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Autor: Satoshi Otake - Scott Dee - Kurt Rossow - Carlos Pijoan
Introducción General
El Virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino es un patógeno
significativo económicamente en la industria porcina global de hoy día
(1). La introducción de PRRSV en hatos desprotegidos ocurre mayormente
a través de cerdos infectados (2) y semen infectado (3). Para reducir
el riesgo de ingreso de PRRSV en las poblaciones porcinas simples, los productores
de cerdos utilizan medidas estrictas para mejorar la bioseguridad en sus granjas;
sin embargo, la infección de hatos desprotegidos aún ocurre frecuentemente
a través de rutas no identificadas. Para establecer protocolos de adecuada
bioseguridad para PRRSV, primero es esencial comprender la posible transmisión
de PRRSV. Nuestros datos actuales sobre la transmisión de PRRSV por vectores
no porcinos están resumidos.
1. Agujas
Objetivos
En las granjas porcinas comerciales, los cerdos reciben numerosas inyecciones
de vacunas y antibióticos. Típicamente, los productores rara vez
cambian agujas entre cerdos individuales debido a restricciones de costo y trabajo.
Por lo tanto, condujimos un estudio para evaluar el potencial para la transmisión
de PRRSV de cerdos infectados a animales susceptibles por agujas.
Materiales y Métodos
Quince cerdos de 4 semanas de una fuente desprotegida de PRRSV fueron organizados
en 3 grupos. El Grupo 1 (n=10) fueron experimentalmente infectados con 2 ml
de PRRSV VR-2332 a una concentración de 105 TCID50/ml por ruta intranasal
(grupo infectado). En los días 5, 6, y 7 post-inoculación (pi),
un intento de transmitir PRRSV del grupo infectado al Grupo 2 (grupo centinela,
n=3) tuvo lugar. Una persona designada administró 2 ml de
vacuna (bacterina muerta de Mycoplasma hyopneumoniae ) a todos los cerdos en
el grupo infectado. Seguido a la inyección a todos los cerdos del grupo
infectado, la aguja y la jeringa fueron transferidas al lugar del grupo centinela.
La persona designada inmediatamente fue a este lugar cambiando fomites (ropa,
botas, guantes y redecilla de cabello) y duchándose, e inyectó
a todos los cerdos del grupo centinela utilizando la misma aguja. El estado
del PRRSV del grupo centinela fue monitoreado por 21 días después
de la inyección.
Resultados
La transmisión de PRRSV del grupo Infectado al grupo de cerdos Centinela
fue demostrada en 2 de 4 réplicas. El PRRSV aislado del grupo 2 de cerdos
Centinela fue secuenciado y se encontró homólogo al virus utilizado
para infectar los cerdos del grupo 1.
Conclusiones
Las agujas contaminadas pueden transmitir PRRSV a cerdos desprotegidos siguiendo
a la vacunación de animales infectados. Los productores porcinos deberían
ser alentados fuertemente a cambiar agujas entre cerdas, camadas, y corrales
de cerdos de crecimiento.
2. Fomites (ropas, botas)/Personal
Objetivos
Porque todas las rutas de ingreso del PRRSV en granjas desprotegidas no se
conocen al momento, los dueños de granjas frecuentemente requieren que
empleados y visitantes obedezcan con un estricto protocolo de sanitización
antes de ingresar. Estos protocolos van desde cambiar la ropa y el calzado,
ducha al ingreso/egreso del establecimiento, abstención de un cambio
en el contacto con los cerdos por 12-72 horas (reposo), y se refieren a ellos
comúnmente como “protocolos de bioseguridad”. A pesar de
su amplia aceptación en la industria hoy día, la base científica
para la eficacia de tales protocolos es deficiente. Por lo tanto, intentamos
evaluar la habilidad de los fomites contaminados (ropas y botas) y del personal
de transmitir PRRSV a cerdos susceptibles seguido al uso de protocolos de sanitización
específicos comúnmente practicados en la industria porcícola
de hoy.
