Respuesta inmune en pollos parrilleros desafiados con Salmonella Enteriditis
Publicado: 18 de octubre de 2016
Por: Silvina Pinto (Universidad de Buenos Aires, Facultad de Ciencias Veterinarias, área de Patología Básica); Ernesto Vignoni; Esquivel C.; Florencia Prosdócimo (Universidad Nacional de Luján - UnLu, Departamento de Tecnología); Mitarotonda R.; Natasha Cerny, De Marzi M. (Universidad Nacional de Luján, Departamento de Ciencias Básicas, INEDES (CONICET-UNLu); Mauricio De Franceschi (UNLu); y Hebe Barrios (Departamento de Ciencias Básicas, UNLu), Argentina
Introducción
Las enfermedades transmitidas por los alimentos (ETA) constituyen un importante problema de salud a nivel mundial. Las mismas se producen por el consumo de alimentos contaminados con microorganismos o bien por las sustancias tóxicas que estos producen. El género Salmonella y en especial la serovariedad Enteritidis (SE) es responsable de ETA asociadas al consumo de huevos y carnes de origen avícola. En el caso del control en pollos parrilleros, debido a las restricciones impuestas sobre el uso de antibióticos, se comenzaron a estudiar agentes de origen natural para su reemplazo.
Objetivo
El objetivo del presente trabajo es comparar la respuesta inmune desarrollada frente a la infección con SE pollos parrilleros que consumieron dietas con diferentes aditivos (antibiótico o extracto vegetal polifenólico), mediante la determinación de inmunoglobulinas tanto en suero como en mucosas, y su correlación histológica en órganos linfoides.
Materiales y métodos
Se utilizaron pollos parrilleros de la línea Cobb 500, que fueron alojados en aulas experimentales del bioterio avícola de la Universidad Nacional de Luján. Los animales se dividieron en seis grupos y recibieron alimento con distintos aditivos, según se detalla en la siguiente tabla:
Los grupos desafiados fueron inoculados por vía ingluvial con SE INTA Nal R12 285/94 en una dosis de 104 UFC/ave al segundo día de vida.
A los 7, 14, 21 y 28 días fueron sacrificadas cuatro aves por tratamiento, siguiendo el protocolo aprobado por el comité de ética de la UNLu y se tomaron muestras para los ensayos bacteriológicos, inmunológicos e histológicos. En las muestras obtenidas de la unión cecal y ciego se cuantificó la presencia de SE por métodos convencionales. Se evaluó el título de IgY sérica y la relación IgA específica/IgA total en la mucosa intestinal por la técnica ELISA. Se realizó la histología de las bursas y los bazos, procesados con técnicas de rutina y teñidos con Hematoxilina & Eosina.
El análisis estadístico se llevó a cabo mediante One way ANOVA y el pos-test de Dunnet.
Resultados
Bacteriología
El recuento de SE en unión cecal presentó diferencias significativas (p<0.05) entre los días 7 y 14, con un menor número de bacterias con EVP.
Histología
Fig. 1. A- Bursa normal. B- Bursa de los animales desafiados. Se observó un score de 2 (dos); con disminución del 30% de linfocitos(
), incremento de los repliegues de la mucosa(
) y formación de quistes intraepiteliales (
). No se encontraron diferencias significativas entre tratamientos
), incremento de los repliegues de la mucosa() y formación de quistes intraepiteliales (). No se encontraron diferencias significativas entre tratamientosCentros germinativos en el bazo
Fig. 2.Centros germinativos en bazo de tipo II. A) Día 14, se observó un aumento significativo solo en bazos de los animales tratados con EVP y desafiados con SE. B) y C) A partir del día 21 no se observan diferencias significativas en los grupos evaluados. *p<0.05
Anticuerpos específicos
Fig. 3.Anticuerpos IgY séricas. En animales previamente desafiados, se determino mediante la técnica ELISA, observándose incrementos significativos de anticuerpos específicos anti SE en el grupo tratado con EVP a los 14 y 21 días (A y B). *p<0.05
Fig. 4. Anticuerpos IgA de mucosas. En animales previamente desafiados, se determino mediante la técnica ELISA, observándose incrementos significativos de anticuerpos específicos anti SE en el grupo tratado con EVP a los 14 días (A y B). *p<0.05
Conclusiones
Los animales que recibieron el aditivo EVP en la dieta mostraron:
- una disminución en el recuento de Salmonella Enteritidis;
- aumento de los centros germinativos maduros en el bazo;
- aumento temprano de los valores de IgA en mucosa e IgY sérica específicas.
Por lo tanto se puede concluir que los EVP generan una respuesta inmune adaptativa humoral más eficiente frente a Salmonella Enteritidis que el antibiótico comercial más comúnmente utilizado.
Bibliografia:
- 1. Davidson F. Kspers B. and Schat K. (2008) Avian Immunology first edition.
- 2. Pinto S.; Vignoni E.; Prosdócimo F.; Scigliano F.; Barrios H.; De Franceschi M. y De Marzi M. “Empleo de promotores de crecimiento desafiados con coccidios en pollos parrilleros. Respuesta inmune y salud intestinal”, XXIV Congreso Latinoamericano de Avicultura, 8 al 11 de septiembre de 2015. Guayaquil, Ecuador.
