Estudio de campo determinación del inicio y duración de la inmunidad de la fracción gallibacterium anatis inducida por una vacuna comercial contra gallibacterium a. y la enfermedad de coriza en gallina de postura.
Publicado: 16 de julio de 2012
Por: Jonatan Nava Jacal, Ingrid Borja López, Lilia Castellanos Novoa, Carlos González Hernández, Sergio Carrasco Carrasco, Fernando Galindo Ramírez.
Resumen
Para este estudio se formaron 3 grupos experimentales, el grupo 1 recibió la aplicación de la vacuna inactivada contra Gallibacterium anatis y Avibacterium paragallinarum a las semanas 4 y 8, el grupo 2 recibió una dosis a la semana 4 y el grupo 3 no recibió la vacuna, permitiendo evaluar la determinación del inicio y duración de la inmunidad de la fracción Gallibacterium a. por medio de un monitoreo serológico determinando los títulos de anticuerpos por medio de la prueba de ELISA. La evaluación estadística se realizó por la prueba de análisis de varianza con un nivel de probabilidad de 0.05. Los resultados serológicos muestran que los títulos de anticuerpos contra Gallibacterium anatis tuvieron un incremento
importante a partir de las 3 semanas post vacunación y que la duración de la Inmunidad por medio de serología se evidenció hasta las 9 semanas post vacunación.
Palabras clave: anticuerpo, ELISA, Gallibacterium anatis., inmunidad, serológico.
INTRODUCCIÓN
La enfermedad producida por Gallibacterium anatis (GA) es un cocobacilo gram (-), no móvil, encapsulado. Este microorganismo afecta principalmente el aparato reproductor de las aves de postura, siendo más susceptibles de manifestar la enfermedad entre las 22 y 34 semanas causando una notable disminución del 20 al 30% en la producción de huevo, lo que significa una cuantiosa merma para la industria avícola nacional e internacional. (1 y 2).
La enfermedad producida por Gallibacterium anatis (GA) es un cocobacilo gram (-), no móvil, encapsulado. Este microorganismo afecta principalmente el aparato reproductor de las aves de postura, siendo más susceptibles de manifestar la enfermedad entre las 22 y 34 semanas causando una notable disminución del 20 al 30% en la producción de huevo, lo que significa una cuantiosa merma para la industria avícola nacional e internacional. (1 y 2).
Recientemente fue establecido como un nuevo género dentro de la familia Pasteurellaceae. Antes había sido denominada como Pasteurella anatis, Pasteurella hemolytica like o Actinobacillus salpingitidis; pero con los recientes avances sobre el estudio del genoma se logró determinar su verdadera taxonomía. A la fecha son muy pocas las investigaciones que se han realizado sobre este microorganismo y las técnicas diagnósticas con las que se cuentan son limitadas. (3, 4 y 5).
Debido a que bajo condiciones de campo existen una serie de factores que influyen en la respuesta inmune en las gallinas es necesario evaluar el inicio y duración de la inmunidad de la fracción Gallibaterium anatis de una vacuna inactivada que confiere protección contra Gallibacterium anatis y Avibacterium paragallinarum aplicada a gallinas comerciales en condiciones de campo.
MATERIALES Y METODOS
De la parvada general fueron separados 3 grupos al azar: El primer grupo (identificado como Grupo 1) de 32,952 gallinasy los grupos 2 y 3 cada uno de ellos con 35 gallinas, en este estudio se incluyeron gallinas clínicamente sanas.
Las gallinas fueron inmunizadas con 0.5 ml de las vacunas emulsionadas comercial que contenían la fracción de Gallibacterium anatis y Avibacterium paragallinarum, siendo aplicada en la parte media de la pechuga vía intramuscular. El grupo 1 recibió la vacuna comercial a las semanas 4 y 8 semanas de edad por vía intramuscular con una dosis de 0.5 ml en la parte media de la pechuga. El grupo 2 recibió la vacuna a la semana 4, por la misma vía y con la misma dosis que el grupo 1. El grupo 3 no recibirá ninguna vacuna de esta fracción y nos permitió evaluar el comportamiento de las gallinas sin vacunación. Tabla1.