Materiales y Métodos
Veinticuatro cerdos de 4 semanas de edad de una fuente desprotegida de PRRSV
fueron organizados en 6 grupos. Los cerdos de Grupo (n=10) fueron infectados
experimentalmente con 2 ml de PRRSV VR-2332 a una concentración de 105
TCID50/ml por ruta intranasal (grupo infectado). En los días 5, 6, y
7 pi, el personal fue expuesto a saliva, exudados nasales, heces y sangre de
todos los cerdos del grupo infectado, y se intenta transmitir PRRSV a 4 grupos
centinelas (Grupos 2-5, n=3). Estos grupos estaban organizados de acuerdo al
uso de protocolos de sanitización específicos. El Grupo 2 fue
designado como el grupo de contacto directo. Seguido al contacto con los cerdos
infectados del Grupo 1; la persona designada para este grupo no se cambió
los fomites (ropas y botas) ni se lavó las manos, antes del contacto
con los cerdos centinelas. En contraste, al personal designado para los Grupos
3-5 se les requirió un completo protocolos de sanitización específicos,
incluyendo el cambio de fomites y el lavado de manos (sistema danés/Grupo
3); el cambio de fomites, ducha y 12 horas de reposo (protocolo standard/Grupo
4); el cambio de fomites, ducha y sin reposo ( protocolo alternativo/Grupo 5).
El estado de la infección PRRSV de todos los cerdos de los grupos centinelas
fue monitoreado por 21 días seguido a la exposición.
Resultados
La transmisión de PRRSV del grupo Infectado al grupo de Contacto Directo
ocurrió en 2 de fuera de 4 réplicas. El PRRSV aislado de los cerdos
del grupo de Contacto Directo fue secuenciado y encontrado homólogo al
virus utilizado para infectar a los cerdos del grupo Infectado. La transmisión
no ocurrió entre el grupo Infectado y los grupos del protocolo de sanitización,
incluyendo el sistema Danés, el Protocolo Standard o Protocolo Alternativo.
El PRRSV infeccioso fue detectado en ropas, botas y manos contaminadas del personal
seguido al contacto con los cerdos del grupo Infectado. El virus detectado fue
secuenciado y se encontró homólogo al virus indexado. El PRRSV
no fue detectado de fomites y personal (manos, cabello, narices y amígdalas)
siguiendo los protocolos de sanitización.
Conclusiones
Las ropas, botas y manos contaminadas del personal pueden transmitir PRRSV
a cerdos desprotegidos seguido al contacto directo con animales infectados.
Bajo las condiciones establecidas por este estudio, todos los protocolos de
sanitización fueron efectivos en la prevención de la transmisión
de PRRSV por fomites o personal de cerdos infectados a animales desprotegidos.
Los productores y practicantes deberían considerar el cambio de ropas,
botas y el lavado de manos entre etapas de producción que difieren en
el estado de PRRSV en granjas o entre edificios y sitios dentro de sistemas
separados.
3. Rociado
Objetivos
El rol de la transmisión de PRRSV por rociado está aún
bajo debate al momento. Los datos publicados indican que la diseminación
de PRRSV puede ocurrir solamente sobre muy cortas distancias (0.46-1.0 m) bajo
condiciones experimentales (4, 5, 6). Sin embargo, no es conocido si resultados
similares serían obtenidos bajo condiciones de campo, involucrando grandes
poblaciones de animales y factores ambientales. Por lo tanto, fue necesario
conducir el estudio para evaluar la posibilidad de transmisión por rociado
de PRRSV bajo condiciones de campo.