- 3. USDA. Servicio de Inocuidad e Inspección de los Alimentos Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (2011). Información sobre inocuidad de Alimentos, aquí.
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9 de noviembre de 2016
Estimada Silvina Pintos.
Quería aclararle que cuando me refiero en la nota anterior a "anticuerpos" éstos son de tipo IgA pues son los que tienen acción específica en la mucosa intestinal.
Con referencia al texto de la figura 4 que dice:
Fig. 4. Anticuerpos IgA de mucosas. En animales previamente desafiados, se determinó mediante la técnica ELISA, observándose incrementos significativos de anticuerpos específicos anti SE en el grupo tratado con EVP a los 14 días (A y B). *p<0.05.
Si bien el texto expresa los "14 días" en el cuadro en "A" figura 21 días y en "B" 28 días. Quizás de allí ha resultado mi confusión. Pueda aclarar si se trata de un error o es mi interpretación. ¡Gracias!
Saludos cordiales,
Dr. Horacio Raúl Terzolo
9 de noviembre de 2016
Estimada Silvina Pintos:
De acuerdo con el trabajo que presentaron, a partir del día 21 no se observan diferencias significativas (p<0.05) entre los grupos evaluados, de modo que si bien los anticuerpos estuvieron más altos que en el grupo control no puede asignarse un valor estadístico que nos diga si esas diferencias fueran o no debidas al azar. Por ello, posiblemente deberían estudiarse un mayor número de aves en cada lote para comprobar si dichas diferencias a partir de los 21 días en adelante fueron o no debidas a la acción del extracto vegetal polifenólico.
Con referencia al trabajo del Congreso de Patología (X RAPAVE) el mismo debería haber figurado en las citas bibliográficas, pero a mi entender lo ideal sería haber incluido también aquí los recuentos bacterianos ya publicados en dicho Congreso RAPAVE con su correspondiente cita. Justamente lo más importante de este trabajo es el efecto práctico o aplicable a la industria avícola o sea la disminución de la colonización entérica de S. Enteritidis.
Saludos cordiales,
Dr. Horacio Raúl Terzolo
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Universidad de Buenos Aires
8 de noviembre de 2016
Dr. Terzolo, le agradezco su comentario e interés así como sus propuestas para la proyección de trabajo, ya que pueden generar un alto impacto a nivel sanitario y productivo.
Con respecto a la apreciación de la respuesta inmunoestimulante de los anticuerpos, estos se mantuvieron altos hasta el día 28, sin declinar al igual que los centros germinativos que fueron evaluados en el bazo, que como órgano linfoide secundario reforzaron los altos valores de IgY sérico encontrados.
Los recuentos bacteriológicos no fueron expuestos ya que éste es un trabajo presentado en un congreso de patología (X RAPAVE), en formato poster y se intentó dar la máxima información en un espacio predeterminado.
Estos resultados son parte de un trabajo integral enfocado a evaluar la acción de un extracto vegetal polifenólico en la salud intestinal y en la inmunidad local y sistémica, ante desafíos tan frecuentes como Salmonella Enteritidis.
Saludos
Silvina Pinto
4 de noviembre de 2016
Este trabajo demuestra que el extracto vegetal polifenólico en pollos desafiados con una cepa de Salmonella Enteritidis resistente al ácido nalidíxico estimula al ave para producir más anticuerpos de mucosa (IgA) y mayor desarrollo de centros germinativos de la bolsa de Fabricio (células productoras de IgY) hasta el día 14 en que fueron examinados los pollos, desapareciendo este efecto inmunoestimulante cuando las aves se examinaron al día 21.
Se podría deducir que este incremento de IgA e IgY produciría una disminución de la colonización de las salmonelas. Si bien los autores señalan que el recuento de Salmonella Enteritidis en zona de la unión de los ciegos significativamente (p<0.05) presentó menor número de salmonelas en las observaciones realizas en los días 7 y 14 post-infección, los resultados de los recuentos bacteriológicos no han sido expuestos y deberían ser incluidos para conocer el grado de disminución logarítmica y así evaluar su significancia.
Considero que este trabajo podría constituir un aporte más para disminuir la colonización de las salmonelas por medios distintos a los antibióticos. Sin embargo, no basta con evaluar una sola cepa de Salmonella Enteritidis y este ensayo debería ser repetido con varias otras cepas de comprobada alta patogenicidad, únicamente evaluando su aspecto práctico y conclusivo que es determinar si producen o no una significante disminución de la colonización cecal y la excreción durante los primeros días. Dada la aparición en el mercado de vacunas vivas de cepas atenuadas de Salmonella Enteritidis que se administran al 1° día de vida, sería también interesante conocer si este extracto vegetal polifenólico puede ser administrado conjuntamente con esta vacuna o si existe alguna restricción de uso para su administración conjunta al vacunar.
Saludos cordiales,
Dr. Horacio Raúl Terzolo
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