Las enfermedades transmitidas por los alimentos (ETA), se producen por microorganismos o bacterias patógenas infecciosas o toxigénicas. Entre estos los de mayor importancia asociados a brotes gastrointestinales agudos se encuentran Salmonella spp. y Staphylococcus aureus, presentes en alimentos contaminados. La leche al igual que otras matrices alimenticias se convierte en un vehículo ideal en la transmisión de bacterias patógenas al ofrecer un medio rico en nutrientes para el desarrollo de los microrganismos; la principal causa de contaminación de este alimento es la deficiente higiene en la obtención y manipulación. Los índices de ETA a nivel internacional causados por leche y derivados lácteos alcanzan hasta un 6%. La importancia del diagnóstico rápido y certero de estos microorganismos patógenos alcanza gran relevancia debido a que este alimento es muy consumido por la población de alto riesgo (niños, ancianos, personas inmunodeprimidas). El presente estudio tuvo como objetivo desarrollar un ensayo de dúplex PCR para la detección simultánea de Salmonella spp. y Staphylococcus aureus a partir de muestras de leche. El principio del método se basa en la amplificación de los genes yfiR (375 bp) y ARNr 23S (499 bp) utilizando los pares de cebadores TS-11/TS-5 y 23S-1200/23S-1698, simultáneamente. Se determinaron las propiedades termodinámicas de cada cebador con el empleo del programa Vector NTI Advance® Versión 11.5.3 y se optimizaron los principales parámetros críticos del ensayo de dPCR para lo que se determinaron las condiciones óptimas del ensayo y los indicadores de desempeño. El PCR dúplex optimizado demostró su especificidad al solo obtener amplicones frente al ADN de los microorganismos diana y el límite de detección del ensayo detecto valores hasta 1 pg/µL de ADN y 102 ufc/mL en leche estéril. Las muestras de leche cruda analizadas presentaron un 46,7% de presencia de S. aureus, ninguna muestra fue positiva a la presencia de Salmonella spp. Los resultados sugieren que el PCR dúplex desarrollado es un ensayo efectivo, específico para la detección simultánea de ambos patógenos a partir de leche
Palabras claves: Salmonella spp.; Staphylococcus aureus; PCR; ADN; estandarización; optimización; cebadores.
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