Materiales y Métodos
Un total de 210 cerdos negativos de PRRSV de 5 meses de edad fueron alojados
en una instalación de terminación mecánicamente ventilada
consistente en 11 corrales. El corral 1 contenía 10 cerdos (controles
de contacto indirecto). El corral 2 quedó vacío, proveyendo una
barrera de 2.5 metros de los restantes cerdos en los Corrales 3 al 11. Dentro
de los corrales 3 al 11, 15-16 cerdos en cada corral fueron experimentalmente
infectados con PRRSV MN-301007 y 6-7 cerdos en cada corral sirvieron como controles
de contacto directo. En el día 5 pi, 2 trailers (A y B) conteniendo 10
cerdos centinelas desprotegidos de PRRSV, de 5 semanas de edad fueron ubicados
a cada lado del edificio. El Trailer A fue colocado a 1 metro de los extractores
de aire a un lado del edificio, mientras que el Trailer B fue posicionado a
30 metros de los ventiladores del otro lado. Los cerdos centinelas se quedaron
en los trailers por 72 horas consecutivas para proveer una exposición
continua a los extractores. Seguido al período de exposición,
los cerdos de cada trailer fueron llevados a uno de 2 edificios separados localizados
en el mismo sitio, a 30 y 80 metros respectivamente del cobertizo infectado.
En los edificios separados, el estado de PRRSV de los grupos centinelas fue
monitoreado por 21 días.
Resultados
La transmisión de PRRSV fue detectada en los cerdos de control de contacto
directo (día 3 pi de cerdos indexados) y los cerdos de control de contacto
indirecto (día 7 pi de cerdos indexados) en el establecimiento. El virus
aislado de los cerdos de control de contacto directo e indirecto fue secuenciado
y se encontró homólogo al virus indexado. La infección
de PRRSV no fue detectada en los cerdos centinelas de trailers A y B. Los datos
del clima para el área de la granja recolectados durante el período
de exposición sugirieron que este estudio fue conducido bajo las condiciones
creídas de sostener la supervivencia viral (baja temperatura y alta humedad);
sin embargo, no se detectó PRRSV por un vitroimpactador en un extractor
de aire emitido de la instalación infectada.
Conclusiones
Mientras el PRRSV puede ser transmitido sobre cortas distancias en el espacio
aéreo de animales infectados, la transmisión de PRRSV por rociado
entre granjas parece ser un evento infrecuente.
4. Insectos (moscas y mosquitos)
Introducción
Las rutas potenciales de transmisión de PRRSV que no habían sido
exploradas eran los insectos. Estos eran conocidos desde bastante como que servían
como vectores a ciertos patógenos porcinos (8), (9); sin embargo, los
métodos de bioseguridad practicados actualmente no regulaban la entrada
de insectos en los hatos porcinos. Ya que la infección de PRRSV resulta
en viremia prolongada en los cerdos infectados (10), y la transmisión
sanguínea al parto de PRRSV por agujas contaminadas ha sido probada,
se hipotetizó que los insectos que se alimentaban de sangre podían
ser vectores de PRRSV. Las moscas y los mosquitos son los insectos más
comúnmente vistos en las granjas porcícolas, y documentados de
ser capaces de viajar unos 10 km (11), (12). Por lo tanto, condujimos los estudios
para evaluar el potencial para las moscas y los mosquitos en la transmisión
de PRRSV.
4a. Moscas caseras
4a-1. Estudio de Transmisión
Objetivos
El objetivo de este estudio fue determinar si el PRRSV podría ser transmitido
a cerdos susceptibles por moscas caseras (Musca domestica) seguido a la alimentación
en animales infectados.
Materiales y Métodos
Un total de 300 moscas fueron autorizadas a alimentarse de un cerdo donante
virémico de PRRSV en una habitación de aislamiento en los días
5, 6, y 7 pi. Seguido de 60 segundos, la alimentación fue interrumpida,
y las moscas fueron manualmente transferidas utilizando frascos plásticos
y se les dejó alimentarse hasta la saciedad en un cerdo receptor desprotegido
alojado en una habitación separada. Para mejorar la habilidad de las
moscas a acceder la piel del cerdo, la superficie dorsal de cada cerdo fue escarificada
utilizando papel lija hasta que una leve hemorragia fue visible. Seguido al
contacto mosca-cerdo, las moscas fueron colocadas dentro de hielo seco y testeadas
de PRRSV. El estado de PRRSV en los cerdos receptores fue monitoreado por 21
días luego de la exposición a las moscas.
