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Efecto de factores predisponentes sobre la transmision y persistencia de E. coli O157:H7 en bovinos (B14)

Publicado: 21 de enero de 2019
Por: L. C. Rhades 1; F. J. Babinec1.2; A. Pordomingo1; A. Cataldi 3; A. M. Larzabal 3; V. N. Baldone 1; N. Amigo 3; L. Urquiza 1; L. Gelid 1; P. J. Delicia 4; M. C. Fort 1 1) EEA INTA Anguil 2) Facultad de Agronomía UNL.Pam 3) Instituto de Biotecnología INTA Castelar 4) UTN Facultad Regional Rosario.
INTRODUCCIÓN
La E. coli O157:H7 es un patógeno causante de enfermedad transmisible por alimentos (ETA). Una de ellas, el síndrome urémico hemolítico (SUH), es la más grave, por la producción de toxina Shiga (Stx) en el intestino, actuando sobre los riñones, cerebro y otros órganos en el hombre. El SUH afecta en forma endémica en la Argentina a niños de entre 6 meses a 6 años de edad.
Se demostró que el 20% de los animales de los rodeos estaban infectados con E. coli O157:H7, lo que tiene implicancia en la dinámica de la transmisión entre los animales y el riesgo de infección en el ser humano; situación que adquiere relevancia epidemiológica, por mantener a la bacteria en el ambiente y por favorecer su diseminación.
El conocimiento de los factores que predisponen la trasmisión y la persistencia de E. coli en bovinos es importante para proyectar medidas que permitan disminuir su prevalencia y minimizar el riesgo para la salud pública.
 
MATERIALES Y METODOS
Se utilizaron 120 terneros machos, recién destetados, de 4 y 6 meses de edad y entre  87 kg y 224 kg de peso, encerrados en 36 corrales, albergando entre 3 a 4 terneros por redil, distribuidos por peso, en dos bloques: livianos y pesados.
De marzo a junio de 2014, recibieron una dieta con 3 niveles de PB (proteína bruta) (9%-13%-18%), de julio a noviembre cambio de dieta, con salida al campo, con 9% PB y retorno al encierre de diciembre a abril, con dieta de terminación con 9,5%-13% PB.
Durante el engorde fueron sometidos a diferentes medidas de manejo, como inmunizaciones contra fiebre aftosa y castración.
Se registraron las temperaturas máximas, mínimas y promedio, 15 días previos al HMRA (hisopado mucosa recto anal), para analizar su incidencia en la excreción de STEC. También se tomaron los registros de las lluvias acumuladas, 15 días previos a los HMRA.
Desde el 19 de marzo de 2014 hasta el 24 de abril de 2015, se tomaron muestras mensuales, mediante HMRA a todos los animales.
Los HMRA se incuban en caldo tripticasa soja (TSB), suplementado con vancomicina, cefixima y telurito de potasio, para la posterior separación inmunomagnética (SIM) de las cepas de E. coli. Luego de la SIM, se sembró la suspensión en Agar Mac Conkey Sorbitol + cefixima telurito + suplemento MUG (SMACCT) para seleccionar las colonias de E. coli O157:H7 que no fermentan el sorbitol y el MUG.
Para confirmar el aislamiento de las colonias que no fermentaron al sorbitol y no metabolizaron al MUG, se las somete a la prueba de aglutinación antígeno-anticuerpo O157:H7 (Latex Test).
Las cepas de E. coli O157:H7 identificadas, se las repicó en medio Agar Mac Conkey y al finalizar la incubación, se acondicionaron para su almacenamiento y conservación a –74ºC, hasta la posterior extracción de ADN, para la caracterización genética de las cepas.
Se utilizó la reacción de PCR Multiplex para detectar los genes de la región constante de Intimina (eae), de las toxinas Shiga 1 y 2 (stx1 y stx2), y del responsable de la síntesis del antígeno O (rfbO157).
La relación entre la portación de los genes de Stx1, Stx2 y Stx 1y2 con la temperatura máxima, mínima y las precipitaciones se analizó mediante una regresión Poisson.
 
