Rizobios que nodulan la soja

El cultivo de la soja (Glycine max L. Merr) ocupa en la actualidad de aproximadamente 16 millones de ha. Esta leguminosa, de la misma manera que la gran mayoría de los integrantes de esta familia, establecen simbiosis con bacterias Gram (-) que se encuentran en los suelos que se conocen como rizobios. Como resultado de esta interacción, la planta desarrolla los nodulos que son estructuras globosas dentro de las cuales, los rizobios en presencia de una baja tensión de oxígeno y por medio de una enzima, la nitrogenasa, fijan N2 del aire, aportando la planta carbohidratos con el fin de proveer de la energía que requiere la reacción.

Hasta no hace mucho tiempo solo Bradyrhízobium japonicum era reconocido como el simbionte de la soja. Sin embargo, la realización de nuevos aislamientos de rizobios de los suelos de la China, sitio de origen de la soja, y la disponibilidad de técnicas moleculares, ha permitido identificar otras seis especies que nodulan la soja. Bradyrhizobium liaoningense, Bradyrhizobium elkaníi, Mesorhízobium thianshanense, Sinorhizobium fredii. Sinorhizobium xingiangensis, Rhizobium spp. NGR234 (Batatti P.A., 2004), de todas estas especies solo B japonicum y S. elkanii han demostrado ser eficientes fijadores de nitrógeno y por ello gran parte de los inoculantes contienen estas especies. Sin embargo, constantemente se aislan e identifican nuevas especies de rizobios y/ o aislamientos en los que se busca que tengan características superiores a las estirpes en uso. Por todo esto, la diversidad de los rizobios nativos presentes en el centro de diversificación de especies del NOA o la diversidad que se genera en los suelos a partir de las cepas inoculadas es importante.
Por ello el objetivo de este trabajo es evaluar en suelos nativos del NOA la presencia y diversidad de los rizobios que noduln la soja.

Materiales y métodos

Se tomaron muestras de suelo de sitios geoposicionados. En todos los casos las muestras fueron compuestas y una vez extraídas se conservaron en bolsas plásticas a 4°C hasta el momento del procesamiento.
Los aislamientos de risobios se llevaron a cabo a partir de plantas de soja inoculadas con diluciones de suelo. Con este fin una alícuota de suelo se suspendió en agua y se agitó a 150 rev. min"1 por espacio de 1 h. Luego de esto, semillas esterilizadas superficialmente se regaron con las diluciones de la suspensión de suelo y se sembraron en Jarras de Leonard modificadas, con vermiculita como medio de sostén regadas con solución nutritiva libre de nitrógeno (Vincent, 1970). El cultivar de soja utilizado como planta trampa fue el cultivar promiscuo Mamloxi y el cvar comercial A4404 RR y Vigna spp.

Los aislamientos se realizaron a partir de los nodulos de soja y Vigna. Estos se esterilizaron superficialmente con alcohol 50% durante 1 min. y en hipoclorito de Na 4 g/lí durante 1 min.. (Balatti and Pueppke, 1990). Los nodulos estériles se maceraron en un volumen de agua estéril, sembrándose una alícuota en medio YEM. Las placas se incubaron en estufa a 28°C durante 10 dias.

Los aislamientos se caracterizaron en base a la velocidad de crecimiento, su capacidad para modificar el pH del medio, crecimiento en presencia de CINa, producción de melantna (Cubo et al., 1988)., resistencia intrínseca a cloranfenicol, eritromicina, tetraciclina, stereptomicina, ampicilina, rifampicina y kanamicina, utilización de fuentes carbonadas como Arabinosa, Galactosa, Glucosa, Lactosa. Maltosa, Manitol, Fructuosa, Sacarosa, Sorbosa. La diversidad de los organismos se esta analizando por medio de una reacción de fingerprint PCR-BOX. Además, se identificaron los aislamientos por medio de la reacción de multiplex PCR {Pastorino, 2003)

Conclusiones

Los resultados muestran que los suelos nativos contienen una considerable diversidad de rizobios, albergando tanto estirpes de crecimiento rápido como de crecimiento lento. El hecho de que algunos rizobios son resistentes a la tetraciclina, son de crecimiento lento en medio de cultivo, no producen melanina y contienen en el genoma la región RS sugiere que los mismos muy probablemente son aislamientos del género Bradyrhizobium, Los fingerprint de las estirpes nativas comparten algunas bandas con los fingerprint de las estirpes comerciales de rizobios. Aquellos que producen melanina, que tienen tiempos de generación cortos y que son sensibles a la tetraciclina es posible pertenezcan al género Rhizobiutn o Sinorhizobium