Una nueva asociación: histomoniasis sistémica ocasionada por enfermedad de marek

Los protozoarios flagelados son muy comunes en el tracto digestivo de las aves, pero solo algunos son responsables de enfermedad y pérdidas económicas. Los protozoarios flagelados más comúnmente reportados son: Histomonas meleagridis, Trichomonas spp y Giardia spp. Histomonas meleagridis es un parásito protozoario extracelular, flagelado, ameboide y es el agente causal de la Histomoniasis, Enterohepatitis o Enfermedad de cabeza negra. Afecta principalmente a aves Galliformes.^1,2,3

Esta enfermedad se caracteriza anatómicamente por una tiflohepatitis  caseonecrótica y clínicamente por cianosis dela cresta, barbillas y por diarrea amarillo azufre. La forma más importante de transmisión es a través de los huevos del nemátodo Heterakis gallinarum, un parásito frecuente en los ciegos de aves Galliformes, que actúa como verdadero hospedador intermediario.^1,2,3,4,5

Histomonas meleagridis es muy sensible a las condiciones medio ambientales, sin embargo dentro de los huevos de Heterakis gallinarum o en la lombriz de tierra puede permanecer y ser infectivo por muchos años en el medio ambiente.^3,4,5

La patogenicidad de Histomonas meleagridis varía marcadamente entre especies. ⁶ Los pavos (Meleagris gallopavo) son particularmente susceptibles y la infección provoca inflamación, ulceración del ciego y necrosis hepática severa con mortalidad superior al 90%. Por otra parte, los pollos (Gallus gallus) son menos susceptibles y desarrollan lesiones en el ciego que se resuelven rápidamente, la mortalidad se ha informado entre el 10 al 20%;  las aves recuperadas albergan al protozoario y sonportadoras sanas incrementando el porcentaje de aves de desecho y mala uniformidad.^4,5,6 

En Gallus galllus, los brotes recientes de Histomoniasis en pollo de engorda se han relacionado con enfermedades inmunosupresoras en donde están afectados los linfocitos T. ^4,5 El objetivo del presente trabajo es describir dos casos de Histomoniasis en aves de combate y explicar los mecanismos que determinan la presentación sistémica de la enfermedad y su co-infección con la Enfermedad de Marek. 
 

Se remitieron dos casos de aves de combate identificados como 1 y 2 al laboratorio de Patología Aviar del Departamento de Medicina y Zootecnia de Aves de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la UNAM con la siguiente historia clínica: 

Caso 1. Se reciben tres gallos de combate de provenientes de una gallera con 300 ejemplares. Los signos clínicos solo se observan en aves adultas, y estos se caracterizan por pérdida de peso, diarrea blanca-verde, ataxia, patas abiertas y alas caídas. El tratamiento aplicado es trisulfas y vitaminas sin obtener resultados. La mortalidad acumulada fue de 10 aves por semana. Las aves se encuentran alojadas en jaulas sobre piso de tierra y conviven con otras especies de aves (Guajolotes); con respecto al programa de vacunación estaban inmunizadas contra el virus de la Enfermedad de Newcastle.

Caso 2. Se reciben dos gallos de combate provenientes de una gallera con 40 ejemplares (30 adultos y 10 jóvenes), Los signos clínicos que muestran las aves son: baja de peso, pluma erizada, postración, opacidad corneal, estertor bronquial, diarrea, incoordinación y postración. La morbilidad total es del 20%. El tratamiento aplicado fue amoxicilina y enrofloxacina sin buenos resultados. En el programa de vacunación esta incluida la inmunización contra el virus de la Enfermedad de Newcastle a los 3 días y la Triple Aviar al mes de edad; la desparasitación se realiza cada 5 meses y el alimento proporcionado es de tipo comercial. 
 

Caso 1. Sistema digestivo. Hígado: el lóbulo hepático izquierdo presenta un nódulo de 3cm de diámetro de color blanco, firme al tacto y de superficie lisa, también se observan áreas multifocales de color blanco de 0.5 cm de diámetro y en la vesícula biliar la pared esta engrosada y disminuida de tamaño (2/3). Intestino delgado: en la luz se observan estructuras parasitarias de 5 cm de largo consistentes con Ascaridia galli 2/3.

Sacos ciegos: están distendidos por presencia de gas y abundante cantidad de estructuras parasitarias de menos de 1cm de largo consistentes con Heterakis sp. Sistema nervioso. Nervio ciático y plexos braquiales engrosados y de color amarillo 2/3. Músculo esquelético. Se encuentra atrofia de masas musculares 2/3.

Caso 2. Sistema digestivo. Hígado: se observa aumentado de tamaño, y con múltiples áreas de color blanco, firmes al tacto y de bordes mal definidos 2/2. Sacos ciegos: se observan distendidos por la presencia de gas, así mismo la pared se encuentra engrosada y con moderada cantidad de exudado caseoso en la luz 2/2. Sistema nervioso. El nervio ciático se encuentra engrosado y con pérdida de las estriaciones 1/2. Sistema respiratorio. Los pulmones exhiben áreas multifocales de color blanco, firmes al tacto y de bordes mal definidos1/2. Sistema linfoide. Bazo: se observa aumentado de tamaño y con áreas multifocales de color blanco que profundizan al corte 1/2.