Resultados
La transmisión de PRRSV del cerdo donante al receptor fue demostrado
en las 3 réplicas. El ácido nucleico de PRRSV fue detectado por
PCR de moscas homogeneizadas en las 3 réplicas. El PRRSV detectado de
los cerdos receptores y las moscas homogeneizadas fue homólogo al virus
utilizado para infectar a los cerdos donantes.
Conclusiones
Las moscas caseras pueden servir como vector mecánico de PRRSV.
4a-2. Estudio de Supervivencia
Objetivos
Los objetivos de este estudio fueron determinar la duración de la supervivencia
de PRRSV en moscas caseras seguido a la alimentación en un cerdo infectado,
y determinar si el virus estaba presente en la superficie exterior o en los
órganos internos de las moscas.
Materiales y Métodos
A moscas colonizadas de laboratorio se les permitió alimentarse hasta
la saciedad en un cerdo experimentalmente infectado con PRRSV en el día
7 pi, y mantenidas vivas bajo condiciones de laboratorio. Dos subgrupos (A y
B) de 30 moscas fueron recolectadas en cada uno de los siguientes puntos de
muestreo: 0, 6, 12 y 24 horas (h) luego de alimentarse (pf). Las moscas en el
subgrupo A fueron procesadas como un homogenado de moscas enteras, mientras
los lavados de superficies externas y los órganos digestivos homogenados
fueron recolectados de las moscas en el subgrupo B. Las muestras de las moscas
fueron testeadas por PCR, VI, y una bioprueba porcina para detectar PRRSV.
Resultados
Los homogenados de moscas enteras, recolectadas a los puntos 0, 6, y 12 hs.
De alimentación, fueron positivas en los tests PCR y la bioprueba porcina.
Los órganos digestivos homogenados, recolectados a los puntos 0 y 12
hs. de post-alimentación, fueron positivos en los tests PCR y la bioprueba
porcina. Ácido nucleico de PRRSV fue detectado por el PCR de los lavados
de superficie exterior recolectados en los puntos 0, 6 y 12 hs. de post-alimentación;
sin embargo, sólo la muestra recolectada al punto 0 hs. de post-alimentación
fue infecciosa como confirmó la bioprueba porcina.
Conclusiones
El PRRSV puede sobrevivir dentro del tracto intestinal de las moscas caseras
por unas 12 horas seguido a la alimentación en un cerdo infectado, pero
sólo por un corto período de tiempo en la superficie exterior
de las moscas.
4a-3. Estudio Individual de Mosca
Objetivos
El objetivo del estudio fue determinar el número mínimo de moscas
caseras requeridas para infectar un cerdo susceptible con PRRSV.
Materiales y Métodos
El primer experimento fue determinar si las moscas individualmente podrían
hospedar PRRSV infeccioso. Consistió en un total de 13 réplicas,
cada una conteniendo una mosca individual que se había alimentado en
un cerdo experimentalmente infectado con PRRSV. El lavado de la superficie externa
y el homogenado de intestinos fueron colectados de cada mosca, y testeados de
PRRSV. El segundo experimento fue determinar si una mosca individualmente podría
transmitir PRRSV a un cerdo susceptible seguido a la alimentación en
un cerdo infectado. Consistió en un total de 10 réplicas. El contacto
mosca-cerdo (la exposición de una sola mosca por cerdo) fue conducido
utilizando el protocolo de transmisión de vector manual como se describió
anteriormente.
Resultados
En el primer experimento, PRRSV infeccioso fue detectado por PCR y VI o bioprueba
porcina del intestino homogenado (92.3%) y el lavado de la superficie externa
(7.7%). En el segundo experimento, la transmisión de PRRSV por exposición
a una sola mosca fue demostrada en 2 de 10 réplicas.
Conclusiones
Una mosca casera individualmente puede hospedar suficiente PRRSV en su tracto
intestinal, y podría mecánicamente transmitir el virus a cerdos
susceptibles.
4b. Mosquitos
4b-1. Estudio de Transmisión
Objetivo
El objetivo de este estudio fue determinar si el PRRSV podría ser mecánicamente
transmitido a cerdos susceptibles por mosquitos seguido a la alimentación
en animales infectados.
