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Búfalos, Congelación de Embriones. (Protocolo de Superovulación del Bubalis Bubalis)

Publicado: 1 de enero de 1900
Por: Leonardo De Luca (Burnet Laboratorios S.A.)
Como lograr los mejores resultados en el manejo de los embriones de los Búfalos de agua.

SUPEROVULACION
Como las hembras bubalinas son en su mayoría subfértiles. Debido a su alto grado de consanguinidad, las mismas presentan altos porcentajes de ovarios fibrosos e inactivos, con una foliculogénesis totalmente dife-rente a las razas bovinas. Por ello se aconseja seguir el siguiente protocolo:
a) Revisar a las primeras horas de la mañana la capacidad ovárica y descartar las que presentan alto grado de fibrosis u ovarios con tamaño menores a 1 cm.
b) A continuación Implantar un dispositivo vaginal que contiene 1g de progesterona, e inyectar 100 mg de Progesterona por vía intramuscular (5 ml de Progeron Burnet)
c) Al día siguiente, a las 32 horas de aplicado el dispositivo vaginal, inyectar 3 ml de Estradiol Burnet por vía intramuscular.
d) A los 4 días y medio de esta inyección, iniciar el tratamiento de superovulación con un producto de-nominado Foltropin (FSH), de la siguiente forma:
1° día 4ml a las 08:00 horas y 4 ml a las 20:00 horas
2° día 3ml a las 08:00 horas y 3 ml a las 20:00 horas
3° día 2ml de Foltropin junto a 2 ml de Clorprostenol (150 mcg de Biggland) a las 08:00 horas, y a las 20:00 horas 2 ml de Foltropin y al mismo momento extraer el implante.
4° día 1ml a las 08:00 horas y 1 ml a las 20:00 horas
Aplicar en todos los casos la vía intramuscular.
A las 60 horas de extraído el implante, inseminar con dos dosis de semen de buena calidad, repitiendo la inseminación cada 8 horas hasta un total de tres inseminaciones.
A los 5 días y medio de la última inseminación, realizar el lavaje uterino con 800ml de una solución de Dulbeco Modificado, con el 1% de suero inactivado de un novillo bubalino. (se inactiva en baño maría a 56° durante 30 minutos)
Los embriones obtenidos, generalmente no más de tres, se van a encontrar en grado de Blastocisto tardío donde se verá el blastocele perfectamente desarrollado.
Es muy importante no tardar más de 5,5 días en realizar el lavaje uterino puesto que el desarrollo de los embriones bubalinos presenta la característica de tener una mayor rapidez en llegar a la madurez. De esta manera a los 6 días ya no se encuentran en el medio de cultivo, puesto que se salen de la zona pelúcida.
PROTOCOLO DE CONGELACIÓN
El primer paso es lavar el embrión encontrado, con 10 pasajes de una solución de TCM 199 con el 15% de Suero Inactivado de novillo bubalino.
Se prepara una solución de congelación de la siguiente manera:
a) TCM 199 con 15% de Suero Inactivado
Glicerina 10%
Sucrosa al 0,2 Molar.
b) Luego de lavado el embrión se pasa a la solución de congelación a temperatura no superior a 28°C durante 10 minutos.
c) Cargar la pajuela de 0,25 ml de la siguiente manera:
Primero una columna de medio de congelación (A) luego una pequeña columna de aire (B) seguido a esta la columna con el embrión ya deshidratado (C) luego otra columna de aire (B) una columna de medio de congelación (A) y terminar con una columna de medio TCM199 con el 15% de suero (D).

Búfalos, Congelación de Embriones. (Protocolo de Superovulación del Bubalis Bubalis) - Image 1
1. Cerrar la pajuela y pasar la misma a la congeladora a 22° C.
2. Bajar la temperatura con una rampa la cual la haga descender hasta los -7° C en 15 minutos.
3. Dejar a -7° C durante 10 minutos y luego realizar el seeding con una pajuela enfriada con nitrógeno lí quido, sobre la columna A del tapón.
4. Luego la rampa de congelación debe descender 0,5° C por minuto hasta llegar a -32°C.
5. Llegado a esta temperatura, sumergir en Nitrógeno Líquido, durante por lo menos 2 horas.
DESCONGELAR SACANDO LA PAJUELA DEL NITRÓGENO Y DEJAR AL AIRE DE 1 A 2 SEGUNDOS, LUEGO SUMERGIR EN AGUA A +32° C DURANTE 10 MINUTOS; SECAR BIEN LA PAJUELA Y LUEGO IMPLANTAR EN LA RECEPTORA EN EL CUERNO EN QUE SE ENCUENTRA EL CUERPO LÚTEO, O SI NO SE LO PALPA, EN EL CUERNO DONDE EL OVARIO ES DE MAYOR TAMAÑO.
SIEMPRE UTILIZAR RECEPTORAS QUE TENGAN DE 4,5 A 5,5 DIAS LUEGO DEL CELO VISTO O INDUCIDO.
EN EL MISMO MOMENTO SE PUEDE INYECTAR 5 ML DE MPH BURNET (50mg de Progesterona por ml, de larga duración) POR VIA INTRAMUSCULAR, REPITIENDO ESTA, A LOS 25 DIAS DE ESTA PRIMERA APLICA-CIÓN.

