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Presencia de Mycoplasma Gallisepticum y Mycoplasma Sinoviae en un caso de sinusitis infecciosa de los pavos

Publicado: 1 de septiembre de 2011
Por: LMA Herrero, Carlos Daniel Gornatti Churria, J Origlia, Miguel Piscopo, F Unzaga, F Marino, Miguel A. Petruccelli. Laboratorio de Diagnóstico de Enfermedades de las Aves y los Pilíferos, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de la Plata. Argentina
Resumen

La Mycoplasmosis se asocia principalmente a un grupo de microorganismos denominados Mycoplasma gallicepticum (Mg.), Mycoplasma sinoviae (Ms), Mycoplasma meleagridis (Mm) y Mycoplama iowa, productor este último de muerte embrionaria en pavos. En el año 2010 llegaron al Laboratorio de Diagnóstico de las Enfermedades de las Aves y los Pilíferos de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNLP, con fines diagnósticos, 2 pavos de la localidad de Berisso, Pcia.de Bs., Argentina Los animales tenían 4 meses de edad y eran parte de un lote de 30 pavos que convivían junto a 30 gallinas con las que compartían el agua y el alimento que se les suministraba. Las manifestaciones clínicas comenzaron a los 3 meses de vida y se caracterizaron por decaimiento, graves trastornos respiratorios tales como disnea, boqueo, rales, secreción oculonasal y una marcada sinusitis bilateral, con una morbi-mortalidad del 25%. Se obtuvieron muestras para estudios serológicos, bacteriológicos, histopatológicos y para PCR. Se observó que los senos infraorbitarios y la tráquea contenían exudado seromucoso y al corte de los cornetes nasales se percibió la presencia de exudado caseoso. Los pulmones presentaban áreas consolidadas de color rojo vinoso y los sacos aéreos estaban opacos. El estudio histopatológico reveló en la tráquea un moderado infiltrado linfocitario subepitelial en forma focal y difusa. En el pulmón se observaron amplias zonas de consolidación con acumulo linfocitario en el parénquima y en la zona peribronquial. Los cornetes nasales se observaron congestivos, hemorrágicos y con exudado en la luz, con un marcado desprendimiento epitelial y la presencia de exudado inflamatorio. Los sueros arrojando reacción positiva por la prueba de aglutinación rápida en placa para Mg y Ms. De los hisopados traqueales y articulares se aislaron colonias de Mycoplasma synoviae y por PCR dio positividad tanto para Mg como para Ms. A través de los signos clínicos, las lesiones macroscópicas e histopatológicas, de las pruebas serológicas, bacteriológicas y de PCR se logró arribar al diagnóstico definitivo de un caso de sinusitis infecciosa producida por Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma sinoviae.
Palabras Clave: Pavos, Sinusitis, Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma sinoviae.

Introducción
La mycoplasmosis es una entidad relacionada con infecciones del tracto respiratorio de los pollos y pavos en los que provoca sinusitis, conjuntivitis, secreción ocular, aerosaculitis y artritis (Fatummb, 1984; Kang et al., 2002; Osorio et al., 2007).

La enfermedad se asocia principalmente a un grupo de microorganismos denominados Mycoplasma gallicepticum (Mg), Mycoplasma sinoviae (Ms), Mycoplasma meleagridis (Mm) y Mycoplama iowa, productor este último de muerte embrionaria en pavos. Si bien la infección por Mg afecta tanto a pollos como a pavos, en estos últimos desarrollan un cuadro más severo que se denomina sinusitis infecciosa (Fatummb, 1984; Kleven, 2008; Kleven & Ferguson, 2008). La transmisión directa (horizontal) de aves enfermas a susceptibles se realiza a través de secreciones oculares y nasales y es la forma más común de infección. Por otra parte, la contaminación de los equipos, el alimento y el agua de bebida, incluyendo a las aves silvestres juegan un papel importante como fuentes de infección y reservorio de Mg (Bradbury et al., 2000; Kang et al., 2002, Kleven, 2008; Kleven & Ferguson, 2008; Luttrell et al., 1992). Las reproductoras contaminadas cumplen el rol de reservorio y fuente de transmisión de la enfermedad a la descendencia por vía transovárica (vertical) (Kleven, 2008; Kleven & Ferguson, 2008). En la República Argentina, Colusi & Menchaca (1965) realizaron la primera descripción de la sinusitis de los pavos, siendo reafirmada en 1995 por Brandetti et al. (1995).