Se muestrearon al azar 30 gallinas de los grupos 1, 2 y 3 a partir de la 4 semana hasta la semana 14; obteniéndose la sangre colectada en envases de plástico los cuales se mantuvieron a temperatura ambiente hasta separarse la fase sérica, la cual fue nuevamente colectada en microtubos de centrífuga para enviarse al laboratorio para determinar los títulos de anticuerpos contra la enfermedad de Gallibacterium anatis se realizó por medio de las técnicas de Inmuno Ensayo Enzimático (ELISA) (Enzime Link Immuno Assay) de acuerdo al procedimiento realizado por el Laboratorio de Investigación y Desarrollo de Boehringer Ingelheim Vetmedica S.A. de C.V.
Métodos de Estadística
La evaluación estadística de los títulos de anticuerpos se determinó por la prueba de ELISA para Gallibacterium anatis, se realizó por la prueba de análisis de varianza entre los grupos y muestreos con un nivel de probabilidad de 0.05. La comparación de medias se llevó a cabo por medio del Análisis de Varianza y la prueba de Tukey utilizando el programa estadístico Sigmastat v 2.0, SPSS, Inc. y JMP™ v 6.0, Instituto SAS, Inc.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados serológicos muestran que los títulos de anticuerpos contra Gallibacterium anatis tuvieron un incremento importante a partir de las 3 semanas post vacunación, sin embargo es importante mencionar que a partir de las 2 semanas ya comienza a observarse una respuesta, esto para los 3 Biogrupos de esta bacteria, se puede observar la diferencia entre el grupo 1 y el grupo 2 después de la segunda vacunación a las 8 semanas de edad a partir de las cuales los títulos del Grupo 1 es mayor que los del Grupo 2. Es importante mencionar que para los 3 Biogrupos los títulos del Grupo 3 se mantuvieron por debajo de un título de 3, sin evidenciarse desafío de campo contra Gallibacterium anatis de ningún biogrupo durante las primeras 13 semanas. Los valores máximos de los Grupos 1 y 2 se alcanzaron entre la semana 9 y 12. Fig. 1, 2 y 3.
A la semana 14 se observa desafío de campo de todos los Biogrupos de Gallibacterium anatis. Sin embargo es muy importante destacar que se puede observar que los títulos serológicos contra el Biogrupo 1 y 2 fueron casi siempre más altos en el Grupo 1 y en el Grupo 2 comparándose con el Grupo 3 control negativo que no recibió vacuna.
A pesar del desafío de campo el efecto de la vacunación es evidente al observarse en general un aumento en los títulos de anticuerpos producidos por la vacunación ylos cuales se pueden observar con un pico en general a las 3 semanas después de la administración de la vacuna.
El análisis estadístico muestra que la respuesta serológica contra los 3 Biogrupos de Gallibacterium anatis fue mayor en el Grupo 1 el cual recibió 2 inmunizaciones contra este agente, seguido por el Grupo 2 el cual recibió solo una vacunación contra este agente.
Después de la administración de la vacuna en el grupo 1 para el Biogrupo 1 se tienen valores positivos a la semana 6 de edad (2 semanas post vacunación); mientras para el Biogrupo 2 el inicio de la inmunidad de acuerdo a los resultados serológicos fue a las semana 7 (3 semanas post vacunación) teniendo diferencia estadística significativa con valores protectivos. Para el Biogrupo 4 se comienzan a presentar valores positivos a la semana 7. Para todos los Biogrupos los valores comienzan a disminuir a la semana 13 sugiriendo que la duración de la inmunidad es de aproximadamente de 7 semanas; sin embargo esto no pudo ser validado en este estudio debido a la presencia de anticuerpos en el grupo control negativo el cual presenta resultados serológicos positivos que nos sugieren un desafío de campo con los 3 Biogrupos a la semana 14.
Para determinar el Inicio y Duración de la inmunidad de la Fracción de Gallibacterium anatis se realizó el análisis de varianza de los títulos serológicos semanales del Grupo 2 mostrando diferencias significativas entre semanas.
Al realizar el análisis estadístico de los títulos serológicos para determinar diferencias ente el Grupo 3 (control negativo) y el Grupo 2 contra el Biogrupo 1 se encontró que existió diferencia estadística significativa a partir de la semana 6 y hasta la semana 14 en que el aumento de anticuerpos sugiere un desafío de campo.