RESULTADOS
De acuerdo al nivel de PB en cada etapa de engorde, en la recría se observó un elevado número de animales pesados excretando STEC. Durante el pastoreo y la terminación no hubo diferencia en la excreción de STEC entre livianos y pesados. 
Respecto a la portación de los genes Stx de acuerdo al nivel de PB en la dieta, en la etapa de recría, en los animales con la dieta con 9% se detectó una portación de genes Stx1y2 más elevados que los que consumen la dieta con 13%. En los terneros con 18% de PB no se detectaron genes Stx1y2.
Durante el pastoreo a campo se destacó una elevada presencia de genes de Stx1y2, que disminuyen cuando los animales reingresan a los corrales. En la etapa de terminación la presencia de genes Stx1y2 ES baja.
De marzo a julio de 2014, con la disminución de las temperaturas, disminuye la excreción de STEC. De julio a noviembre, a medida que aumentan las temperaturas, se incrementa la excreción de STEC. Sin embargo, durante los meses estivales, con picos de temperatura superando los 30ºC, se registró una baja en la excreción de STEC. A partir de marzo de 2015, con el descenso de las temperaturas, nuevamente volvió a registrarse un aumento de la excreción de STEC.
Con respecto a la presencia de genes de Stx, se observó que de marzo a mayo, a medida que bajan las temperaturas, disminuye la presencia de Stx1 y de junio, hasta finalizar en ensayo, no se la vuelve a identificar. De marzo a julio, se registró una disminución en la portación de genes de Stx2 y Stx1y2. Desde julio, con el aumento de las temperaturas se registró una elevada presencia de Stx1y2, que se mantiene hasta noviembre. La portación de genes de Stx2 también aumenta levemente y se mantiene.
Desde diciembre a marzo, con temperaturas altas, disminuyó la portación de genes Stx1y2, volviéndose a elevar en abril. Durante todo el ensayo, la presencia de genes Stx2 fue constante.
La disminución estacional de las lluvias de marzo a agosto, se correlacionó con una menor excreción de STEC y presencia de los genes Stx1, Stx2 y Stx1y2. A partir de setiembre con el aumento de las lluvias se detectó un aumento en la excreción de STEC, con una moderada presencia de Stx2 y un significativo aumento de la presencia de genes de Stx1y2. Desde diciembre hasta abril de 2015, con un registro menor de lluvias, se observó una disminución de la presencia de genes de Stx1y2 y un registro moderado de Stx2.
 
CONCLUSIONES
Estadísticamente no se apreciaron diferencias significativas en la excreción de STEC, ni en la portación de genes de Stx, entre los distintos niveles de proteínas de la dieta.
La portación de genes para Stx1 y Stx1y2 se vio afectada significativamente por el aumento de las temperaturas máximas (p=0,05), mínimas (p=0,01) y las precipitaciones (p=0,06) y solamente el incremento de las precipitaciones (p=0,01) influyó significativamente sobre la portación del gen para Stx2 y Stx1y2.

1.- Etcheverria, A.; Arroyo, G.; Parma, A.; Padola, N. L. Sindrome urémico hemolítico. El rol del bovino como reservorio de Escherichia coli productores de verotoxinas (Vtec); Arch Latin Nefr Ped 2013; 13 (1) pp 1 – 11

2.- Vilte, D. A.; Larzabal, M.; Cataldi, A. A.; Merado, E. C.; Bovine colostrum contains immunoglobulin g antibodies against Intimin, espa, and espb and inhibits hemolytic activity Mediated by the type three secretion system of Attaching and effacing escherichia coli. Clinical And Vaccine Immunology p. 1208–1213 Aug. 2008

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Autores:
Luis Carlos Rhades
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria - INTA
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