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Enfermedad gumboro

Caracterización molecular del virus de la enfermedad de gumboro en casos diagnosticados en América Latina en 2010

Publicado: 20 de octubre de 2011
Por: Taylor Barbosa, E Turpin, Renato Verdi, Maritza Tamayo - Pfizer Poultry Health. 1040 Swabia Ct, Durham, NC, 27560. USA.
Resumen

Se estudió la presencia del virus de la enfermedad de Gumboro (IBDV), en granjas de pollos de engorde y gallinas ponedoras en América Latina. Por medio de tarjetas FTA, se enviaron muestras sospechosas de toda la citada región, para su procesamiento en Estados Unidos. Durante 2010, se recibieron 187 muestras de varios de estos países, de las cuales 86 resultaron positivas a través de RT-PCR. Se secuenciaron las regiones variables de la proteína viral 2 (VP2) de todas las muestras positivas. En los casos en que se encontraron aislamientos virales idénticos en una misma granja se incluyeron sólo una vez en el análisis filogenético. La mayoría de los aislamientos (52%) fue identificada como cepas variantes. Los virus clásicos y muy virulentos (vvIBDV) representaron 8.5% de las muestras. Se identificaron cepas similares a virus vacunales en el 31% de las muestras. Nuestro propósito es continuar prestando estos servicios de diagnóstico en los próximos años, cuyos resultados servirán como base para análisis epidemiológicos de la presencia del virus de la enfermedad de Gumboro en América Latina.
Palabras Clave: Enfermedad de Gumboro, IBDV, Secuenciación, Diagnóstico, América Latina.

Introducción
La enfermedad de Gumboro (infección de la bolsa de Fabricio, IBF, enfermedad infecciosa de la bolsa o IBD por sus siglas en inglés) es una enfermedad viral aguda y altamente contagiosa que afecta aves jóvenes y causa inmunodeficiencia y mortalidad (Toro et al., 2009; van den Berg et al., 2000; Di Fabio et al., 1999). El genoma viral codifica para 5 proteínas, siendo la proteína viral 2 (VP2) la principal proteína estructural de la cápside, donde están  localizados los epítopos neutralizantes (Letzel et al., 2007; Lee et al., 2006). La caracterización molecular de la IBDV se puede hacer a través del mapeo de la región variable de la proteína VP2. Actualmente, la determinación de la secuencia de nucleótidos ("secuenciación") es el método más utilizado para este tipo de análisis (Jackwood et al., 2009). Pfizer Poultry Health pone a la disposición del sector avícola servicios de diagnóstico al nivel mundial. Entre las herramientas específicas para el virus de la enfermedad de Gumboro, sobresale la metodología IPA (análisis de imágenes histológicas digitales) para determinar el nivel de lesión en la bolsa de Fabricio y la secuenciación de muestras de campo. En este trabajo se analizan las muestras recibidas durante 2010 para su caracterización por secuenciación.

Material y Métodos
Durante 2010 se protocolizaron 187 muestras recolectadas de pollos de engorde o de gallinas ponedoras en el laboratorio de Pfizer Animal Heatlh - Global Poultry, Durham, NC para su posterior envío a la Universidad de Ohio para la identificación del IBDV. Estas muestras representan diversos países de América Latina y el Caribe, y fueron recolectadas de aves en condiciones de campo, a través de la impresión de la bolsa de Fabricio en tarjetas FTA (N. del T.: tarjetas que permiten la recolección y transporte de ADN a temperatura ambiente durante varios días). Asimismo, se incluyeron las indicaciones pertinentes para la preservación del material genético y su transporte adecuado (Moscoso et al., 2006). Se secuenció y analizó la región variable de la proteína viral 2 (VP2) de todas las muestras por medio del programa de cómputo (software) Lasergene 8 (DNAStar - MegAlign) (Burland, 2000). La región meta posee 234 aminoácidos que cubren toda la región variable de la VP2 (Lee et al., 2006). Los análisis se realizaron utilizando el método Clustal W y se reportaron a través de árboles filogenéticos y tablas de identidad.