El análisis estadístico para determinar diferencia entre el Grupo 3 y el Grupo 2 de los títulos serológicos contra el Biogrupo 2 mostró que existió diferencia estadística significativa a partir de la semana 6 de edad y hasta la semana 14 en el que el aumento de anticuerpos sugiere un desafío de campo. A partir de la semana 14 de edad no se encontró diferencia estadística significativa. Contra el Biogrupo 4 el análisis estadístico mostró que existió diferencia estadística significativa a partir de la semana 6 hasta la semana 12 excepto a la semana 7. A partir de la semana 14 no hay diferencia estadística.
Este análisis estadístico nos indica que en general hubo diferencia estadística significativa en la respuesta serológica del Grupo 3 contra el Grupo 2 en los 3 Biogrupos a partir de las 2 semanas post vacunación y hasta las 9 o 10 semanas post vacunación en las que los resultados sugieren un desafío de campo de esta bacteria.
Los datos de mortalidad también nos permiten confirmar la seguridad del Producto de Investigación veterinaria. En la Figura 10 se puede observar la mortalidad elevada en el Grupo 1 a las semanas 7 y 13, esto fue debido al sacrificio de gallinas por selección para la producción. En el Grupo 3 se observa aumento de la mortalidad a la semana 9 esto, debido a que se eliminó una gallina del grupo ya que presentaba signos relacionados a la Enfermedad de Marek.
El análisis estadístico de la comparación del porcentaje de mortalidad semanal entre los Grupos 1, 2 y 3 de la semana 1 a la semana 14 muestran que no existe diferencia estadística significativa entre los 3 grupos, lo cual nos indica que el producto fue seguro sin elevar el porcentaje de mortalidad al administrarse a la semana 4 a los Grupos 1 y 2; y repitiéndose la administración a la semana 8 en el Grupo 1.
CONCLUSION
Los resultados serológicos obtenidos en este estudio sugieren que respecto al Inicio y Duración de la Inmunidad de la fracción de Gallibacterium anatis, la respuesta serológica comienza a las 3 semanas después de la vacunación, encontrándose una media de títulos protectivos a las 3 semanas post vacunación para los Biogrupos 1 y 2; y hasta la semana 7 post vacunación para el Biogrupo 4, terminando la inmunidad hasta las 9 semanas post vacunación, siendo administrada la vacuna comercial aplicada a gallinas comerciales en condiciones de campo.
Los resultados serológicos son mayores cuando se administra un calendario reforzado con re inmunización contra Gallibacterium anatis.
El análisis comparativo de mortalidad entre grupos nos demuestra que no existe diferencia en ambos parámetros al comparar los grupos después de la administración de Gallibacterium anatis y Avibacterium paragallinarum aplicada a allinas comerciales en condiciones de campo.
REFERENCIAS
1.- Castellanos L., Vazquez M., Carrillo A., Campogarrido R. Protección conferida por una vacuna comercial contra Gallibaterium anatis en aves de postura comercial. Boehringer Ingelheim Vetmedica S.A. de C.V. Julio 2006. Año 5 Número 1.
2.- Campogarrido R., Vázquez M., González C. y Sivanandan V.Impacto de la Pasterella haemolytica en parvadas comerciales. Memorias de la XXVII Convención Anual ANECA, Puerto Vallarta, México. 2002.
3.- Vázquez M., Campogarrido R., González C. y Sivanandan V. Isolation and identification of Pasterella haemolytica aviar. Memorias de la XXVII Convención Anual ANECA, Puerto Vallarta, México. 2002.
4.- González C., Vásquez M. Campogarrido R., Humberto R. and Sivanandan H. A new and emerging disease of chickens caused by Pasterell Hemolytica-like. Program and Abstracts of XIII Congress of the world veterinary poultry Association. Denver 2003 19-23. Pag. 60.
5.- Vázquez M., Campogarrido R., Rodríguez H., Sivanandan V., González C.. A new and emerging disease of chickens caused by Pasterella haemolytica-like. Organisms: Prevalence, Isolation and characterization . Program and Abstracts of XIII Congress of the world veterinary poultry Association. Denver July 19-23. Pag 121.
SOP 14-084 Desarrollo de protocolos para estudios clínicos y no clasificados de productos farmacéuticos y biológicos
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Autores:
Boehringer Ingelheim
Laboratorio Biosintesis
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