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Caracterización y secuenciación de un virus de Newcastle genotipo XII aislado de un pavo real en Perú

Publicado: 6 de octubre de 2015
Fuente: Farvet
Aquí se presenta la primera secuencia completa y la caracterización biológica de un virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) aislado de un pavo real en Sudamérica (NDV/peacock/Peru/2011). Este aislado, clasificado como genotipo XII en la clase II, resalta la necesidad de incrementar la vigilancia de especies de aves no comerciales.
El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es capaz de infectar a >250 especies de aves en todo el mundo, también es responsable de una enfermedad respiratoria aguda y muy contagiosa. NDV (géneroAvulavirus, familia Paramixoviridae) posee un genoma ARN de cadena simple con polaridad negativa. Las aves silvestres han sido implicadas en la propagación de la enfermedad a aves domésticas (1). Basados en el análisis de la secuencia del gen de la proteína de fusión (F), las cepas de NDV se clasifican en clase I o II. Las cepas de clase I no son virulentas en pollos, mientras que las cepas de clase II pueden ser lentogénicas, mesogénicas o velogénicas. La clase II se subdivide en al menos 18 genotipos del I al XVIII (2). Varios brotes han sido observados en el Perú en los últimos años, pero la información con respecto a qué genotipos están circulando es escasa.
En 2011, 9 de 10 pavos reales (Pavo cristatus) murieron en una granja zoológico de Huachipa (Lima, Perú) con síntomas nerviosos y respiratorios. El aislamiento del virus, a partir de hisopados orales y cloacales, se realizó en huevos embrionados libres de patógenos específicos (SPF) de nueve días de edad. El líquido alantoideo (AF) se colectó y evaluó por hemaglutinación, y la prueba de inhibición de la hemaglutinación utilizando suero hiperinmune contra NDV. El AF amplificado se aclaró, alicuotó, almacenó a -80°C, y fue cuantificado mediante ensayo en placa. La dosis letal media (LD50) se calculó en pollos SPF de cuatro semanas de edad, por diluciones seriadas de 10 en 10. El índice de patogenicidad intracerebral (IPIC) se calculó de acuerdo con protocolos estándar (3). Todos los protocolos que incluían animales fueron aprobados por el Comité Institucional para el Cuidado y empleo de Animales de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM) (Lima, Perú). La secuencia completa de NDV/peacock/Peru/2011 se amplificó por ocho pares de cebadores de oligonucleótidos sobrelapantes utilizando el kit OneStep reverse transcription-PCR (RT-PCR) (Qiagen). Los amplicones purificados se clonaron en el plásmido pGEM-T Easy (Promega) y se secuenciaron con los cebadores T7/SP6. El ensamblaje y el alineamiento fueron hechos en SnapGene y Clustal W, respectivamente.
El análisis filogenético y la comparación de secuencias se realizaron en MEGA 6.0. El análisis de secuencia mostró que el genoma de NDV/peacock/Peru/2011 es de 15,192 nucleótidos (nt) de longitud, con una inserción de 6 nt (CTCCAC) después de la posición 1647 en la región 5’ no codificante del gen de la nucleoproteína, comparado con la cepa LaSota (GenBank no. AF077761.1). El análisis filogenético de la región codificante completa del gen F coloca el aislado dentro genotipo XII en la clase II, junto con la cepa poultry/Peru/1918-03/2008 (GenBank no. JN800306.1), que fue anteriormente también aislada en el Perú (4). Una comparación de las secuencias del genoma completo mostró que la identidad genética más alta (98.7%) se observó con poultry/Peru/1918-03/2008, mientras que sólo el 82,1% se observó con la cepa LaSota.
Una comparación entre la LD50 (106.72/ml) y el número de Unidades Formadoras de Placas (UFC) reveló al menos 2 x 102 UFC por pollo son necesarios para matar al 100% (5/5 pollos), y 20 UFC son capaces de matar a 60% (3/5 pollos). El aislado mostró un IPIC de 1.80, característico de cepas NDV velogénicas. Estas características son consistentes con la presencia de un motivo de aminoácidos polibásicos (112RRQKR↓F117) en el sitio de clivaje de la proteína de fusión, que se considera un determinante molecular de virulencia para NDV (5).
La dilucidación de la secuencia completa del genoma de NDV/peacock/Peru/2011 nos ayudará a estudiar más a fondo la epidemiología y patogénesis molecular del genotipo XII y ayudará en el desarrollo de una vacuna candidata contra genotipos homólogos que están circulando en el Perú.
La secuencia completa del genoma de NDV/peacock/Peru/2011 se ha depositado en el GenBank bajo el número de acceso KR732614.
Agradecimientos
Este trabajo fue parcialmente financiado por el Programa de Ciencia y Tecnología del Perú (FINCyT), contrato 140-FINCYT-FIDECOM-PIPEI-2012.

Referencias
1. Alexander DJ. 2000. Newcastle disease and other avian paramyxoviruses. Rev Sci Tech 19:443–462.
2. Snoeck CJ, Owoade AA, Couacy-Hymann E, Alkali BR, Okwen MP, Adeyanju AT, Komoyo GF, Nakouné E, Le Faou A, Muller CP. 2013. High genetic diversity of Newcastle disease virus in poultry in West and Central Africa: cocirculation of genotype XIV and newly defined genotypes XVII and XVIII. J Clin Microbiol 51:2250–2260. doi:.10.1128/JCM.00684-13.
3. Office Internationale des Epizooties. 2012. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals, 7th ed. Office Internationale des Epizooties, Paris, France.
4. Diel DG, Susta L, Cardenas Garcia S, Killian ML, Brown CC, Miller PJ, Afonso CL. 2012. Complete genome and clinicopathological characterization of a virulent Newcastle disease virus isolate from South America. J Clin Microbiol 50:378–387. doi:.10.1128/JCM.06018-11.
5. Peeters BP, de Leeuw OS, Koch G, Gielkens AL. 1999. Rescue of Newcastle disease virus from cloned cDNA: evidence that cleavability of the fusion protein is a major determinant for virulence. J Virol 73:5001–5009.

Aviso

Este documento es una traducción no oficial hecha por FARVET S.A.C. con el objetivo de facilitar la información a personas de habla hispana. La traducción está basada en el documento original "Characterization and Sequencing of a Genotype XII Newcastle Disease Virus Isolated from a Peacock (Pavo cristatus) in Peru" de la revista Genome Announcements 3(4):e00792-15. doi:10.1128/genomeA.00792-15. El artículo original se encuentra aquí.
Fuente
Farvet
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