El objetivo de éste trabajo fue la descripción epizootiológica, patológica y etiológica de un caso de sinusitis infecciosa en pavos producida por Mg y Ms.

Materiales & Métodos
En el mes de abril del año 2010 llegaron al Laboratorio de Diagnóstico de las Enfermedades de las Aves y los Pilíferos de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNLP, con fines diagnósticos, 2 pavos de sexo hembra traídos por el propietario de una granja familiar, ubicada en la localidad de Berisso, Pcia.de Bs, Argentina. Los animales tenían 4 meses de edad y eran parte de un lote de 30 pavos que convivían junto a 30 gallinas con las que compartían el agua y el alimento que se les suministraba.

Las manifestaciones clínicas comenzaron a los 3 meses de vida y se caracterizaron por decaimiento, graves trastornos respiratorios tales como disnea, boqueo, rales, secreción oculonasal y una marcada sinusitis bilateral. La morbimortalidad fue del 25%. Desde el inicio del cuadro las aves fueron medicadas con tilosina a razón de 2g/l y enrofloxacina a 3 ml/l, sin obtener resultados beneficiosos.
Se extrajo sangre de la vena axilar con el objeto de obtener suero para realizar pruebas serológicas de aglutinación rápida en placa para Mg y Ms (Fatummb, 1984). Se realizó la necropsia de los pavos remitidos. Se tomaron muestras para estudios histopatológicos de nariz, tráquea, pulmón y órganos viscerales. Los mismos se fijaron en formol al 10% tamponado, se incluyeron en parafina. Se utilizó la coloración de hematoxilina y eosina.

Para la realización de la técnica de PCR en tiempo real, se seleccionaron muestras de tráquea y articulaciones. El ADN fue extraído utilizando el kit DNEASY BLOOD & TISSUE KIT de Quiagen® siguiendo los pasos recomendados por el fabricante. Los primers utilizados fueron el MS Fw 5´- CTG TTA TAG CAA TTT CAT GTG GTG -3´ Rv 5´ - CTG TTG TAG TTG CTT CAA CTT GTC- 3´ y MG Fw 5´ - CTA GAG GGT TGG ACA GTT ATG- 3´ Rv 5´ - GCT GCA CTA AAT GAT ACG TCA AA -3´ El volumen final de la reacción de PCR fue de 25 µl compuesto por 12,5 µl de Biorad iQTM SYBR GREEN Supermix®, 3 µl de muestra, 1 µl de cada uno de los primers y, 7,5 µl de agua destilada. Como control positivo se utilizó ADN conocido de Mg y Ms y como control negativo se utilizó agua destilada estéril. El protocolo utilizado fue el siguiente: un ciclo inicial de 94 ºC durante 30 segundos, un ciclo de 45 repeticiones de 94ºC 10 segundos, 58ºC 30 segundos, 72ºC 30 segundos, un tercer ciclo de 72ºC 5 minutos, un ciclo final de 121 repeticiones con una temperatura inicial de 73ºC y una temperatura final de 85ºC durante 30 segundos (Callison et al., 2006).

Los hisopados de tráquea y articulación fueron sembrados en tubos conteniendo caldo Frey y placas con agar Frey (Frey et al., 1968), con 14% de suero porcino suplementado con 1% de nicotinamide adenina dinucleotido (NAD), 1% de HCl cisteína necesarios para el crecimiento de Ms. Se adicionó 1000000 UI/lt penicilina G y 5% de acetato de talio para prevenir el crecimiento de microorganismos oportunistas. Las muestras se incubaron en microaerofilia a 37ºC, observándolas diariamente por evidencia de crecimiento de micoplasmas (Frey et al., 1968).
Resultados & Discusión
A la necropsia se observó que los senos infraorbitarios y la tráquea contenían exudado seromucoso y al corte de los cornetes nasales se percibió la presencia de exudado caseoso. En la conjuntiva palpebral exudado seroso de tipo espumoso. Los pulmones presentaban áreas consolidadas de color rojo vinoso y los sacos aéreos estaban opacos. El estudio histopatológico mostró que los cornetes nasales se observaron congestivos, hemorrágicos y con exudado en la luz, con un marcado desprendimiento epitelial y la presencia de exudado inflamatorio compuesto de células mononucleares y polimorfonucleares. La tráquea presentó un moderado infiltrado linfocitario subepitelial en forma focal y difusa. En los bronquios también se visualizó marcada hemorragia e infiltrado linfocitario subepitelial en forma focal y difusa. En el pulmón se observaron amplias zonas de consolidación con acumulo linfocitario en el parénquima y en la zona peribronquial.