Recomendaciones:
1. Teniendo en cuenta que el cuerpo lúteo de la búfala es intraovárico y de difícil palpación, sería convenien-te (no imprescindible) el disponer de un ecógrafo, el cual aseguraría detectar la presencia del mismo.
2. No utilizar un electro eyaculador para la obtención del semen de los machos búfalos, ya que por su gran memoria, será imposible volver a introducirlos en la manga.
3. Utilizar masajes uretrales para la extracción del semen, aproximando a una hembra para efectuar este procedimiento. Como la eyaculación se realiza dentro del prepucio, es imprescindible su lavado previo.
4. La extracción se debe realizar solamente a última hora de la tarde, ya que el momento de mayor líbido del macho.
5. Como diluyente para congelar el semen, se utilizará el TRIS BUFFER con 6% de glicerol, más 1% de fruc-tosa, 1% de glucosa y 1% de glicocola. Agregar a esto, un 20% de yema de huevo fresco.
6. Llenar las pajuelas y colocar sobre una rampa de congelación, a una altura no inferior a los 2 cm del nivel del nitrógeno líquido, durante 9 minutos. A continuación sumergir las pajuelas en el nitrógeno.
Siguiendo cuidadosamente los procedimientos señalados se podrá asegurar una implantación embrionaria efectiva.
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Autores:
José María Balsa
Laboratorios Burnet
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Néstor Simón Montiel Urdaneta
17 de abril de 2013
el grupo del Prof. Zicaelli en Italia esta trabajando fuertemente al igual que P. Baruselli en Brasil
Néstor Simón Montiel Urdaneta
17 de abril de 2013
los protocolos de superovulacion escasamente dan 4, 5, 6 cuerpos luteos (ecografía) y en la recolección pueden obtenerse 2, 3 embriones y de esos pueden pegarse maxxxxximo dos pero cmom comente en el foro las búfalas tienen una excelente eficiencia reproductiva: en monta libre - monta controlada o en temporada de monta; recomiendo trabajar bastante con la IA con las búfalas elites del rebaño y digo esto porque muchos colegas cometen el error de establecer un programa de IA y los resultados pueden bajar de un 100% en monta libre, controlada o temporada de monta a valores de 70 - 75% y esto es producto de las fallas en la detección de celo; en IATF hemos obtenidos valores tan malos como 10% hasta 62% una sola inseminación sin volver a resincronizar
Néstor Simón Montiel Urdaneta
16 de abril de 2013
Saludos Considera ud. que las búfalas son sudfertlites; cuando en un rebaño a monta natural de 100 búfalas se preñan 95 o mas y con intervalo de parto inferior a 370 días. nuestras experiencias es que su respuesta a la superovulacion es menor en comparación con los vacunos
SANTIAGO QUINTERO
11 de abril de 2016
Quien me puede enviar información sobre mediciones de circunferencia escrotal en búfalo... Necesito por lo menos 40 de diferentes edades hasta los dos años. Para una tesis..soy de Argentina
Otavio Bernardes
Associação Brasileira de Criadores de Bufalos (ABCB)
21 de febrero de 2014
A empresa Invitro Brasil iniciou no ultimo ano um trabalho com FIV, tendo realizado até agora em 4 sessões de aspirações em nossa propriedade em São Paulo, realizando 101 OPU. Foram obtidos 5,45 oóvitos voiáveis por OPus que resultaram em 2,15 embriões por OPU. Foram realizadas 119 TE (a fresco) em 5 propriedades com média de 25% de prenhez aos 60 dias (20-38%). Foram transferidos apenas 10 embriões congelados com 40% de prenhez.
Fabio Ojeda
17 de abril de 2013
El único trabajo con algún éxito que he visto es de Egipto , donde con 12 receptoras obtuvieron 2 crias en multIparas y 0 con novillas. Hay esperannzas pero falta más investigación en el tema
Fabio Ojeda
16 de abril de 2013
Dr Montiel , cuales han sido sus resultados en transplante y FIV , buenos y malos ?
Fabio Ojeda
12 de abril de 2011
Quien puede mostrar resultados positivos en transplante de embriones en bufalas? en lo que conozco han sido rotundos fracasos.
Dalma Melendez
Dalma Melendez
8 de abril de 2009
yo estoy interesada en saber mas sobre búfalos pues mi proyecto de tesis es acerca de un embutido cárnico y me llama la atención esta especie pero debo saber detalles y empaparme de informacion acerca de ellos para poder decidir si es viable o no... soy estudiante de ingeniería de alimentos y agradezco su respuesta, cualquier persona que me pueda ayudar en eso también deseo saber en Colombia donde hay cría de búfalos en que cuidades o regiones
Jonathan Andres Cabra
Jonathan Andres Cabra
1 de noviembre de 2008
Un saludo especial para todos , tengo una finca dedicada ala ceba de ganado, adquiri una pareja de bufalos, queriendo aprender sobre esta noble especie, la bufala tiene 5 meses de preñes aproximadamente y deseo aprender que procedimientos debo tener en cuenta para preparto y postparto, a los bufalos les llevo un programa de amansamiento con un buen resultado, me gustraria que me colaboraran en informacion y que actividades de TRABAJO puedo realizar con la hembra sin que llegue a perjudicar su gestacion. agradeciendo a los que me puedan brindar informacion jonathancabra@yahoo.es
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