Resultados y Discusión
Del total de 187 aislamientos de IBDV procedentes de muestras de campo en América Latina en 2010, 86 fueron positivas para a RT-PCR (reacción en cadena con polimerasa y transcriptasa inversa). Todas fueron secuenciadas y analizadas. Las muestras oriundas de la misma procedencia y con secuencia idéntica de aminoácidos constan sólo una vez en el árbol filogenético (Figura 1). 
Figura 1. Árbol filogenético de los aislamientos latinoamericanos de IBDV en 2010
 
La gran mayoría de las muestras se caracterizó como variante. Estas cepas fueron identificadas en Colombia, Venezuela, Perú y Jamaica. Se identificaron muestras altamente virulentas sólo en Colombia. En este mismo país, aves que recibieron vacunas del tipo complejo antígeno-anticuerpo presentaron el virus vacunal re-aislado e identificado. Actualmente, estamos procesando muestras procedentes de granjas de Argentina, Brasil, Ecuador. Paraguay y América Central.
Pocos son los trabajos de caracterización molecular de IBDV en América Latina. La mayoría de los trabajos se limita a muestras recolectadas en un solo país. La caracterización de 41 muestras de IBDV brasileñas, aisladas entre 1997 y 2005, demostró que el 60% de éstas fueron identificadas como altamente virulentas ("very virulent" o vvIBDV) (Fernandes et al., 2009). En otro trabajo se secuenciaron 113 aislamientos de 18 países, 8 de ellos latinoamericanos, todas las muestras eran de casos clínicos con alta mortalidad, la gran mayoría de las cepas fue considerada vvIBDV con poca variación entre ellas (Jackwood & Sommer-Wagner, 2007). Estos resultados difieren de los encontrados en el presente trabajo, en el cual, la mayoría de los casos de campo está asociada con cepas variantes. Este hallazgo podría evidenciar el aumento de la incidencia de cepas variantes en América Latina. Consideramos necesario continuar con los trabajos de identificación de las cepas de virus de la enfermedad de Gumboro, con el fin de comprobar dicha tendencia. Esto sería de gran beneficio para el control de la enfermedad, ya que se podrían diseñar programas de vacunación específicos para cada una de las situaciones encontradas en los diversos países.

Conclusión
Este estudio demuestra la variabilidad de los aislamientos de virus de la Enfermedad de Gumboro en América Latina. La mayoría de las muestras se identificó como cepas variantes. Continuaremos expandiendo la aplicación de esta herramienta de diagnóstico, con el objetivo de mantener actualizado nuestro banco de datos, que estará disponible para futuras investigaciones epizootiológicas en América Latina.

Bibliografía
  • Burland TG. 2000. Dnastar''''s Lasergene sequence analysis software. Methods Mol. Biol. 132:71-91.
  • Di Fabio J, Rossini LI, Eterradossi N, Toquin MD, Gardin Y. 1999. European-like pathogenic infectious bursal disease viruses in Brazil. Vet. Rec. 145:203-204.
  • Fernandes, MJ, Simoni IC, Vogel MG, Harakava R, Rivas EB, Oliveira MB, Kanashiro AM, Tessari EN, Gama NM, Arns CW. 2009. Molecular characterization of brazilian infectious bursal disease virus isolated from 1997 to 2005. Avian Dis. 53:449-54.
  • Jackwood DJ & Sommer-Wagner S. 2007. Genetic characteristics of infectious bursal disease viruses from four continents. Virology. 365:369-75.
  • Jackwood DJ, Sommer-Wagner SE, Stoute AS, Woolcock PR, Crossley BM, Hietala SK, Charlton BR. 2009. Characteristics of a very virulent infectious bursal disease virus from California. Avian Dis. 53:592-600.
  • Lee CC, Ko TP, Chou CC, Yoshimura M, Doong SR, Wang MY, Wang AH. 2006. Crystal structure of infectious bursal disease virus vp2 subviral particle at 2.6a resolution: implications in virion assembly and immunogenicity. J. Struct. Biol. 155:74-86.
  • Letzel T, Coulibaly F, Rey FA, Delmas B, Jagt E, van Loon AA, Mundt E. 2007. Molecular and structural bases for the antigenicity of vp2 of infectious bursal disease virus. J. Virol. 81:12827-12835.
  • Moscoso H, Alvarado I, Hofacre CL. 2006. Molecular Analysis of infectious bursal disease virus from bursal tissues collected on fta filter paper. Avian Dis. 50:391-396.
  • Toro H, Effler JC, Hoerr FJ, van Ginkel FW. 2009. Pathogenicity of infectious bursal disease virus variant Al2 in young chickens. Avian Dis. 53:78-82.
  • van den Berg TP, Eterradossi N, Toquin D, Meulemans G. 2000. Infectious bursal disease (Gumboro disease). Rev. Sci. Tech. 19:509-543.
 
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Autores:
Maritza Tamayo Salmoran
Instituto Nacional Avicola
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Taylor Barbosa
MSD Perú
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