decrece. Si Usted no logra completar la evaluación y cálculos dentro de este plazo, debiera prediluir el eyaculado en una pro- porción de 1:1, descontando posteriormente para el cálculo de sus dosis el volumen del prediluyente.

Durante el lapso requerido para la evaluación de concentración, motilidad y el cálculo de las dosis, el eyaculado y el diluyente deben ser mantenidos a igual temperatura, pre- ferentemente entre +32º C y 35º C, en un baño maría o en gabinete temperado.

Los cambios de temperatura pueden afectar la calidad del semen, es decir su longevidad y la fertilidad de la dosis de inseminación.

La dilución debe efectuarse en forma lenta y gradual, pero cuidadosa, pues de otro modo puede afectar a las células espermáticas. Algunos minutos tras la dilución debiera efectuarse una evaluación final de motilidad, debiendo a estas alturas descartarse eya- culados con tasas de motilidad menores a 70%. La utilización de tales dosis de semen de baja motilidad aumentaría las fallas de fertilidad.

Preparación de las dosis:
Después de colgar la bolsa US-bag del gancho del atril de envasado, el volumen de diluyente debe ser agregado lentamente al semen. Mezcle el semen diluido dentro de la bolsa, levantando algunas veces la parte baja de ésta. Desprenda la boquilla a lo largo de la demarcación, corte su extremo y dosifique su contenido a los tubos o botellas. Séllelas o ciérrelas y póngales su rótulos de identificación.



Almacenamiento

Las dosis de semen deben permanecer aproximadamente 90 minutos a temperatura de
+20º C, luego deben almacenarse en una caja de aire acondicionado.
El rango ideal de temperatura de almacenamiento se sitúa entre +16º C y 18º C. A esta temperatura, el metabolismo espermático y el consumo de nutrientes se reduce.
Al utilizar diluyentes de almacenamiento corto BTS o M III®, el período de almacena- miento puede alcanzar a 2 o 4 días respectivamente. Al utilizar Androhep®, el tiempo de almacenamiento puede prolongarse hasta 7 días.

I.A. en Videos

Usted encontrará información mucho más detallada en nuestras cintas de video sobre producción moderna de semen porcino e inseminación artificial de la marrana: la colección de semen, su evaluación, procesamiento, técnicas de inseminación y de detección de preñez son presentadas de un modo detallado y de fácil comprensión. Están disponibles en idiomas Inglés, Español y Ruso.

I.A. Tan fácil como parece
Inglés, PAL Ref. No 22300/0200
Inglés, NTSC Ref. No 22300/0201
Español, PAL Ref. No 22300/0300
Español, NTSC Ref. No 22300/0500
Ruso, PAL Ref. No 22300/0400
Colección de semen
Inglés, PAL Ref. No.22300/0210
Inglés, NTSC Ref. No 22300/0220
Ruso, PAL Ref. No 22300/0230
Evaluación y procesamiento de semen
Inglés, PAL Ref. No.22300/0810
Inglés, NTSC Ref. No 22300/0800
Detección de celo, inseminación y detección de preñez
Inglés, PAL Ref. No.22300/0600
Inglés, NTSC Ref. No 22300/0610
Español, PAL Ref. No22300/0680
Ruso, PAL Ref. No 22300/0670

Publicación cedida por Biotay SA cuya autoría corresponde a Minitub, empresa de Alemania a la cual representa y de la cuál vende los productos para Inseminación en las diferentes especies.

roberto jimenez san juan roberto jimenez san juan
Ing. Agrónomo Zootecnista
1 de Junio de 2017
Agradezco la respuesta srita. Gomez, me pasa regularmente en realidad no se que pase problema bacteriano no creo por que me pasa en todos los sementales no se si por que aca las temperaturas son Muy extremosas pero que cree que el semen en un termo me dura casi 72 hrs a temperatura ambiente pero en refrigeracion no me dura mas que eso igual que pasara hablo que la temperatura aca en estos ultimos dos meses ha sido de 35 hasta 45 grados centigrados
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Francesc Gómez Francesc Gómez
Director de Desarrollo
1 de Junio de 2017
Hola Roberto,
No tiene sentido que en un termo te dure lo mismo que refrigerado. Ahí pasa alguna cosa extraña. Te recomiendo que pongas un termometro dentro de la nevera durante los 3 dias y veas la temp max y la temp minima.
Si en un termo a temp ambiente dura 3 días! (Es mucho!) entonces refrigerado tendría seguro que durar más.
Espero poder ayudarte.
2
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1 de Junio de 2017
Hola Greivin, aquí la información solicitada:

Cálculo y dilución

Cantidad de espermatozoides y volumen de la dosis de inseminación:
La cantidad de espermatozoides por dosis de inseminación depende del manejo individual y de la cantidad de cerdas a inseminar con un eyaculado. Normalmente el número de espermatozoides por dosis difiere entre 2 y 3,5 mil millones de espermios. El volumen de la dosis de inseminación debiera ser de 80 ml a 95 ml.

Por ejemplo:
Volumen del eyaculado: 300 ml (igual gramos)
Cantidad total de espermatozoides: 60 mil millones (concentración por ml x volumen)
Cantidad de espermatozoides por dosis: 3 mil millones (número a definir personalmente)
60 dividido por 3 mill millones por dosis ? este eyaculado permite la preparación de 20 dosis.

Volumen de cada dosis: 90 ml (a definir)
Volumen total del eyaculado diluido: 20 x 90 ml = 1800 ml
Cantidad necesaria de diluyente, descontando el volumen del eyaculado (300 ml)
? 1.800 ml – 300 ml = 1.500 ml
1
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1 de Junio de 2017
Hola a todo,

En el siguiente link pueden bajar la versión actualizada del protocolo en PDF:

https://www.dropbox.com/s/z7s7xi56bvqxt5p/MT_Protocolo_C%C3%B3mo%20procesar%20semen%20porcino%20en%20el%20plantel_es_2013.pdf?dl=0

Saludos,
0
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Javier Hernández Pérez Javier Hernández Pérez
Médico Veterinario Zootecnista
1 de Junio de 2017
Exacto. El conservador no esta funcionando adecuadamentev aunque si consigues hay un data logger que te puede medir la temperatura cada hora y durante 7 dus y despues lo grafica. De esta forma podras ver mejor si hay variacioones que hace que se caliente y despues se enfrie. No es problema si se calienta el problema es que se enfria y este proceso se da barias veces, en cambio si se deja a temperatura ambiente casi sera constante y no llegara hasta 16 grados
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1 de Junio de 2017
Pienso que el problema puede ser de variación en la temperatura de la nevera conservadora; siempre me aseguro con un termómetro de máximas y mínimas ya que me ocurrió que el panel mosyraba 16 grados centígrados y al leer el termometro que puse en su interior, me mosyraba 20- 21 grados
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1 de Junio de 2017
Si el semen se calienta, entonces se activsn los espermatozoides y gastan el alimento produciendo desechos que afectan su supervivencia
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1 de Junio de 2017
Cuando extrae el semen de los machos al observarlo a cuanto porcentaje lo pone antes de diluirlo?? Pprq si esta por debajo del 80% ponga lo q le ponga la duración del esperma con dilucion disminuirá mas y si durara aproximadamente 3 dias
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2 de Junio de 2017
Hola ...creo que deberias tener mejor control en el manejo de semen refrigerado como el rango de temperatura de conservacion , mantener homogeneo el semen diluido moviendolo 4 o mas veces al dia ..
En todo caso talvez ayas olvidado que solo es la segunda fraccxion del eyaculado la que se recolecta , ya que si recolectas hasta la ultima fraccion del eyaculado que es plasma seminal estarias acelerando l.vida media del esperma y por ende la vida util del semen diluido.....espero le ayude
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2 de Junio de 2017
Hola. En mi opinon pienso si manejas temperaturas de dilucion , y conservacion , asi como mantener homogenea la dilucion . No deberias tener problema en vida util del semen diluido..
Pienso que la media a la que llegan sus diluciones se deba a que al momento de recolectar este sea la segunda fraccion ques rica en esperma y la ultima fraccion rica en plasma seminal . El plasma no se recolecta ya que esta acelera la vida media del esperma por ende acortando la vida util de sus diluciones..espero le ayude.
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