Los sueros fueron descomplentados a 56ºC durante 60 minutos y enfrentados a antígenos comerciales contra Ms (MS RPA-Test. Solei SARL®) y Mg (MG RPA-Test. Solei SARL®) resultando positivos por aglutinación rápida para ambas enfermedades. Los estudios bacteriológicos de los hisopados traqueales como de los articulares permitieron aislar colonias de Mycoplasma synoviae. A través de la prueba de PCR en tiempo real, se obtuvieron los siguientes resultados: hisopado vías respiratorias positivo a Mg y Ms; e hisopado articular positivo a Mg. Se pudo aislar solo Ms de los hisopados de tráquea y articulación.

El sistema de crianza de los pavos en conjunto con las gallinas y el acceso de aves silvestres implican un potencial factor de contagio para los pavos. (Ley, 2008; Kleven et al., 2004; Luttrell et al., 1992). Se podría inferir que la sumatoria de estos factores pueden actuar como medio de transmisión y mantenimiento de los Micoplamas.

Se ha demostrado que las aves silvestres y de traspatio fueron positivas a Mycoplasma gallisepticum y a Mycoplasma sinoviae mediante pruebas de aglutinación rápida e inhibición de la hemoaglutinación. Mediante estudios bacteriológicos y la técnica de PCR se ha comprobado que las gallinas ponedoras de huevos para consumo son las más afectadas por los micoplasmas (Bradbury et al., 2000; Bradbury, 2001; Kang et al., 2002; Kleven, 2008; Luttrell et al., 1992; Sanei et al., 2007)

Se reconoce al Ms como productor de signos clínicos respiratorios tales como aerosaculitis, neumonía, artritis purulenta y la caída en la producción de huevos en los pavos (Fatummb, 1984, Khehra et al., 1999). En la mayoría de las descripciones de sinusitis infecciosa de los pavos se menciona al Mg como causante de la enfermedad. Sin embargo, a través de pruebas serológicas se determinó la presencia de anticuerpos contra Ms, aunque no se lo pudo involucrar como potencial patógeno (Fatummb, 1984; Kleven et al., 2004).

Luttrell et al. (1992) describieron un caso en pavos liberados después de la crianza en corrales. Una de las aves, que cursaba con signología clínica propia de sinusitis infecciosa fue serológicamente positiva a Ms y Mg y se aisló Ms de los senos infraorbitarios, llegando a la conclusión de que éste era el agente productor de la enfermedad. El caso que nos ocupa es similar al descripto por Luttrell et al. (1992), en el que se aislaron ambos micoplasmas y podemos inferir una interacción de ambos en el desarrollo de la enfermedad.

Ley (2008) realizó estudios en aves silvestres y de traspatio demostrando que los mismos eran positivos a Mg y a Ms. Por otra parte, se ha comprobado que las gallinas ponedoras de huevos para consumo son las más afectadas por los micoplasmas (Bradbury, 2001).

Conclusiones
A través de los signos clínicos, las lesiones macroscópicas e histopatológicas, de las pruebas serológicas, bacteriológicas y de PCR se logró arribar al diagnóstico definitivo de un caso de sinusitis infecciosa producida por Mg y Ms.
Por otro lado, queda demostrada la inconveniencia de criar aves de distintas especies en un mismo lugar ya que aunque no conozcamos el origen de la infección, se puede atribuir a las gallinas el rol de portadoras crónicas y las causantes de la transmisión de los agentes infecciosos a los pavos.
Si bien la bibliografía indica que la sinusitis infecciosa del pavo es producida por Mg, es necesario realizar estudios complementarios a los efectos de determinar si el Ms actuó como patógeno primario junto a Mg o si sólo estaba presente en el cuadro descripto como agente secundario o potenciador del Mg.

