Problemas con columnas de inmunoafinidad para AFM1

Question

Somos un grupo de investigación que trata de desarrollar una metodología de análisis para AFM1 por HPLC, previa extracción en inmunocolumnas, basándonos en las guías ISO14501 y de la AOAC. A pesar de ser un tema ampliamente estudiado hemos encontrado los siguientes problemas prácticos:

- En ciertos disolventes o mezcla de estos, p.e. metanol, el estándar de AFM1 presenta algunos picos adicionales encontrado cuando el patrón se halla disuelto en acetonitrilo 10 v/v (recomendación de la citada norma ISO). ¿Existe alguna referencia o estudios acerca de la degradación del analito según el disolvente?

- Cuando se sigue el protocolo descrito para un deteminado tipo de columnas de inmunoafinidad, el análisis mediante HPLC revela tiempos de retención distintos a los obtenidos para el patrón en ACN10, pero coincidentes con aquellos picos adicionales. ¿Representaría esto una evidencia de degradación de la AFM1 en el eluyente de la columna?¿Cómo podría solucionarse?

Muchas gracias por su ayuda.

ALBERTO GIMENO · Accepted Answer

Apreciada Ester, tengo bastantes referencias de que no han existido ese tipo de problemas siguiendo el método de:
 
Tuinstra, L.G.M.T., Roos, A.H and Van Trijp, J.M.P. (1993) “Liquid chromatographic determination of aflatoxin M1 in milk powder using immunoaffinity column for cleanup. Interlaboratory Study”. J. of A.O.A.C. International. Vol. 76, No. 6, pp.1248-1254

Y tampoco cuando aplicado a yogures y quesos según:

Dragacci, S. Gleizes, E. Fremy, J.M. Candlish, A.A. (1995). “Use of immunoaffinity chromatography as a purification step for the determination of aflatoxin M1 in cheeses”. Food Additives and Contaminants, 12: 59-65 and CNEVA 1994.

Sin embargo le aconsejo que consulte al Dr. Pedro Burdaspal que fue uno de los colaboradores en la primera referencia que le he dado y que tiene una gran experiencia al respecto. El Dr. Pedro Burdaspal trabaja en el Ministerio de Sanidad y Consumo
Instituto de Salud Carlos III
Carretera Majadonda-Pozuelo, Km. 2,2
MAJADAHONDA (MADRID) 
ESPAÑA 28220
Tel: +34-91-6381111
Fax: +34-91-6342812
E-mail: pburdas@isciii.es

Un saludo


Gimeno 
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