Materiales y Métodos
Un total de 300 mosquitos (Aedes vexans) fueron autorizados a alimentarse en
cerdos infectados con PRRSV y en cerdos susceptibles, utilizando un protocolo
de transmisión de vector manual como se describió antes. Un total
de 4 réplicas fueron conducidas.
Resultados
La transmisión del donante al cerdo receptor fue demostrada en 2 de
4 réplicas. El
PRRSV fue detectado por PCR o bioprueba porcina de mosquitos homogenados en
las 4 réplicas. El PRRSV detectado de los cerdos receptores y los mosquitos
homogenados fue homólogo al virus indexado.
Conclusiones
Los mosquitos (Aedes vexans) pueden servir como vectores mecánicos de
PRRSV.
4b-2. Estudio de Vector Biológico
Objetivos
El objetivo de este estudio fue determinar si los mosquitos (Aedes vexans)
podrían servir como vectores biológicos de PRRSV. Específicamente,
el estudio evaluó la duración de la viabilidad y la locación
de PRRSV en mosquitos, y evaluó si el PRRSV podría ser transmitido
a un cerdo susceptible por medio de mosquitos seguido a un período de
incubación de 7 a 14 días, luego de alimentarse en un cerdo infectado.
Materiales y Métodos
Para el primer experimento, a un total de 100 mosquitos se les permitió
alimentarse en un cerdo experimentalmente infectado con PRRSV en el día
7 pi, y mantenidas vivas bajo condiciones de laboratorio. Un grupo de 10 mosquitos
fueron recolectados en los puntos de post-alimentación 0, 6, 12, 24,
48, 72 horas; 5, 7, 10 y 14 días (d). El lavado de la superficie externa,
las glándulas salivales, la carcasa torácica, y el homogenado
de intestinos fueron recolectados de cada grupo de mosquitos, y testeados de
PRRSV. Para el segundo experimento, a un total de 30 mosquitos se les permitió
alimentarse en un cerdo infectado experimentalmente con PRRSV, y mantenidos
vivos bajo condiciones de laboratorio. En cada punto de post-alimentación
de los días 7, 10 y 14, a un grupo de 10 mosquitos se les permitió
alimentarse en un cerdo susceptible.
Resultados
En el primer experimento, PRRSV infeccioso fue detectado por tests PCR y la
bioprueba porcina sólo del homogenado de intestinos recolectados en los
puntos de post-alimentación de 0 y 6 hs. En el segundo experimento, la
transmisión de PRRSV al cerdo susceptible no ocurrió por medio
de los mosquitos seguido al período de incubación de 7 a 14 días,
luego de alimentarse de un cerdo infectado.
Conclusiones
El PRRSV puede sobrevivir dentro del tracto intestinal de los mosquitos por
unas 6 horas seguido a la alimentación en un cerdo infectado; sin embargo,
está restringido solamente al tracto intestinal, y no se replica o disemina
sistemáticamente dentro de los cuerpos de los mosquitos. Por lo tanto,
los mosquitos (Aedes vexans) no son probables para servir como vectores biológicos
del PRRSV.
Conclusiones Generales
- Las agujas pueden transmitir el PRRSV a cerdos desprotegidos siguiendo
a la vacunación de animales infectados.
- Los fomites (ropas, botas) y las manos del personal pueden transmitir el
PRRSV a cerdos desprotegidos seguido al contacto directo con animales infectados.
- La transmisión por rociado del PRRSV sobre grandes distancias es
un evento infrecuente bajo condiciones de campo.
- Los insectos (moscas y mosquitos) pueden servir como vectores mecánicos
del PRRSV.
- Los mosquitos (Aedes vexans) no son probables como para servir como vectores
biológicos del PRRSV.
Satoshi Otake, Scott Dee, Kurt Rossow & Carlos Pijoan
Centro de Erradicación de Enfermedades Porcinas, Universidad de Minnesota,
St. Paul.
Laboratorio de Diagnóstico Veterinario de Minnesota, St. Paul.
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Autor: Satoshi Otake - Scott Dee - Kurt Rossow - Carlos Pijoan
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