Bibliografía
Bradbury JM, Dare CM, Yavari CA, Forrester A. 2000. Evidence of Mycoplasma gallisepticum in British wild birds. p. 253. In: Abstracts of the 13th Congress of the International Organization for Mycoplasmology, Fukuoka, Japan.
Bradbury JM. 2001. The mycoplasma a wolf in sheep's clothing- Department of Veterinary Pathology. University of Liverpool. p. 5. In: Proceedings of the 24th Technical Turkey Conference.
Brandetti E, Linzitto OR, Menendez NA, Radman NA, Sato H, Herrero Loyola MA. 1995. Descripción de un caso de sinusitis en el pavo. Therios 24:230-232.
Callison SA, Riblet SM, Sun S, Ikuta N, Hilt D, Leiting V, Kleven SH, Suarez Dl, García M. 2006. Development and validation of a real-time taqman polymerase chain reaction assay for the detection of Mycoplasma gallisepticum in naturally infected birds. Avian Dis. 50:537-544-
Colusi AD & Menchaca ES. 1965. Sinusitis Infecciosa de los pavos, su comprobación en la República Argentina. Rev. Med. Vet. 1: 46.
Fatummb OO. 1984, Infectious Sinusitis in Turkeys at Ibadan, Nigeria. Avian Dis. 28 (3):734-736.
Frey MLL, Hanson LP, Anderson DP. 1968, A medium for the isolation of avian mycoplasmas. American 6- Frey MLL, Hanson. Vet Res 19:2163-2171.
Kang MS, Gazdzinski P, Kleven SH. 2002. Virulence of recent isolates of Mycoplasma synoviae in turkeys. Avian Dis. 46:102.110.
Khehra RS, Jones RC, Bradbury JM. 1999. Dual infection of turkey poults with avian pneumovirus and Mycoplasma synoviae. Avian Pathol. 28:401-404.
Kleven SH & Ferguson-Noel N. 2008. Mycoplasma synoviae infection. pp. 845-856. En Diseases of Poultry, 12va ed, Saif YM, Fadly AM, Glisson JR,McDougald LR, Nolan LK, Swayne DE (eds). Blackwell Publishing Ltd., Oxford, UK.
Kleven SH, Fulton RM, Garcia M, Ikuta VN, Leiting VA, Liu T, Ley DH, Opengart KN, Rowland GN, Wallner-Pendleton E. 2004. Molecular characterization of Mycoplasma gallisepticum isolates from turkeys. Avian Dis. 48:562-569.
Kleven SH. 2008. Mycoplasmosis. pp. 54-64. In: A Laboratory Manual for the Isolation, Identification and Characterization of Avian Pathogens. Dufour-Zavala L, Swayne DE, Glisson JR, Pearson JE, Reed WM, Jackwood MW, Woolcock PR (eds.). American Association of Avian Pathologists, Athens, GA, USA.
Ley DH. 2008. Mycoplasma gallisepticum infection. pp. 807-845. In: Diseases of Poultry. Saif YM, Fadly AM, Glisson JR, McDougald LR, Nolan LK, Swayne DE (eds). Blackwell Publishing Ltd., Oxford, UK.
Luttrell MP, Kleven SH, Mahnke GM. 1992. Mycoplama synoviae in a Released Pen-Raised Wued Turkey. Avian Dis. 36:169-171.
Osorio C, Fletcher OJ, Abdul-Aziz T, Gonder E, Tilley B, Ley DH. 2007. Pneumonia of turkey breeder hens associated with Mycoplasma synoviae. Avian Dis. 51:791-796.
Sanei B, Barnes HJ, Vaillancourt JP, Ley DH. 2007. Experimental infections of chickens and turkeys with Mycoplasma gallisepticum reference strain S6 and North Carolina field isolate RAPD type B. Avian Dis. 51:106-111.
Temas relacionados
Autores:
Miguel Angel Herreo Loyola
Universidad Nacional de La Plata - UNLP
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Carlos Daniel Gornatti Churria
UC Davis - University of California
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Miguel Piscopo
Universidad Nacional de La Plata - UNLP
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Miguel A. Petruccelli
Universidad Nacional de La Plata - UNLP
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