Caracterización de subpoblaciones espermáticas en semen bovino criopreservado mediante el uso de técnicas de evaluación seminal no convencionales - Resumen

El objetivo de este trabajo fue caracterizar parámetros de viabilidad y función espermática mediante el uso de técnicas de evaluación seminal no convencionales en semen bovino criopreservado, para la selección de reproductores como parte de un programa de producción de embriones in Vitro. Se evaluaron en total 20 pajillas de 10 toros (2 pajillas por toro). Dentro de los parámetros convencionales evaluados se incluyó la estimación de la motilidad individual progresiva, concentración y morfología espermática. La determinación de la integridad de la membrana espermática se realizó mediante el uso de técnicas de fluorescencia (Hoescht 33258); y la función de la membrana espermática fue evaluada con la prueba de hinchamiento hipo-osmótico (HOST). La integridad acrosomal post-descongelación fue estimada mediante la tinción con Lectinas conjugadas con fluorocromos (PNA Alexa 488®), y la función de este fue determinada por la respuesta acrosomal inducida por el Ionoforo de Calcio A23187 durante 1 hora. Se encontró una proporción de espermatozoides con membrana plasmática funcional de 45.5 ± 13.69%, y un promedio similar de espermatozoides con membrana plasmática viable y acrosoma intacto post-descongelación 41.8 ± 8.46%. La respuesta acrosomal al Ionoforo de Calcio A23187 luego de 1 hora fue en promedio del 19 ± 14.93%. Por último se encontró que el mayor daño espermático luego de la congelación-descongelación estaba directamente asociado a la membrana plasmática (18.7 ± 10.31 – 36 ± 13.13%). Los resultados sugieren la capacidad de poder distinguir varias subpoblaciones espermáticas en una muestra de semen congelado, basados en distintos parámetros de viabilidad y función espermática que pueden estar relacionados directamente a los daños generados por el proceso de criopreservación; y que pueden implicar efectos deletéreos en el éxito de distintas biotecnologías reproductivas como la inseminación artificial o la fertilización in Vitro.

Palabras clave: Viabilidad, Función, Espermatozoide, Semen congelado, Fluorescencia.