Caso 1 Sistema nervioso. Nervios periféricos: Alrededor de algunos vasos sanguíneos se aprecian agregados de células neoplásicas linfoides de núcleo pequeño a grande, hipercromático y con escasa cantidad de citoplasma ligeramente eosinofílico. También se observan axones con vacuolas  (desmielinización) y proliferación de células de Schwann. Encéfalo: Alrededor de vasos sanguíneos se observan agregados de células neoplásicas linfoides, dichas células se disponen de manera angiocéntrica y presentan núcleo grande a pequeño, hipercromático, de cromatina fina granular, nucléolo prominente y moderada anisocariosis, Se observa escasa cantidad de figuras mitóticas (0-1) por campo aleatorio de 40X. Sistema digestivo. Hígado: Alrededor de triadas porta se observan extensos agregados de células neoplásicas linfoides con características similares a las observadas en encéfalo y nervio periférico. En otras zonas también se aprecia extensas zonas de necrosis coagulativa del parénquima hepático entremezcladas con estructuras parasitarias redondas a triangulares de 12-21 micrómetros de diámetro, ligeramente eosinofílicas y que se encuentran en vacuolas de tejido.

Caso 2. Sistema nervioso. Nervios periféricos: Alrededor de algunos vasos sanguíneos se aprecian agregados de células neoplásicas linfoides de núcleo pequeño  hipercromático y con escasa cantidad decitoplasma ligeramente eosinofílico entremezclado con las células linfoides se observan axones que muestran vacuolización (desmielinización) y proliferación de células de Schwann. Sistema respiratorio. Pulmón: A nivel interlobulillar se aprecian grandes agregados de células inflamatorias compuestas por heterófilos y linfocitos que se encuentran entremezclados con grandes áreas de necrosis licuefactiva que se extiende a algunos parabronquios. Dentro de esta reacción se aprecia abundante cantidad de estructuras parasitarias que muestran forma esférica a triangular, espumosas, que miden 12-21 micrometros y se encuentran rodeados por vacuolas de tejido. Algunos vasos sanguíneos presentan necrosis fibrinoide, parásitos en la pared y en la luz del vaso. 

Sistema digestivo. Hígado: Alrededor de triadas porta se observan extensos agregados de células neoplásicas linfoides concaracterísticas similares a las observadas en nervio. Alrededor de las triadas porta se observan extensas zonas de necrosis entremezclada con células inflamatorias compuestas por linfocitos, heterófilos y macrófagos, inmersas en esta reacción se aprecian estructuras parasitarias que presentan las mismas características que en pulmón. Algunas áreas muestran proliferación de tejido conectivo fibroso aumento en la cantidad de conductos biliares y colestasis intraductal y canalicular. Sistema linfoide. Bazo: Se encuentran extensos agregados de células linfoides inmaduras y maduras que no forman folículos linfoides. Dichas células presentan núcleo grande a pequeño, policromático, de cromatina fina granular, nucléolo prominente y marcada nisocariosis, también se observan abundantes figuras mitóticas (3-4) por campo aleatorio de 40X, también se encuentran poblaciones de linfocitos que muestran núcleo grande, triangular, hipercromático, con abundante cantidad de citoplasma e intensamente eosinofílico (compatibles con células de Marek). 

En el cuadro 1 se presenta un resumen de la distribución de las lesiones de Histomoniasis y Marek encontradas en los 2 casos.

Los resultados de exámen coproparasitológico mostraron 36,000 ooquistes por gramo de heces de coccidias de las cuales el 60% correspondió a Eimeria acervulina y el 40% a Eimeria tenella. Se encontró gran cantidad de parásitos adultos y huevos de Heterakis gallinarum, Ascaridia galli y Capillaria sp. De los cortes histológicos de hígado y pulmón se realizó la tinción especial de Grocott y ácido periódico de Schiff (PAS) para confirmar a Histomonas melagridis y descartar otros agentes infeccioso como los hongos. 

Los cambios macroscópicos, la localización de lesiones y las características microscópicas de las células linfoides permiten establecer el diagnóstico de enfermedad de Marek y deben ser diferenciadas de otros agentes virales que pueden causar procesos linfoproliferativos como lo son los retrovirus (Complejo Leucosis/Sarcoma). Por otro el tipo de lesión observada en hígado y pulmón aunado a las características estructurales de los parásitos observados son consistentes con Histomoniasis.

Con respecto a la presentación Histomoniasis es necesario mencionar su particular relevancia en pavos, pues el cuadro clínico es severo y el grado de mortalidad es alto mientras que usualmente los pollos se recuperan de la infección (Cuadro 2),4,6 por lo que es importante revisar cuales son los factores que involucran la presentación y su diseminación sistémica en los casos remitidos. 

Una producción de aves con sistema de crianza extensivo o alojamiento tipo freerange tiene que ver con la re-emergencia de infecciones parasitarias tales como Histomoniasis;1,6 esto debido a que las aves se encuentran en contacto directo con la tierra en donde se encuentran los huevos embrionados de H. gallinarum. Los nemátodos pueden permanecer más de tres años en el suelo y ser positivos para H. meleagridis, 2,4,5 es importante mencionar que H. gallinarum es el único reservorio conocido de H. meleagridis y es la única fuente de  infección del protozoario en Gallus gallus, no así, en los pavos en donde la transmisión también es lateral y se puede diseminar rápidamente a través del contacto normal entre pavos o con sus heces en ausencia total del parásito de los ciegos. 4,5,6,7 Así que en este tipo de sistemas de producción es trascendental enfatizar en la prevención y control de Heterakis 4,6,7 así mismo, no es recomendable la crianza combinada de pollos y pavos, ya que los pavos son más susceptibles y hacen prevalente la enfermedad.1

La transmisión de H. melagridis también puede realizarse a través de la lombriz de tierra mediante la ingestión de huevos de H. gallinarum infectados con H. meleagridis y estos a su vez pueden ser consumidos por un huésped (Figura 3). ^2,3,4,5,6,7 Los pollos son menos susceptibles a las infecciones intestinales por Histomonas ya que tiene una respuesta inmune cecal efectiva al liberar citocinas pro-inflamatorias como IL-1β, IL-6 y CXCL2 resultando en una baja multiplicación del parásito y evitando su diseminación a través de los vasos sanguíneos hacia el hígado, en contraste con los pavos en donde falla este tipo de respuesta innata y la diseminación del parásito es común. Esto parece ser el factor crucial en la determinación de la patogénesis y mortalidad en esta enfermedad. 6 Se ha mostrado que los linfocitos TCD4 son importantes en la resistencia a la infección contra este parásito; ya que se comprobó su presencia en grandes cantidades en la lámina propia de los ciegos infectados con Heterakis gallinarum e Histomonas meleagridis y una respuesta de células helper Th1, así mismo se observó un incremento de gamma interferón y destrucción severa de la mucosa. Los niveles de anticuerpos en los pollos se incrementaron más que en los pavos, soportando también la evidencia de una eficiente respuesta adaptativa de tipo humoral.^6,8

En el hígado de los pavos se presentó una respuesta inmune no controlada evidenciada por la sobre regulación de IL-1, CXCli2, IFN, IL-13, IL-4 e IL-10 6ª diferencia de los pollos.⁶

Las Histomonas se propagan desde el ciego al hígado por el sistema portal que consiste de venas coccígeo-mesentéricas, mesentéricas común, pancreático-duodenal y esplénicas que convergen en el hígado; pueden a riñón, bazo y pulmón por vía sanguínea; el establecimiento del parásito en la bolsa de Fabricio puede llegar sin entrar a la circulación sanguínea.4,5,9 En la presentación sistémica de Histomoniasis en aves de combate contribuyen también factores como el estado inmunológico, la presencia de coccidias y ciertas bacterias.^6,10,11

En lo referente al estado inmunológico de las aves remitidas, estas se encontraron con inmunosupresión severa debido a que cursaron con EM. Generalmente la causa de muerte en estos casos se asocia a infecciones bacterianas o virales secundarias ya que la inmunosupresión inducida es por linfocitolisis, sin embargo lo interesante es que no hubo complicación bacteriana o viral y la muerte se asocio a daño hepático en el caso 1 y hepático- pulmonar por Histomoniasis en el caso 2.

Con Coccidiosis pueden pasar dos situaciones: 1) que Histomonas destruya el medio ambiente de Eimeria tenella en el ciego (por lo tanto reducir su habilidad para reproducirse) o, 2) que la severidad de la infección de Histomonas agrave una infección leve de Eimeria tenella e incremente la mortalidad por coccidiosis.^2,5,10 Así mismo las enfermedades inmunosupresoras como la EM pueden interferir en el desarrollo de la inmunidad contra coccidias y producir una coccidiosis severa.10,11 Por lo cual inferimos que la participación del virus de la enfermedad de Marek ocasionó una presentación sistémica de H. meleagridis. Es importante mencionar que la virulencia de Histomonas en pavos y pollos se incrementa con la presencia de ciertas bacterias como Escherichia coli, Clostridium perfringens, o Bacillus subtilis que se encuentren presentes en el ciego; en pollos son importantes además otras especies de bacterias.^4,5,10 (Figura 3). Con respecto a esto, no hubo evidencia de patógenos bacterianos en los casos remitidos.

El establecimiento y la diseminación de H. meleagridis en las dos unidades de producción de aves de combate remitidas, es debido al sistema de producción que se  practica y la crianza combinada de aves de combate con pavos y el cuadro clínico se agravó por la infección con el virus de la Enfermedad de Marek que permitió la multiplicación exacerbada del protozoario, la invasión vascular y la diseminación al hígado y al pulmón